СПОСОБ КОНТРОЛЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКА ПРИ ЛЕЧЕНИИ БРУЦЕЛЛЕЗА Российский патент 2003 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, а именно к исследованию крови больных бруцеллезом.

Известен способ бактериологического исследования для контроля эффективности лечения бруцеллеза антибиотиками.

Недостатком этого способа является невозможность исследования органов человека на наличие бруцелл, а результаты исследования крови не всегда свидетельствуют о наличии бруцелл в организме больного.

Известен лабораторно-клинический способ исследования для контроля проводимого лечения бруцеллеза, заключающийся в постановке иммуносерологических методов: объемной реакции аглютинации, реакции непрямой гемагглютинации, опсоно-фагоцитарной реакции, реакции Кумбса, пластинчатой реакции агглютинации с антигеном Роз-Бенгала, внутриклеточной аллергической пробы Бюрне (Диагностика возбудителей опасных инфекционных болезней. - Саратов, 1998. - Т.1. - С.106-110).

Такой способ дает картину изменения общего состояния организма при лечении, но не может в полной мере свидетельствовать о бактерицидном действии применяемого антибиотика в процессе лечения бруцеллеза.

Технической задачей изобретения является повышение контроля за эффективностью действия антибиотика в процессе лечения бруцеллеза.

Сущность изобретения заключается в том, что заявляемый способ основан на постановке дополнительных тестов, используемых для контроля эффективности антибиотика в процессе лечения бруцеллеза, основанных на определении в клетках крови цитохимических показателей, а именно определении характера изменений показателей активности ферментов и биологически активных веществ - сукцинатдегидрогеназы, гликогена и катионных белков, выраженных в условных единицах.

Метаболизм нейтрофилов, являющихся одним из наиболее активных компонентов в системе гуморально-клеточной кооперации крови в борьбе с возбудителями инфекционных заболеваний, в настоящее время успешно изучается с помощью цитохимических реакций, к достоинствам которых следует отнести техническую простоту, минимальные требования к объему исследуемого материала, доступность (Пигаревский В.Е. Зернистые лейкоциты и их свойства. - М., 1978. С.128).

В настоящее время исследования с применением цитохимических методов при бруцеллезе используются для оценки активности инфекционного процесса (Сафронова В.М., Локтев Н.А., Ткаченко Л.И., Логвиненко О.В., Горбунов Н.А., Ширанович М.П. Функционально-метаболическая активность нейтрофилов крови при разных клинических формах бруцеллеза//Журн. микробиол. -1997. - 1. - С.61-63).

Технический результат заявляемого способа, а именно совершенствование контроля за эффективностью антибиотика в процессе лечения бруцеллеза, обеспечен за счет применения дополнительных тестов при исследовании крови больных бруцеллезом для определения цитохимических показателей форменных элементов крови - сукцинатдегидрогеназы, гликогена и катионных белков, выраженных в условных единицах, что является существенным отличительным признаком и критерием патентоспособности "новизна".

Заявляемый способ осуществлялся следующим образом.

Проводили поочередно изучение действия различных антибактериальных средств, обладающих высокой активностью по отношению к бруцеллам in vitro и in vivo и различающихся механизмом воздействия на бактериальную клетку, - пефлоксацина, ломефлоксацина, меропенема и азитромицина.

Исследование крови с целью определения цитохимических показателей форменных элементов крови широко известно, но только в заявляемом способе их значения используются для контроля бактерицидного действия на бруцеллы антибиотиков в процессе лечения бруцеллеза.

Действие указанных антибиотиков на функциональное состояние форменных элементов крови при лечении бруцеллезной инфекции изучали на белых мышах, чувствительность которых к бруцеллезной инфекции наиболее близка к чувствительности организма человека. Это позволяет экстраполировать полученные в опытах результаты на клинические условия. Белым мышам подкожно вводили по 0,5•10⁵ м. к. вирулентного штамма В. melitensis 565. Лечение, начиная с 21 суток после инфицирования, проводили в среднетерапевтических дозах 2 циклами с интервалом 10 суток. Контрольной группе лечение не проводили. Животных исследовали в процессе лечения - после окончания каждого цикла антибиотикотерапии и через 14 суток после завершения каждого цикла лечения.

Об эффективности препаратов судили по данным бактериологического анализа, который проводили путем посева паховых, аксиллярных, подчелюстных, парааортальных лимфоузлов и селезенки, взятых от умерщвленных животных, на агар Альбими, рН 7,2. Критерием интенсивности бактериальной обсемененности организма мышей служили индекс высеваемости (ИВ) - частное от деления количества органов с положительными высевами на количество всех исследованных органов и индекс обсемененности (ИО) - отношение суммы баллов, характеризующих рост, к сумме возможного максимального количества баллов, а также количество свободных от инфекции животных. Одновременно определяли в нейтрофилах периферической крови экспериментальных животных активность гликогена (Гл), содержание катионных белков (КБ), в лимфоцитах - сукцинатдегидрогеназы (СДГ). Исследования активных ферментов проводили по известным методикам (Сафронова В. М. , Локтев Н.А., Руднев С.М. Депонировано в ВИНИТИ, 1994, 1424, В.94, 49 с. ; Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. Пер. с англ. - М., 1969, 646 с.).

