Способ прогнозирования риска развития осложнений язвенного колита при клиническом обострении Российский патент 2024 года по МПК G01N33/48 G01N1/30 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано в клинической лабораторной практике для определения активности системы нейтрофилов при язвенном колите для прогнозирования рисков развития осложнений при клиническом обострении язвенного колита и улучшения тактики ведения больного.

Язвенный колит (ЯК) является одной из актуальных проблем современного здравоохранения, что обусловлено его преимущественной распространенностью среди лиц трудоспособного возраста, рецидивирующим прогрессирующим характером заболевания, развитием опасных для жизни осложнений (перфорации, токсической дилатации кишки, перитонита, малигнизации), недостаточно эффективным, и, нередко, дорогостоящим лечением (Е.А. Белоусова, 2016; Ф.И. Комаров и соавт, 2017). Актуальность проблемы количественной оценки тяжести состояния больных с язвенным колитом возрастает. В течение последних лет в медицинской литературе активно обсуждается вопрос о необходимости объективной оценки тяжести состояния и прогноза. Всеми авторами признается, что своевременная, быстрая и объективная оценка тяжести состояния больного с язвенном колите - необходимый инструмент для принятия решения о тактике ведения больного, оптимальном месте проведения терапии. При язвенном колите крайне важно оценить тяжесть состояния больных на ранних сроках госпитализации с целью выделения пациентов, требующих проведения хирургического лечения.

Аналоги данного способа по определению риска развития осложнений при язвенном колите основываются на использовании разнообразных критериев и шкал, из которых наиболее распространенными в настоящее время являются критерии Truelove-Witts, как правило, применяемые в повседневной клинической практике.

Согласно критериям Truelove-Witts, атаки подразделяют на легкую, среднетяжелую и тяжелую. Степень тяжести атаки оценивают исходя из частоты дефекаций с примесью крови, температуры, частоты сердечных сокращений, в анализах крови оценивают уровень гемоглобина и скорость оседания эритроцитов.

Оценка эндоскопической активности язвенного колита по Schroeder подразумевает оценку состояния слизистой оболочки толстой кишки согласно сумме баллов: 0 - Норма или неактивное заболевание; 1 - минимальная активность, которая проявляется легкой гиперемией, смазанным сосудистым рисунком, легкой контактной ранимостью. 2 - умеренная активность - выраженная гиперемия, отсутствие сосудистого рисунка, умеренная контактная ранимость, наличие эрозий, 3- выраженная активность: спонтанная ранимость, изъязвления.

Недостатком данного метода является обязательное выполнение фиброколоноскопии, которая является инвазивным методом обследования, требующая специальной подготовки. Результаты оценки, в том числе, зависят от качества подготовки к исследованию. Тяжесть состояния пациента не всегда позволят провести качественную подготовку к данному исследованию.

За ближайший аналог принят Индекс Мейо (Mayo score), который используют для наиболее полной комплексной оценки тяжести атаки язвенного колита устанавливают по сумме баллов, максимально включающего 12 баллов (в том числе, эндоскопическая оценка). Эндоскопическую шкалу Мейо (0-3 балла) применяют при рутинной оценке эндоскопической активности ЯК. Полная шкала Мейо интерпретируется следующим образом: ремиссия/неактивная болезнь (0-1 балл), минимальная (2-5 баллов), умеренная (6-10 баллов) и выраженная активность (>10 баллов).

Недостатками Индекса Мейо являются значительная затрата времени (до 24 часов и более), так как необходимо выполнить фиброколоноскопию, после тщательной подготовки, которая занимает не менее 8 часов, что недопустимо в отношении пациентов со сверх тяжелой атакой язвенного колита.

Задачами способа являются: ускорить, максимально упростить и объективизировать способ риска развития осложнений при язвенном колите, сделав ее доступной для любой лаборатории и клиники, сохранив при этом полную репрезентативность получаемых результатов.

Сущность изобретения заключается в том, что в динамике, с периодичностью 1 раз в 3 месяца, в мазке периферической крови, окрашенных толуидиновым синим при рН 5,0, в поляризационном поле, определяют площадь анизотропного материала в ядре нейтрофильных лейкоцитов, вычисляют средний цитохимический коэффициент (СЦК) по формуле: СЦК= и определяют показатели активности нейтрофилов (ПАН) по формуле ПАН=3-СЦК, и при значении ПАН от 2,25 и более прогнозируют низкий риск развития возможных осложнений, при значении ПАН 2,24-1,5 - средний риск развития осложнений, при значении ПАН 1,4-0,75 - высокий риск развития осложнений, при значении ПАН от 0,74 до 0 - крайне высокий риск развития осложнений.

