СПОСОБ ПРОГНОЗА ИСХОДА ПЕРИТОНИТА СРЕДНЕЙ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ПО СОДЕРЖАНИЮ НЕКОТОРЫХ ЖИРНЫХ КИСЛОТ В ЛИМФОЦИТАХ БОЛЬНЫХ Российский патент 2004 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано в клинической практике для прогноза исхода заболевания у больных перитонитом средней тяжести.

Для оценки тяжести перитонита, его течения и исхода заболевания в настоящее время широко применяется шкала Мангеймского перитонеального индекса (МИП) [4]. В зависимости от результатов бальной оценки, учитывающей возраст, пол, параметры клинической картины и локального статуса, пациенты распределяются на три группы: больные перитонитом легкой, средней и тяжелой степеней тяжести. Установлено, что для каждой из групп больных перитонитом характерен свой уровень летальных исходов: 0, 29 и 100% соответственно. Шкала МИП в большей степени оценивает статистические закономерности и неприменима для индивидуального прогноза исхода перитонита, особенно в группе больных перитонитом средней степени тяжести.

Структурно-метаболические особенности иммунокомпетентных клеток, в частности состояние их мембран, тесно связаны с тяжестью состояния больного [1, 7]. Одним из основных важнейших компонентов клеточных мембран, определяющим функциональные способности клеток, являются жирные кислоты (ЖК) [8]. Однако способов прогноза исхода перитонита, исходя из содержания жирных кислот в лимфоцитах больных, не обнаружено.

Известен способ прогноза исхода генерализованной гнойной хирургической инфекции по уровню сывороточного иммуноглобулина Е [З]. При увеличении концентрации иммуноглобулина Е в сыворотке крови больного и сохранении повышенной его концентрации в динамике заболевания прогнозируется летальный исход.

Основными недостатками известного способа являются обязательное наличие генерализованной гнойной хирургической инфекции для прогнозирования исхода заболевания. Он не может быть применен в менее тяжелых случаях - при отсутствии признаков генерализации инфекционного процесса у больного перитонитом, что существенно ограничивает применение способа.

Задачей предлагаемого способа является оценка прогноза исхода перитонита средней тяжести по относительному содержанию некоторых жирных кислот в лимфоцитах больных.

Поставленную задачу решают за счет того, что дополнительно используют сумму содержания олеиновой и арахидоновой ЖК для расчета показателя риска развития летального исхода (ПР) по предложенной формуле; при ПР>1,5 риск развития летального исхода оценивают как неблагоприятный.

Способ осуществляют следующим образом. Лимфоциты выделяют из 2 мл периферической венозной крови с антикоагулянтом (3% раствор ЭДТА на 0,85% забуференном растворе NaCl, pH 7,4) по методу A.Boyum (1974) [5] на градиенте плотности фиколл-верографина (р=1,077 г/см³). После подсчета концентрации клеточной суспензии выделенные лимфоциты в количестве 300-500 тыс. клеток используют для экстракции липидов по методу Folch et al. (1957) [6]. Исследование жирнокислотного состава проводят на газожидкостном хроматографе "Хром 5" (Чехословакия) с плазменно-ионизационным детектором. Применяют стеклянную колонку, заполненную жидкой фазой - диэтиленгликольсукцинатом на хромосорбе DMCS.

В жирнокислотном спектре липидов клеточных мембран лимфоцитов идентифицируют следующие жирные кислоты (ЖК): С_16:0 - пальмитиновую кислоту, C_16:1 - пальмитоолеиновую кислоту, С_18:0 - стеариновую кислоту, C_18:1 - олеиновую кислоту, C_18:2 - линолевую кислоту, С_18:3 - линоленовую кислоту, С_20:0 - эйкозановую кислоту, С_20:3 - эйкозотриеновую кислоту, С_20:4 - арахидоновую кислоту, С_20:5 - эйкозопентаеновую кислоту, С_22:6 - докозогексаеновую кислоту. Выражают каждый показатель в процентах к общей сумме.

