СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗА Российский патент 2004 года по МПК A61K9/127 A61K31/7048 A61K38/05 A61K31/425 A61P31/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к лечению бруцеллеза.

Известен способ лечения бруцеллеза антибиотиками.

Недостатком этого способа является снижение эффективности в лечении данной инфекции ранее применяемых антибиотиков, связанное с их низкой способностью проникать внутрь клетки и с развивающейся резистентностью бруцелл к ним. Кроме того. при бруцеллезе наблюдается выраженное угнетение клеточного иммунитета и неспецифической резистентности организма, что приводит к накоплению в фагосомах жизнеспособных бруцелл, способных к размножению, и, как следствие, к появлению рецидивов болезни и развитию хронического инфекционного процесса. Длительный курс антибиотикотерапии еще более усиливает иммунодепрессию.

Известен способ лечения бруцеллеза, в котором антибиотики применяются в сочетании с иммуномодуляторами (Таран И.Ф., Швецова Н.М., Сафронова В.М. Влияние иммуномодуляторов на развитие инфекционного и вакцинального процессов, а также на эффективность лечебных препаратов при бруцеллезе // ЖМЭИ.- 1993.- №6.-C.88-89: Thornes R.D. The energy of chronic human brucellosis //J. Irish Med. Assoc. - 1977.-V. 70.- P. 480-483). Такой способ позволяет воздействовать на иммунную систему макроорганизма. Применяемые иммуномодуляторы активизируют фагоцитарные клетки и стимулируют неспецифическую резистентность организма, но, однако, зачастую и при комплексном применении антибиотиков и иммуномодуляторов наблюдается недостаточная эффективность проведенной терапии, возникают рецидивы и переход болезни в хроническую форму.

Технической задачей изобретения является повышение эффективности лечения бруцеллеза.

Сущность изобретения заключается в том. что заявляемый способ лечения бруцеллезной инфекции основан па применении иммуномодулятора и антибиотика, включенных в общую липосомальную везикулу.

Липосомальные формы лекарств в настоящее время применяются для лечения инфекционных заболеваний. Липосомы позволяют доставлять лекарство к клеткам-мишеням, способствуют преодолению мембранно-клеточных барьеров. Использование их в качестве носителей лекарств обеспечивается уникальностью их совокупных свойств, таких как отсутствие токсичности, иммуногенности и аллергических реакций организма в ответ на введение липосом, а также их биосовместимость, биодеградируемость и способность пролонгировать действие иммобилизованных в них веществ с доставкой последних внутрь клеток [3]. В макроорганизме липосомальные антибиотики захватываются клетками мононуклеарной фагоцитарной системы, а в органах, содержащих большое количество макрофагов, создается повышенная концентрация препарата, причем на более длительный промежуток времени, чем при использовании свободного антибиотика.

В настоящее время липосомальные формы антибиотиков применяются при лечении бруцеллезной инфекции (Тихонов Н.Г., Ротов К.А., Перепелкин А.И. Липосомальный гентамицин в лечении экспериментального бруцеллеза // Проблемы биологической и экологической безопасности: Междунар. конф. - Оболенск, 2000.- С. 95-96: Vitas A.I., Diaz R., Gamazo C. Protective effect of liposomal gentamicin against systemic acute murine brucellosis // Chematherapy. - 1997.- V.43. №3. - P. 204-210).

Технический результат заявляемого способа, а именно увеличение эффективности лечения бруцеллеза, обеспечен за счет применения дополнительно в лечении бруцеллеза иммобилизованных в общую липосомальную везикулу антибиотика (азитромицина или пефлоксацина) с иммуномодулятором (ликопидом или левамизолом), что является существенным отличительным признаком и критерием патентоспособности “новизна”.

Заявляемый способ осуществлялся следующим образом.

Проводили изучение действия антибактериальных (азитромицина, пефлоксацина) и иммуномодулирующих (ликопида, левамизола) средств, эффективных при бруцеллезной инфекции и различающихся механизмом действия, на результаты лечения бруцеллеза.

Применение пефлоксацина, азитромицина, ликопида, левамизола и липосом при лечении бруцеллеза известно, но только в заявляемом способе используются ликопид или левамизол, иммобилизованные в общие липосомальные везикулы с пефлоксацином или азатромицином для лечения хронической бруцеллезной инфекции.

