ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ПАТОГЕННЫХ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ Российский патент 2002 года по МПК C12Q1/10 C12N1/20 

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано при бактериологическом исследовании различных клинических материалов и объектов внешней среды.

Известно использование для выделения патогенных энтеробактерий ряда питательных сред: Эндо, Плоскирева, висмут-сульфит-агар, Макконки агар, дезоксихолат-цитрат агар [1].

Недостатком этих сред являются многокомпонентность состава, необходимость введения в их состав дорогостоящих компонентов, а также трудности в приготовлении.

Наиболее близким решением задачи того же назначения к заявленному изобретению по совокупности признаков является среда Левина, содержащая источник азотистого питания (пептон) агар, лактозу, эозин, метиленовый синий, натрия фосфат [2].

К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического решения при использовании известной среды, принятой за прототип, является слабая селективность, она не подавляет роение протеев, которые образуют вуалеобразный налет по всей поверхности среды (Н-форма), что делает невозможным выделить патогенные энтеробактерии на данной среде в чистой культуре.

Недостатком среды является также то, что она не позволяет дифференцировать патогенные микроорганизмы от непатогенных, не разлагающих лактозу. Кроме того, известная среда не обладает достаточной буферной емкостью и поэтому образующаяся в результате сбраживания непатогенными микроорганизмами лактозы кислота может диффундировать в соседние участки среды, в результате чего не сбраживающие лактозу патогенные энтеробактерии изменяют свою окраску, что ухудшает дифференцирующие свойства среды.

Задача предлагаемого изобретения - повышение селективных и дифференцирующих свойств среды.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что предлагаемая среда дополнительно содержит сахарозу, в качестве источника азотистого питания содержит панкреатический гидролизат рыбы с содержанием хлористого натрия 0,3-1,2%, в качестве буфера - трис (оксиметил) аминометан при следующем соотношении компонентов, г/л:
Панкреатический гидролизат рыбы с содержанием хлористого натрия 0,3-1,2% - 8-14
Агар - 8-12
Лактоза - 7,0-8,0
Сахароза - 7,0-8,0
Эозин - 0,55-0,65
Метиленовый синий - 0,06-0,07
Трис (оксиметил) аминометан - 0,35-0,65
Вода дистиллированная - Остальное
Использование панкреатического гидролизата рыбы в качестве азотистого питания с указанным содержанием солей подавляет роение протеев, которые на предлагаемой среде растут в виде изолированных О-форм колоний, тем самым создается возможность выделения патогенных энтеробактерий в чистой культуре.

Внесение в среду дополнительно сахарозы обеспечивает, четкую дифференциацию патогенных энтеробактерий, не разлагающих лактозу и сахарозу, от непатогенных бактерий, не разлагающих лактозу, но разлагающих сахарозу.

Введение в среду трис(оксиметил) аминометана, вместо натрия фосфата, повышает буферные свойства среды, что способствует тому, что кислота, образующаяся в результате сбраживания углеводов непатогенными микроорганизмами, не диффундирует в соседние участки среды, в результате чего патогенные микроорганизмы, не сбраживающие углеводы, не изменяют свою окраску, они бесцветны и прозрачны и их можно легко отличить от окрашенных в темно-фиолетовый цвет колоний непатогенных энтеробактерий.

Среду получают следующим образом.

Пример 1. К 10 кг белкового сырья (фарш рыбы) добавляют 20 л водопроводной воды, смесь перемешивают в течение 10-15 мин, нагревают до 48-50^oС, вносят 1,1 кг фарша поджелудочной железы крупного рогатого скота или 0,3 кг панкреатина и ведут гидролиз в течение 5-6 часов до содержания аминного азота 0,5-0,6%. По окончании гидролиза смесь кипятят 10-15 мин и фильтруют. Фильтрат подщелачивают водным раствором аммиака до pH 8,2-8,5, кипятят 10-15 мин и фильтруют. Фильтрат упаривают до 22-25% сухих веществ и высушивают.