На основании полученных данных вычисляют сумму насыщенных жирных кислот (C_16:0+C_18:0+С_20:0), сумму ненасыщенных жирных кислот (C_16:1+C_18:1+С_18:2+С_18:3+С_20:3+С_20:4+С_20:5+С_22:6), сумму полиненасыщенных (ПНЖК) жирных кислот (С_18:2+С_18:3+С_20:3+С_20:4+С_20:5+С_22:6), коэффициенты насыщенности (насыщенные ЖК / ненасыщенные ЖК и насыщенные ЖК / ПНЖК), отношение суммы омега-3 (С_18:3+С_20:5) к сумме омега-6 (С_18:2+С_20:3+С_20:4) жирных кислот, сумму содержания олеиновой и арахидоновой ЖК, отношения содержаний эйкозотриеновой и эйкозопентаеновой кислот к арахидоновой кислоте.

Затем расчитывают показатель риска развития летального исхода (ПР) по следующей формуле:

ПР=0,739-0,173·К1-0,077·К2+0,116·К3+1,002·К4+0,245·К5-0,347·К6-0,022·К7+0,012·К8+0,443·К9-0,037·К10,

где ПР - показатель риска развития летального исхода,

К1 - отношение суммарного содержания омега-3-ЖК к суммарному содержанию омега-6-ЖК,

К2 - относительное содержание пальмитиновой кислоты,

К3 - суммарное содержание олеиновой и арахидоновой кислот,

К4 - отношение суммарных содержаний насыщенных ЖК к ненасыщенным жирным кислотам,

К5 - отношение эйкозотриеновой кислоты к арахидоновой кислоте,

К6 относительное содержание пальмитоолеиновой кислоты,

К7 - отношение эйкозопентаеновой кислоты к арахидоновой кислоте,

К8 - отношение суммарного содержания насыщенных ЖК к суммарному содержанию полиненасыщенных ЖК,

К9 - относительное содержание докозогексаеновой кислоты,

К10 - относительное содержание стеариновой кислоты.

При ПР>1,5 прогноз исхода перитонита неблагоприятный.

Формула расчета риска летального исхода получена методом пошаговой множественной регрессии, что позволило выделить из ряда метаболических характеристик лимфоцитов наиболее значимые показатели [2].

Информативность способа оценена на 32 больных распространенным перитонитом средней степени тяжести. Тяжесть перитонита определялась по шкале Мангеймского индекса перитонита [4]. Из них у 17 заболевание закончилось выздоровлением, у 15 - летальным исходом. Средние значения МИП составили 22,41±0,81 баллов и 24,93±0,94 баллов соответственно (Р>0,05). Результаты оценки исхода перитонита приведены в таблице. Точность прогноза исхода перитонита по предложенному способу составляет 93,75%. Полученные клинические результаты подтверждают высокую информативность способа.

Пример 1. Больной С., 39 лет, №и/б 1673, находился в Красноярской краевой клинической больнице с диагнозом: язвенная болезнь желудка, осложненная перфорацией. Разлитой фибринозно-гнойный перитонит, терминальная фаза (в таблице - №9).

13.01.02 произведена экстренная операция: лапаротомия, санация, дренирование брюшной полости, ушивание перфоративной язвы желудка, лапаростомия; 16.01.02 произведена плановая санация, дренирование брюшной полости, ушивание лапаростомы.

Состояние больного оставалось тяжелым. 21.01.02 появились признаки перфорации полого органа брюшной полости, в связи с чем проведена экстренная операция: релапаротомия, ушивание несостоятельности швов перфорации желудка, санация, дренирование брюшной полости, лапаростомия. Оценка по МИП 26 баллов.

После исследования жирнокислотного спектра лимфоцитов определено значение ПР, который был равен 1,338. Прогноз исхода заболевания благоприятный.