Технический результат способа позволяет значительно сократить (до нескольких часов) время прогнозирования рисков развития осложнений при язвенном колите, что очень важно при условии назначения терапии, а так же хирургического лечения. Определение среднего цитохимического коэффициента (СЦК), показателей активности нейтрофилов (ПАН), способствует индивидуализации прогноза течения язвенного колита и рисков возможных осложнений.

Способ апробирован в условиях коечного стационара на 120 больных и осуществляют следующим образом. Мазки клеток периферической крови подсушивают на воздухе, фиксируют смесью этанол/ацетон в соотношении 1:1, подвергают гидролизу в 5 N HCL при 20°С и обработке солянокислым гидроксиламином, приготовленным по Р. Лилли (Патологическая техника и практическая гистохимия, - М., 1969), при температуре 37°С в течение 3 часов. Обработанные таким образом мазки окрашивают 0,05% раствором толуидинового синего при рН-5,0, приготовленного на 0,001 М цитратном буфере. Время окраски составляет 20 минут. Окрашенные препараты коротко отмывают нитратным буфером, высушивают на воздухе и исследуют под микроскопом "МП-8" при "скрещенном" анализаторе и поляризаторе. Полученную в поляризационном поле анизотропию фотографируют в строго стандартизированных условиях на пленку типа РФ-3 и ФН-100, на полученных фотографиях измеряют площадь, занятую анизотропным материалом в ядрах нейтрофильных гранулоцитов, используя для этого морфометрический метод равноудаленных точек (Ташке К. "Введение в количественную цитогистологическую морфологию". Из-во Академии Социалистической республики Румыния. - 1976, с. 207). Для снижения процента погрешности учету подвергают как зоны микрофотографии, имеющие признаки анизотропии, так и зоны, которые этим эффектом не обладают. Для массовых исследований в клинических условиях используют хорошо известный полуколичественный метод Астальди и Верга (Astaldi G., Verga L. The glycogen content of the cells of lymphatic leukaemia // Acta Haemat, 1957. - Vol. 17. - P. 911-928), адаптированного для изучения ядер. Все ядра разделяют по степени анизотропии на 4 группы, каждой из которых присваивают определенную величину анизотропии, от 0,74 до 0 - полное ее отсутствие до 3 - анизотропно все ядро. В дальнейшем расчет анизотропии проводят по известной формуле: где СЦК - средний цитохимический коэффициент или величина анизотропии; а, b, с, d - количество клеток с разной величиной анизотропии; 0, 1, 2, 3 - условная степень анизотропии, соответствующая площади, занимаемой анизотропным материалом, х - знак умножения. Величины СЦК могут приобретать значения от 0 (полное отсутствие анизотропии) до 3 (максимальная анизотропия). Величина биологической активности сегментоядерных, нейтрофильных гранулоцитов (БАСНГ) обратно пропорциональна величине анизотропии, БАСНГ отражает показатель активности нейтрофилов (ПАН), отсюда - ПАН=3-СЦК.

При ПАН от 3 до 2,25 усл. ед. определяют очень высокую биологическую активность системы нейтрофильных гранулоцитов и соответственно очень высокие резервные возможности организма.

При ПАН от 2,24 до 1,5 усл. ед. определяют высокую биологическую активность системы нейтрофильных гранулоцитов и соответственно высокие резервные возможности организма.

При ПАН 1,4 от 0,75 усл. ед. определяют умеренную биологическую активность системы нейтрофильных гранулоцитов и соответственно умеренные резервные возможности организма.

При ПАН от 0,74 до 0 усл. ед. определяют низкую биологическую активность системы нейтрофильных гранулоцитов и соответственно низкие резервные возможности организма.