Полученный сухой панкреатический гидролизат рыбы, содержащий 0,3-1,2% хлористого натрия, в количестве 8 г растворяют в 1 л дистиллированной воды, далее последовательно растворяют 8,0 г агара, 7,0 г лактозы, 7,0 г сахарозы, 0,55 г эозина, 0,06 г метиленовый сини, 0,35 г трис(оксиметил) аминометана. Смесь нагревают до полного расплавления агара, кипятя 1-2 мин, охлаждают до 45-50^oС, разливают в стерильные чашки Петри, чашки подсушивают в термостате при 37±1^oС в течение 90-120 мин. Контроль качества среды осуществляют путем посева тест-штаммов E. Coli 168/59, Sh.Flexneri 1A, S.Typhi H 901, Pr.Vulgaris Hxl9, Pr.Mirabilis 392, Serratia marcescens 1.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 1 л воды растворяют 11 г панкреатического гидролизата рыбы, 10 г агара, 7,5 г лактозы, 7,5 г сахарозы, 0,6 г эозина, 0,065 г метиленовой сини, 0,5 г трис(оксиметил)аминометана. Далее согласно примеру 1.

Пример 3. Отличается от примера 1, 2 тем, что в 1 л воды растворяют 14 г панкреатического гидролизата рыбы, 12 г агара, 8 г лактозы, 8 г сахарозы, 0,065 г эозина, 0,07 г метиленовой сини, 0,65 г трис (оксиметил) аминометана. Далее по примеру 1.

Результаты бактериологического контроля на предлагаемой и известной средах представлены в таблице.

Из данных таблицы видно, что предлагаемая среда имеет преимущество, так как на ней подавляется роение протеев, которые растут в виде изолированных 0-форм колоний, что обеспечивает выделение из микробной ассоциации патогенных энтеробактерий в чистой культуре. На известной же среде протеи растут в виде Н-формы, вследствие чего происходит феномен роения, т.е. сплошной слизистый газон, покрывающий всю поверхность чашки, что делает невозможным выделение из микробной ассоциации патогеннных микроорганизмов в чистой культуре. Кроме того, предлагаемая среда обеспечивает четкую дифференциацию лактозонегативных патогенных микроорганизмов от лактонегативных непатогенных микроорганизмов, которые способны в отличие от патогенных ферментировать сахарозу, введенную в состав среды, что показано в таблице на примере штамма Serratia marcescens. На предлагаемой среде данный штамм образует темно-фиолетовые колонии и их легко отличить от бесцветных колоний патогенных бактерий, а на известной среде - те и другие колонии бесцветные.

Представленные преимущества предлагаемой среды повышают эффективность диагностики при бактериологических исследованиях клиническогго материала на энтеробактерии.

Источники информации
1. Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней. Под ред. Н.И. Жукова-Вережникова Москва, Медгиз.1962 том 1. Стр. 312-313.

2. Там же (прототип).

Изобретение относится к клинической микробиологии. Может быть использовано при бактериологическом исследовании различных клинических материалов и объектов внешней среды. Предлагаемая среда содержит агар, лактозу, метиленовый синий, эозин, дистиллированную воду, сахарозу, в качестве источника азотистого питания пакреатический гидролизат рыбы с содержанием хлористого натрия 0,3-1,2%, а в качестве буфера - трис(оксиметил)аминометан при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды: панкреатический гидролизат рыбы с содержанием хлористого натрия 0,3-1,2% 8-14, агар 8-12, сахароза 7,0-8,0, лактоза 7,0-8,0, эозин 0,55-0,65, метиленовый синий 0,06-0,07, трис(оксиметил)аминометан 0,35-0,65. Среда обладает повышенными селективными и дифференцирующими свойствами. Это позволяет повысить эффективность диагностики патогенных энтеробактерий. 1 табл.

Питательная среда для выделения патогенных энтеробактерий, содержащая источник азотистого питания, агар, лактозу, метиленовый синий, буфер, эозин, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит сахарозу, в качестве источника азотистого питания - панкреатический гидролизат рыбы с содержанием хлористого натрия 0,3-1,2%, а в качестве буфера - трис(оксиметил)аминометан при следующем соотношении компонентов, в г/л дистиллированной воды:
Панкреатический гидролизат рыбы с содержанием хлористого натрия 0,3-1,2% - 8-14
Агар - 8-12
Сахароза - 7,0-8,0
Лактоза - 7,0-8,0
Эозин - 0,55-0,65
Метиленовый синий - 0,06-0,07
Трис(оксиметил)аминометан - 0,35-0,65