У животных контрольной группы во все сроки исследования наблюдали генерализованный инфекционный процесс, о котором судили по интенсивному росту бруцелл на питательной среде при посеве всех указанных органов.

В результате исследования установлено, что изменение цитохимических показателей коррелировало с данными бактериологического исследования. Чем выше были ИВ и ИО органов зараженных животных и меньше количество свободных от инфекции животных, тем значительнее отличались от нормы исследуемые цитохимические показатели.

У неинфицированных животных содержание КБ составляло 1,6±0,04 усл.ед.; активность СДГ - 16,52±0,1 усл.ед.; Гл - 1,43±0,02 усл.ед. У животных контрольной группы (не получавших лечение) в сроки исследования, соответствующие окончанию первого и второго циклов лечения экспериментальных групп, свободных от инфекции животных не было; на фоне высоких значений ИВ (0,92±0,06 и 0,84±0,07) и ИО (0,76±0,07 и 0,6±0,05) выявлялось достоверное снижение содержания КБ (0,96±0,06; 1,08±0,01) и активности СДГ (13,14±0,1; 15,76±0,2). В то же время уровень Гл достоверно повышался (2,16±0,17; 1,95±0,1).

У животных, подвергшихся лечению, исследуемые показатели после первого и второго курсов лечения соответственно были следующими.

При лечении пефлоксацином: ИВ - 0,88±0,08 и 0,56±0,05; ИО - 0,52±0,06 и 0,34±0,04; количество свободных от инфекции животных - 0 и 10,3±1,8%; содержание КБ - 1,1±0,04 и 1,39±0,06; активность СДГ - 14,32±0,2 и 15,84±0,2; Гл - 2,06±0,17 и 1,8±0,1.

При лечении ломефлоксацином: ИВ - 0,72±0,07 и 0,48±0,05; ИО - 0,49±0,05 и 0,25±0,03; количество свободных от инфекции животных - 21,2±1,9 и 51,3±2,1%, содержание КБ - 1,29±0,02 и 1,5±0,04; активность СДГ - 15,86±0,1 и 16,02±0,3; Гл - 1,91±0,27 и 1,77±0,02.

При лечении меропенемом: ИВ - 0,56±0,06 и 0,2±0,01; ИО - 0,42±0,04 и 0,1±0,01; количество свободных от инфекции животных - 43,2±2,0 и 64,1±0,9%; содержание КБ - 1,36±0,2 и 1,66±0,01; активность СДГ - 16,12±0,1 и 16,26±0,1; Гл - 1,72±0,1 и 1,61±0,2.

При лечении азитромицином: ИВ - 0,2±0,01 и 0; ИО - 0,1±0,01 и 0; количество свободных от инфекции животных - 87,3±1,0 и 100%; содержание КБ - 1,41±0,09 и 1,58±0,06; активность СДГ - 16,29±0,2 и 16,48±0,2; Гл - 1,64±0,2 и 1,49±0,2.

Из данных эксперимента следует, что при освобождении макроорганизма от бруцелл величина цитохимических показателей крови приближается к величине аналогичных показателей крови здоровых животных. Уже после проведения первого цикла антибиотикотерапии, т.е. на начальных этапах лечения бруцеллезной инфекции, показатели активности ферментов форменных элементов крови соответствуют степени освобождения организма от инфекции. У животных, полностью освободившихся от инфекции, активность ферментов нейтрофилов и лимфоцитов крови экспериментальных животных соответствует активности аналогичных ферментов форменных элементов крови здоровых животных (разница не является статистически достоверной).

Таким образом, функциональное состояние клеток крови белых мышей зависело от применяемого в лечении бруцеллеза антибиотика. Лечение экспериментальной бруцеллезной инфекции меропенемом и азитромицином характеризовалось восстановлением исследуемых цитохимических показателей до исходного уровня, что подтверждалось данными бактериологического исследования и свидетельствовало об эффективности применявшихся антибактериальных препаратов.

Изобретение относится к медицине, в частности к инфекционным болезням. Способ позволяет повысить контроль за эффективностью антибиотика при лечении бруцеллеза. Исследуют периферическую кровь в процессе проведения курсов лечения, при этом в процессе лечения цитохимически определяют содержание катионных белков (КБ), активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и гликогена (Гл) в клетках периферической крови, и антибиотик считают эффективным, если в процессе лечения им величина цитохимических показателей КБ, СДГ и Гл соответствует аналогичным цитохимическим показателям здоровых.

Способ контроля эффективности антибиотика при лечении бруцеллеза путем исследования периферической крови в процессе проведения курсов лечения, отличающийся тем, что в процессе лечения цитохимически определяют содержание катионных белков (КБ), активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и гликогена (Гл) в клетках периферической крови и антибиотик считают эффективным, если в процессе лечения им величина цитохимических показателей КБ, СДГ и Гл соответствует аналогичным цитохимическим показателям здоровых.