СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАЗВИТИЯ ГНОЙНЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ПРИ ХИРУРГИЧЕСКОМ ЛЕЧЕНИИ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ КИШКИ, ОСЛОЖНЕННОЙ СТЕНОЗОМ Российский патент 2004 года по МПК G01N33/68 

Предлагаемое изобретение относится к хирургической гастроэнтерологии и иммунологии и может быть использовано в клинике для прогнозирования осложнений в послеоперационном периоде. В настоящее время не подвергается сомнению, что нарушения в системе иммунитета не только сопровождают многие заболевания, но зачастую обуславливают значительный вклад в механизмы развития патологических процессов, а также способствуют их отягощению. В последние годы получены объективные доказательства того. что патология иммунной системы играет большую роль в развитии заболеваний гастроинтестинального тракта. В патогенезе такого распространенного заболевания, как язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки, в полной мере проявляются дисфункции иммунной системы (Аруин Л.И.,1983; Малов Ю.С., 1984; Циммерман Я.С, 1998).

Нейтрофильные гранулоциты как высокореактивная категория клеток служат чувствительным индикатором различных нарушений гомеостаза, что используют в качестве диагностического и прогностического критерия в клинической практике. В связи с этим большой интерес вызывает цитохимическая маркировка нейтрофильных гранулоцитов, что связано с доступностью и чувствительностью подобных реакций. Для изучения бактерицидных систем нейтрофилов определяют активность миелопероксидазы методом цитохимического анализа. Миелопероксидаза является ферментом, который наряду с кислородными радикалами, перекисью водорода, галогенами составляет эффекторное звено кислородзависимого аппарата бактерицидности нейтрофилов. Активность миелопероксидазы определяют по методу Sato и Sekija (1928). Принцип метода основан на окислении бензидина пироксид-пероксидазной системой до бензидинового синего. Результаты учитывают с помощью иммерсионной микроскопии с последующим расчетом в условных единицах среднего цитохимического индекса. В клинике используют определение активности миелопероксидазы как в дифференциально-диагностических целях (например, инфаркт миокарда и стенокардия; мозговой инсульт и транзиторное нарушение кровообращения; инфекции бактериальной и вирусной природы и т.д.), так и для контроля динамики патологического процесса.

Однако, по мнению многих исследователей, активность миелопероксидазы у больных язвенным поражением слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки колеблется в широких пределах и не всегда соответствует тяжести течения хронического процесса (Ашкинази В.И., Маянская И.В. и др., 2000; Дягилева О.А., Быкова И.А. и др., 2001). Подобные исследования не отражают в полной мере потенциальные возможности нейтрофильных гранулоцитов и при данной патологии не имеют достаточной прогностической информативности.

За прототип принят способ определения функционального потенциала нейтрофильных гранулоцитов по реализации неферментных катионных белков (Нестерова И.В., Светличная М.А., 1987). Суть данного способа в определении содержания катионных белков в интактных нейтрофилах и в нейтрофидах, подвергшихся активации комплексным поливалентным антигеном. При сопоставлении уровня расходования катионного белка в активированных и интактных клетках определяют коэффициент реализации катионных белков, а затем по изменению коэффициента реализации относительно нормы судят о наличии или отсутствии патологического состояния (Педиатрия. - 1984. - №9). Мы использовали этот метод для обследования пациентов с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки, осложненной стенозом перед операцией, однако коэффициент реализации катионных белков находился в пределах значений здорового контроля, не отражал тяжести патологического процесса и не мог быть использован для определения резервных возможностей нейтрофильных гранулоцитов при данной патологии. Нами была поставлена задача разработать новый адекватный цитохимический тест для решения данной диагностической проблемы.

Заявители предлагают определять уровень расходования миелопероксидазы в цитоплазме нейтрофилов с использованием нагрузочного теста при искусственной активации нейтрофильных гранулоцитов бактериальным антигеном в условиях in vitro, который является адекватной моделью манифестации патологического процесса и позволяет более эффективно оценить мобилизационные возможности гранулярного аппарата нейтрофилов, а также определить резервный потенциал этих клеток. При неосложненном течении данного заболевания потенциал нейтрофилов полностью не реализуется, но впоследствии может оказать существенное влияние на течение заболевания в случае его обострения, что чрезвычайно важно для клинико-лабораторной практики.

Сущность изобретения заключается в том, что определяют коэффициент расходования миелопероксидазы в нейтрофильных гранулоцитах как отношение уровня ее активности в стимулированном и спонтанном варианте теста. При условии значения коэффициента расходования 0,32-0,38 определяют низкую степень риска развития осложнения, а при отклонении коэффициента расходования миелопероксидазы в нейтрофильных гранулоцитах от указанных значений определяют риск развития послеоперационных хирургических осложнений.

Способ осуществляют следующим образом.