Пример №1. У больного с язвенным колитом А., из подушечки четвертого пальца левой руки, по общепринятой методике, была получена капля периферической крови, из которой на обезжиренном предметном стекле был приготовлен мазок крови. Данный мазок крови был подсушен на воздухе при комнатной температуре, а затем подвергнут фиксации смесью этанол/ацетон в соотношении 1:1. Время фиксации составило 15 минут. После фиксации мазок крови был подвергнут обработке 5-нормальной соляной кислоты при 20°С для гидролиза ядерной ДНК нейтрофильных гранулоцитов. Время гидролиза составляло 40 минут. После обработки соляной кислотой мазок крови был обработан солянокислым гидроксиламином, приготовленным по Р. Лилли (1969) для блокады открывшихся после обработки соляной кислотой альдегидных групп ДНК ядер нейтрофильных гранулоцитов. Продолжительность данной обработки составила 3 часа при 37°С. Обработанный таким образом мазок крови был окрашен 0,05% раствором толуидинового синего при рН-5,0. После окраски мазок подвергли короткой промывке, а затем высушили. Приготовленный таким образом мазок крови больного А. исследовали в поляризационном поле на микроскопе МП-8 при "скрещенном" анализаторе и поляризаторе. Во время исследования проводили полуколичественное измерение площади, занимаемой анизотропным материалом в ядрах нейтрофильных гранулоцитов. Определена площадь 100 клеток анизатропного материала в ядре нейтрофильных гранулоцитов, вычислен средний цитохимический коэффициент (СЦК) по формуле: СЦК=. Получен результат 0,75. После чего определен показатель активности нейтрофилов (ПАН) по формуле ПАН=3-СЦК. Средняя площадь, занимаемая анизотропным материалом в ядрах нейтрофильных гранулоцитов соответствовало уровню ПАН=2,25 усл. ед. Это свидетельствовало об очень высоком уровне активности системы нейтрофильных гранулоцитов и высоких резервных возможностях организма в целом. Пациенту не потребовалась госпитализация в стационар. Амбулаторный этап лечения протекал хорошо, осложнений не наблюдалось. В результате лечения достигнута клиническая ремиссия заболевания в течение 3 месяцев от начала терапии.

Пример №2. У пациента с язвенным колитом И. площадь ядра, занимаемая анизотропным материалом соответствовало уровню ПАН 3,0 усл. ед. Это свидетельствовало об очень высокой биологической активности системы нейтрофильных гранулоцитов. У пациента отмечалась клинико-лабораторная, эндоскопическая ремиссия язвенного колита в течение 2-х лет.

Пример №3. У пациента с язвенным колитом М. площадь ядра, занимаемая анизотропным материалом соответствовало уровню ПАН 2,26 усл. ед. Это свидетельствовало об очень высокой биологической активности системы нейтрофильных гранулоцитов. У пациента отмечалась клинико-лабораторная ремиссия язвенного колита.

Пример №4. У пациента с язвенным колитом А. площадь ядра, занимаемая анизотропным материалом соответствовало уровню ПАН 2,24 усл. ед. Это свидетельствовало об высокой резервной возможности организма.

Амбулаторный этап лечения протекал удовлетворительно, осложнений не наблюдалось, однако потребовалась более длительное применения глюкокортикостероидов (начальная доза ГКС составила 60 мг в сутки. Доза препарата снижалась на 5 мг раз в неделю до полной отмены препарата. Лечение ГКС продолжалось в течение 12 недель). В результате клиническая ремиссия заболевания была достигнута через 4 месяца от начала терапии.

Пример №5. У пациента с язвенным колитом С. площадь ядра, занимаемая анизотропным материалом соответствовало уровню ПАН 1,50 усл. ед. Это свидетельствовало об высокой резервной возможности организма. Амбулаторный этап лечения протекал удовлетворительно, осложнений не наблюдалось, однако потребовалась коррекция базисной терапии, начата терапия цитостатическим препаратом (Азатиоприн в дозе 2,5 мг/кг массы тела, что в данном случае составило 150 мг в сутки). В результате клиническая ремиссия заболевания была достигнута через 6 месяцев от начала терапии.

Пример №6. У пациента с язвенным колитом Ц. площадь ядра, занимаемая анизотропным материалом соответствовало уровню ПАН 1,40 усл. ед. Это свидетельствовало об умеренной биологической активности системы нейтрофильных гранулоцитов и соответственно умеренных резервных возможностях организма. Пациенту потребовалась госпитализация в стационар для индукции ремиссии язвенного колита с помощью в/в введения глюкокортикостероидов в дозе 75 мг в сутки. Период стационарного лечения составил 14 дней, в последующем пациент продолжил лечение амбулаторно. Стойкой клинической ремиссии не было достигнуто. Пациент был подготовлен на плановое оперативное лечение язвенного колита.