24.01.02 больному проведены плановая санация и дренирование брюшной полости, ушивание лапаростомы. На фоне проводимой интенсивной терапии послеоперационный период без осложнений. Выздоровление.

Пример 2. Больная Н., 40 лет, № и/б 6875, находилась в Красноярской краевой клинической больнице с диагнозом: двусторонняя гнойная тубовариальная опухоль. Разлитой гнойный перитонит (в таблице №24).

27.11.2000 операция: лапаротомия, тубэктомия справа, овариотубэктомия слева, лапаростомия. 29.11.2000 - плановая санация, дренирование брюшной полости, ушивание лапаростомы. Оценка по МИП 28 баллов.

ПР=3,501. Прогноз неблагоприятный.

Несмотря на проводимую терапию, в послеоперационном периоде нарастали явления сердечно-сосудистой недостаточности, и 01.12.2000 наступил летальный исход.

Преимуществами предложенного способа являются: использование для осуществления способа малого объема крови (2 мл), возможность применения способа у больных перитонитом при отсутствии признаков генерализации инфекционного процесса, высокий уровень совпадения прогноза - 93,75%.

Предложенный нами способ может быть рекомендован для применения в клинической практике.

Используемые источники:

1. Булыгин Г.В., Казакова Г.Н., Каспаров Э.В. Особенности структурно-метаболических параметров Т- и В-лимфоцитов здорового человека и при некоторых патологических состояниях. - Красноярск, 1998, 127 с.

2. Гельман В.Я. Медицинская информатика: практикум. - СПб.: Питер, 2001, 480 с.

3. Способ прогноза исхода генерализованной гнойной хирургической инфекции, а.с. №2154828, МПК 7 G 01 N 33/53 / Камзалакова Н.И., Булыгин Г.В., Андрейчиков А.В., Швецкий А.Г. (RU), 3 с.

4. Федоров В.Д, Гостищев В.К., Ермолов А.С., Богницкая Т.Н. Современные представления о классификации перитонита и системах оценки тяжести состояния больных. // Хирургия, 2000, №4, с.58-62.

5. Boyum A. Separation of leukocytes from blood and bone marrow // Scand. J. Clin. Lab. Invest., 1968, v.21 (Suppl. 77), p 77-79.

6. Folch J., Lees M., Stanley G.H.S. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues. // J. Bol. Chem., 1957, v.226, p.497-509.

7. Muller C.P., Stephany D.A., Shinitzky M., Wunderlich J.R. Changes in cell-surface expression of MHC and Thy-1.2 determinants following treatment with lipid modulating agents. //J. Immunol., 1983, v.l31, № 3, p. 1356-1362.

8. Sugano M. et al. Conjugated linoleic acid modulates tissue levels of chemical mediators and immunoglobulins in rats. // Lipids., 1998, v.33, № 5, p.521-527.

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано в клинической практике для оценки прогноза заболевания у больных перитонитом средней тяжести. Методом газожидкостной хроматографии определяют процентное содержания следующих жирных кислот (ЖК): пальмитиновой кислоты, пальмитоолеиновой кислоты, стеариновой кислоты, олеиновой кислоты, линолевой кислоты, леноленовой кислоты, эйкозановой кислоты, эйкозотриеновой кислоты, арахидоновой кислоты, эйкозопентаеновой кислоты, докозогексаеновой кислоты. Вычисляют суммы содержания насыщенных жирных кислот, ненасыщенных жирных кислот, полиненасыщенных (ПНЖК) жирных кислот, коэффициенты насыщенности (насыщенные ЖК / ненасыщенные ЖК и насыщенные ЖК / ПНЖК), К1 - отношения суммы омега-3 к сумме омега-6 жирных кислот, отношение содержания эйкозотриеновой и эйкозопентаеновой кислот к арахидоновой кислоте, К3 - сумму содержания олеиновой и арахидоновой ЖК. Рассчитывают показатель риска развития летального исхода (ПР) по предложенной формуле: ПР = 0,739 – 0,173·К1 – 0,077·К2 + 0,116 · К3 + 1,002 · К4 + 0,245 · К5 – 0,347 · К6 – 0,022 · К7 + 0,012 · К8 + 0,443 · К9 – 0,037 · К10, где К2 – относительное содержание пальмитиновой кислоты, К4 – отношение суммарных содержаний насыщенных ЖК к ненасыщенным ЖК, К5 - отношение эйкозотриеновой кислоты к арахидоновой кислоте, К6 – относительное содержание пальмитоолеиновой кислоты, К7 - отношение эйкозопентаеновой кислоты к арахидоновой кислоте, К8 - отношение суммарного содержания насыщенных ЖК к полиненасыщенным ЖК, К9 - относительное содержание докозогексаеновой кислоты, К10 - относительное содержание стеариновой кислоты. При ПР > 1,5 риск развития летального исхода оценивают как неблагоприятный. Способ позволяет повысить точность диагностики и уменьшить объем исследуемого образца крови. 1 табл.