Для исследования берут кровь из вены, стабилизированную антикоогулянтом. В 2 лунки планшета для иммунологических исследований помещают по 100 мкл крови. В 1 лунку добавляют 100 мкл физиологического раствора (спонтанный тест), в другую - 100 мкл бактериальной взвеси St. aureus в концентрации 1х10⁶ микробных тел в 1 мл физиологического раствора (стимулированный тест). Содержимое лунок осторожно перемешивают, после чего инкубируют в термостате при температуре +37°С в течение 1 часа. После инкубации содержимое лунок перемешивают и готовят каплю-препарат на чистом, хорошо обезжиренном предметном стекле. Стекло помещают во влажную камеру для оседания клеток в строго в горизонтальном положении. Через 10 минут излишек жидкости осторожно удаляют наклоном стекла под углом 45° и сушат мазки на воздухе в течение 6-12 часов. Высушенные мазки фиксируют в парах 40% формалина в течение 3-4 минут, промывают в проточной воде 1-2 минуты и высушивают на воздухе. Затем мазок опускают в 0,5%-ный раствор медного купороса на 1 минуту, после чего переносят в свежеприготовленный раствор бензидина с 2 каплями перекиси водорода (раствор бензидина готовят, растворяя 100 мг бензидина в 100 мл дистиллированной воды при нагревании до 80°С, раствор хранится в холодильнике). После этого мазки промывают в проточной воде в течение 1-2 минут и докрашивают в течение 30-60 секунд в 0,5%-ном растворе нейтрального красного, еще раз ополаскивают в проточной воде и сушат на воздухе.

При микроскопировании окрашенных мазков просматривают 100 нейтрофилов. Внутриклеточную активность миелопероксидазы оценивают полуколичественно в условных единицах путем расчета среднего цитохимического индекса (СЦИ) по принципу Kaplow (1955). Вычисляя отношения показателя активности миелопероксидазы в стимулированном варианте к аналогичному показателю в спонтанном варианте, определяют коэффициент расходования (КР):

который демонстрирует функциональную активность нейтрофилов и их резервные возможности. При условии его значения 0,35±0,03 устанавливают низкую степень риска развития осложнений, а при отклонении значений от указанного уровня определяют риск развития гнойных осложнений.

Используя данный тест, была исследована периферическая кровь 20 условно здоровых лиц и 60 пациентов с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки, осложненной стенозом, перенесших радикальную дуоденопластику по В.И.Оноприеву в Российском центре функциональной хирургической гастроэнтерологии (табл. 1).

Проведенное исследование подтвердило, что коэффициент расходования мелопероксидазы является высокоэффективным показателем резервного потенциала нейтрофильных гранулоцитов, позволяющий использовать тест в клинической практике для прогнозирования риска хирургических осложнений при язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, осложненной стенозом.

Клинические примеры.

1. Больной P.O. 50 лет. 17.10.99 в плановом порядке выполнена радикальная дуоденопластика по поводу декомпенсированного стеноза. При определении уровня активности миелопероксидазы в спонтанном тесте СЦИ был равен 2,3. При определении аналогичного показателя в стимулированном варианте теста СЦИ равнялся 2,07, Таким образом, коэффициент расходования миелопероксидазы, вычисленный по приведененой выше формуле, составил 0,90, что говорит о глубоком дефекте кислородзависимого механизма микробицидной системы нейтрофилов. На основании клинических показателей и результатов иммунологического исследования определена высокая степень риска развития послеоперационных осложнений. Больному перед операционным вмешательством был назначен курс корригирующей иммунотерапии. В результате проведения предоперационной подготовки послеоперационные осложнения отсутствовали. Больной выписан на 8 день из стационара.

2. Больной С.В. 46 лет. 20.10.01 была выполнена в плановом порядке радикальная дуоденопластика по поводу субкомпенсированного стеноза. Коэффициент расходования, определенный по приведенному выше алгоритму, равен 0.38. Послеоперационное течение гладкое, осложнения отсутствуют, выписан на 9 сутки.

3. Больной К.В. 31 год. 17.10.99 была выполнена в экстренном порядке радикальная дуоденопластика по поводу декомпенсированного дуоденального стеноза. В результате проведенного иммунологического исследования обнаружены серьезные нарушения в функционировании микробицидной системы нейтрофилов, коэффициент расходования миелопероксидазы, определенный по приведенному выше алглоитму, равен 0,82. Назначенное иммунологом лечение не проводил ввиду экономической недоступности препаратов. Послеоперационное течение тяжелое, перитонит, заживление операционной раны вторичным натяжением. Выписан на 32 сутки.

При выявлении риска развития гнойных осложнений в послеоперационном периоде необходимо проводить для данной категории больных иммунокорригирующую терапию, в результате чего будет исключен риск повторных операций, будет оптимизировано лечение и реабилитация больных, уменьшится срок пребывания больных в стационаре.

Изобретение относится к хирургической гастроэнтерологии и иммунологии и может быть использовано в клинике для прогнозирования осложнений в послеоперационном периоде. Для этого определяют коэффициент расходования миелопероксидазы в нейтрофильных гранулоцитах как отношение уровня ее активности в стимулированном и спонтанном варианте теста. При условии значения коэффициента расходования 0,32-0,38 определяют низкую степень риска развития осложнения, а при отклонении коэффициента расходования миелопероксидазы в нейтрофильных гранулоцитах от указанных значений определяют риск развития послеоперационных хирургических осложнений. Способ позволяет выявить риск развития гнойных осложнений в послеоперационном периоде, при этом необходимо проводить для данной категории больных иммунокорригирующую терапию, в результате чего будет исключен риск повторных операций, будет оптимизировано лечение и реабилитация больных, уменьшится срок пребывания больных в стационаре. 1 табл.

Способ прогнозирования гнойных осложнений при хирургическом лечении язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, осложненной стенозом, отличающийся тем, что определяют коэффициент расходования миелопероксидазы в нейтрофильных гранулоцитах как отношение уровня ее активности в стимулированном и спонтанном варианте теста и при условии его значения 0,32-0,38 устанавливают низкую степень риска развития осложнений, а при отклонении значений от указанного уровня расходования определяют риск развития гнойных осложнений.