Липосомы готовили из фосфатидилхолина, холестерина и дицетилфосфата (“Sigma”, США) в молярных соотношениях 7:2:1. Для получения “пустых” липосом использовали метод “выпаривания в обращенной фазе” [4]. Иммуномодуляторы и антибиотики включали в липидные везикулы путем “замораживаиия-оттаивания” [5]. Липосомы с иммобилизованным веществом отделяли от свободного препарата диализом против фосфатно-солевого буфера, рH 7,4. Количество связанных лекарственных средств определяли методом серийных разведений [2] после разрушения липосом 1% раствором дезоксихолата натрия при 70±1°С. Для лечения использовали липосомы с высоким содержанием лечебных препаратов, включение которых в липосомальные везикулы составляло 70,1±3,3%. Электронно-микроскопический контроль образования липосом осуществляли при исследовании как нативных препаратов липосом, так и их ультратонких срезов [1].

Эффективность липосомальных форм иммуномодуляторов и антибиотиков в лечении бруцеллеза изучали на белых мышах, чувствительность которых к брунеллам наиболее близка к чувствительности организма человека. Это позволяет экстраполировать полученные в опытах результаты на клинические условия. Хроническую бруцеллезную инфекцию моделировали путем подкожного введения белым мышам высоковирулентного штамма Brucella melitensis 565 в дозе 0.5·10⁵ микробных клеток в 0,5 мл 0.9% хлорида натрия, рН 7,2. Лечение начинали с 21 суток после инфицирования и проводили 2 курсами с интервалом 10 суток. Животным 1 группы (контрольная) лечение не проводили; биологическим моделям 2 и 3 групп вводили только антибиотик; 4, 5, 6 и 7 групп - антибиотик и иммуномодулятор в свободной форме; 8, 9, 10 и 11 групп - антибиотик и иммуномодулятор, иммобилизованные в общую липосому (см. таблицу).

Лекарственные вещества белые мыши получали перорально, азитромицин (“Сумамед”, Плива, Республика Хорватия) курсовой дозой 2,6 мг/мышь, пефлоксацин (“Абактал”. Лек л.д., Любляна, Словения) - 20 мг/мышь (антибиотики применяли в субтерапевтических дозах), левамизол (“Декарис”, Гедеон Рихтер А.О., Будапешт, Венгрия) - 50 мкг/мышь, ликонид (ЗАО Пептек, Москва) - 100 мкг/мышь. Препараты в свободной форме животные получали ежедневно, при лечении азитромицином курсовую дозу всех используемых с ним лекарственных средств вводили в течение 4 суток, при терапии пефлоксацином - в течение 10 суток. Липосомальные формы лекарств биологическим моделям вводили 1 раз в 48 часов. Курсовую дозу липосом, содержащих азитромицин с одним из иммуномодуляторов, мыши получали в 2 приема, а липосом, содержащих пефлоксацин с иммуномодулятором, в 5 приемов.

Животных исследовали через 14 суток после окончания каждого курса лечения, поскольку на 10-12 сутки после завершения антибиотикотерапии в случае сохранения жизнеспособных бруцелл в клетках ретикулоэндотелиальной системы белых мышей происходит выход микробов в кровяное русло, и наблюдается активизация инфекции. О степени освобождения организма экспериментальных животных от бруцелл судили по данным бактериологического анализа, который проводили путем посева гомогенизированных паховых, аксиллярных, подчелюстных, парааортальных лимфоузлов и селезенки, взятых от умерщвленных животных, на агар Альбими, рН 7,2. Критерием интенсивности бактериальной обсемененности организма мышей служили индекс высеваемости - частное от деления количества органов с положительными высевами на количество всех исследованных органов; индекс обсемененности - отношение суммы баллов, характеризующих рост, к сумме возможного максимального количества баллов; количество свободных от инфекции животных.

Статистическую обработку полученных результатов проводили общепринятыми методами с определением средних арифметических, средней ошибки средних арифметических, достоверности различий. Различия считали достоверными при р<0,05.