Способ прогноза исхода перитонита средней степени тяжести по содержанию жирных кислот в лимфоцитах больных, отличающийся тем, что определяют методом газожидкостной хроматографии процентное содержание следующих жирных кислот (ЖК): С_16:0 – пальмитиновой кислоты, С_16:1 – пальмитоолеиновой кислоты, С_18:0 – стеариновой кислоты, С_18:1 – олеиновой кислоты, С_18:2 – линолевой кислоты, С_18:3 – леноленовой кислоты, С_20:0 – эйкозановой кислоты, С_20:3 – эйкозотриеновой кислоты, С_20:4 – арахидоновой кислоты, С_20:5 – эйкозопентаеновой кислоты, С_22:6 – докозогексаеновой кислоты; вычисление суммы содержания насыщенных жирных кислот (С_16:0 + С_18:0 + С_20:0), ненасыщенных жирных кислот (С_16:1 + С_18:1 + С_18:2 + С_18:3 + С_20:3 + С_20:4 + С_20:5 + С_22:6), полиненасыщенных (ПНЖК) жирных кислот (С_18:2 + С_18:3 + С_20:3 + С_20:4 + С_20:5 + С_22:6), коэффициентов насыщенности (насыщенные ЖК/ненасыщенные ЖК и насыщенные ЖК/ПНЖК), отношения суммы омега-3 (С_18:3 + С_20:5 ) к сумме омега-6 (С_18:2 + С_20:3 + _{С20:4) жирных кислот, отношения содержания эйкозотриеновой и эйкозопентаеновой кислот к арахидоновой кислоте, дополнительно используют сумму содержания олеиновой и арахидоновой ЖК для расчета показателя риска развития летального исхода (ПР) по предложенной формуле:}

ПР = 0,739 – 0,173·К1 – 0,077·К2 + 0,116·К3 + 1,002·К4 + 0,245·К5 – 0,347·К6 – 0,022·К7 + 0,012·К8 + 0,443·К9 – 0,037·К10,

где ПР – показатель риска развития летального исхода;

К1 – отношение суммарного содержания омега-3-жк к суммарному содержанию омега-6-жк;

К2 – относительное содержание пальмитиновой кислоты;

К3 - сумму содержания олеиновой и арахидоновой кислот;

К4 – отношение суммарных содержаний насыщенных ЖК к ненасыщенным ЖК;

К5 - отношение эйкозотриеновой кислоты к арахидоновой кислоты;

К6 – относительное содержание пальмитоолеиновой кислоты;

К7 - отношение эйкозопентаеновой кислоты к арахидоновой кислоте;

К8 - отношение суммарного содержания насыщенных ЖК к полиненасыщенным ЖК;

К9 - относительное содержание докозогексаеновой кислоты;

К10 - относительное содержание стеариновой кислоты,

при ПР > 1,5 риск развития летального исхода оценивают как неблагоприятный.