Пример №7. У пациента с язвенным колитом X. площадь ядра, занимаемая анизотропным материалом соответствовало уровню ПАН 0,75 усл. ед. Это свидетельствовало об умеренной биологической активности системы нейтрофильных гранулоцитов и соответственно умеренных резервных возможностях организма. После дообследования у пациента диагностирована гормональная резистентность, реактивация цитомегаловирусной инфекции, что потребовало назначения противовирусной терапии (Валацикловир 900 мг в сутки в течение 21 дня); антибактериальной терапии (Рифаксимин 800 мг в сутки - 7 дней). После проведенного лечения пациент был переведен в колопроктологическое отделение для планового оперативного лечения.

Пример №8. У пациента с язвенным колитом В. площадь, занимаемая анизотропным материалом в ядрах нейтрофильных гранулоцитов соответствовало уровню ПАН 0,73 усл. ед. Это свидетельствовало о низком уровне активности системы нейтрофильных гранулоцитов и пониженных резервных возможностях организма в целом. Проводилась консервативная терапия в полном объеме согласно стандартам оказания медицинской помощи пациентам с воспалительными заболеваниями кишечника на территории РФ. Эндоскопическая отмечались глубокие (до мышечного слоя) обширные язвенные дефекты, окруженные остатками инфильтрированной слизистой оболочкой. Стационарный этап лечения потребовал перевода пациента в отделение интенсивной терапии, выполнения оперативного лечения в объеме колпроктэктомии. Реабилитация данного пациента носила затяжной характер. Однако благодаря своевременно принятым мерам больной выздоровел и выписан из стационара в удовлетворительном состоянии более чем через 1 месяц.

Пример №9. У пациента с язвенным колитом 3., который был экстренно госпитализирован в колопроктологическое отделение, где по жизненным показаниям проведено оперативное лечение, площадь, занимаемая анизотропным материалом в ядрах нейтрофильных гранулоцитов соответствовало уровню ПАН 0 усл. ед. Это свидетельствовало о крайне низком уровне активности системы нейтрофильных гранулоцитов и незначительных резервных возможностях организма в целом. Входе дообследования пациента, при посеве крови выявлена полирезистентная к антибактериальным препаратам бактериальная флора, что потребовало назначения комбинированной терапии антибактериальными препаратами резерва (Меропенем 3000 мг в сутки). Реабилитация носила затяжной характер. Для полного клинико-лабораторного разрешения осложнений потребовалось более 4-х недель.

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития осложнений язвенного колита при клиническом обострении. В динамике с периодичностью 1 раз в 3 месяца определяют площадь 100 клеток анизотропного материала в ядре нейтрофильных гранулоцитов, вычисляют средний цитохимический коэффициент (СЦК) и определяют показатели активности нейтрофилов (ПАН) по формуле ПАН=3-СЦК. При значении ПАН от 2,25 и более прогнозируют низкий риск развития осложнений. При значении ПАН 2,24-1,5 прогнозируют средний риск развития осложнений. При значении ПАН 1,4-0,75 прогнозируют высокий риск развития осложнений. При значении ПАН от 0,74 до 0 - крайне высокий риск развития осложнений. Способ обеспечивает сокращение сроков выполнения анализа и индивидуализацию прогноза течения язвенного колита и рисков возможных осложнений за счет определения степени анизотропии ядер нейтрофильных гранулоцитов и расчета ПАН. 9 пр.

Способ прогнозирования риска развития осложнений язвенного колита при клиническом обострении, включающий определение прогнозируемой степени тяжести обострения язвенного колита в мазке периферической крови, окрашенном толуидиновым синим при рН 5,0, в поляризационном поле, отличающийся тем, что в динамике, с периодичностью 1 раз в 3 месяца, определяют площадь 100 клеток анизотропного материала в ядре нейтрофильных гранулоцитов, вычисляют средний цитохимический коэффициент (СЦК) по формуле , где х - знак умножения; а, b, с, d - количество клеток с 0, 1, 2, 3 степенью анизотропии, соответственно, причем 0, 1, 2, 3 - условная степень анизотропии, соответствующая площади, занимаемой анизатропным материалом, и определяют показатели активности нейтрофилов (ПАН) по формуле ПАН=3-СЦК, и при значении ПАН от 2,25 и более прогнозируется низкий риск развития возможных осложнений, при значении ПАН 2,24-1,5 - средний риск развития осложнений, при значении ПАН 1,4-0,75 - высокий риск развития осложнений, при значении ПАН от 0,74 до 0 - крайне высокий риск развития осложнений.