По данным эксперимента, представленным в таблице, следует, что у животных 1 (контрольной) группы продолжался генерализованный инфекционный процесс на протяжении всего эксперимента. Во 2 и 3 группах биологических моделей, подвергшихся только ангибиотикотерапии в субтерапевтических дозах, бактериологические индексы были снижены в оба срока исследования, но оставались достаточно высокими. Свободными от инфекции оказались только 12,1±1,1% зверьков, леченных азитромицином, после 2 курса терапии.

Проведение лечения экспериментальной бруцеллезной инфекции белых мышей с использованием азитромицина или пефлоксацина в субтерапевтических дозах в комплексе со свободными формами ликопида или левамизола (4-7 группы) приводило к увеличению элиминации бруцелл из организма больных животных по сравнению с результатами лечения в режиме антибактериальной монотерапии. При этом бактериологические индексы достоверно снижались, а количество освободившихся от инфекции мышей увеличивалось.

Результаты экспериментов показали, что пероральное введение липосомальных иммуномодуляторов с антибиотиком белым мышам с бруцеллезной инфекцией способствовало более выраженному снижению интенсивности обсемененности возбудителем организма биологических моделей и в значительной степени повышало эффективность этиотропного лечения бруцеллеза. Использование в комплексном лечении экспериментального бруцеллеза всех комбинаций ликопида, левамизола, азитромицина и пефлоксацина, при включении попарно антибиотика и иммуномодулятора в общую липосому, существенно влияло на интенсивность элиминации бруцелл из организма биологических моделей. Наблюдалось более выраженное снижение индексов высеваемости и обсемененности и увеличение количества свободных от инфекции животных после окончания лечения, чем после проведенного лечения с использованием свободных форм вышеуказанных антибиотиков и иммуномолуляторов в аналогичных парах.

Лечение липосомальными везикулами, включающими азитромицин и ликопид, способствовало увеличению количества свободных от бруцелл мышей на 20,2±1,1%; везикулами, содержащими азитромицин и левамизол - на 16,4±0,9%; липосомами с пефлоксацином и ликопидом - на 22,3+1,0%; а лечение пефлоксацином и левамизолом, заключенными в общую липосому, увеличивало количество освободившихся от возбудителя животных на 18,1±0,8% по сравнению с результатами терапии с применением азитромицина или пефлоксацина с ликопидом или левамизолом в свободной форме.

Таким образом, установлено, что лечение экспериментальной бруцеллезной инфекции антибиотиком (азитромицином пли пефлоксацином) с иммуномодулятором (левамизолом или ликопидом), включенными в общую липосомальную везикулу, является более эффективным, чем лечение свободными формами аналогичных препаратов при пероральном пути их введения в организм биопробных животных.

ЛИТЕРАТУРА

1. 3акревский В.И., Ефременко В.И., Мельников В.А с соавт. Приготовление липосом, содержащих биологически активные вещества: Методические рекомендации. - Волгоград, 1982.- 23с.

2. Инструкция по определению чувствительности возбудителей опасных инфекционных заболеваний к антибиотикам и химиопрепаратам. - М., 1990.-36с.

3. Швец В.И., Краснопольский Ю.М. Липиды в лекарственных препаратах // Вестн. Акад. Мед. наук СССР. - 1990. -.№6. - С. 19-28.

4. Cafiso D.C., Petty H.R., MeConnell H. Preparation of unilamellar lipid vesicles at 37°C by vaporization method Biochim. et biophys acta.- 1981.-Vol.649.-P. 129-131.

5. Pica U. Liposomes with a large trapping capability prepared by freezing //Arch. Biochem. and Biophys. - 1981.- Vol.212.- P. 186-194

Изобретение относится к медицине, к инфекционным болезням и может быть использовано для лечения бруцеллеза. Вводят перорально иммуномодулятор и антибиотик, включенных попарно в общую липосомальную везикулу, при этом в качестве антибиотика вводят пефлоксацин или азитромицин, а в качестве иммуномодулятора - ликопид или левамизол. Данное изобретение способствует ускорению элиминации бруцелл из организма, что в свою очередь, способствует сокращению сроков лечения. 1 табл.

Способ лечения бруцеллеза, включающий пероральное введение липосом с антибиотиком, отличающийся тем, что в качестве антибиотика вводят пефлоксацин или азитромицин и дополнительно - иммуномодулятор - ликопид или левамизол, который включен попарно с указанным антибиотиком в общую липосомальную везикулу.