ПРЕПАРАТ ИММУНОГЛОБУЛИНА ЧЕЛОВЕКА ПРОТИВ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСА И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2004 года по МПК A61K39/42 

Изобретение относится к медицинской биотехнологии, а именно к производству медицинских биологических препаратов, и может быть использовано для получения антицитомегаловирусных иммуноглобулинов.

Проблема цитомегаловирусной инфекции занимает существенное место в современной медицине (1). Цитомегаловирусная инфекция (ЦМВИ) является одной из актуальных проблем здравоохранения, особенно в педиатрической практике. Протекая у взрослых в основном бессимптомно, ЦМВИ становится опасной для плода во время беременности и в постнатальном периоде (2). ЦМВИ у беременных относится к числу самых распространенных инфекций, приводящих к преждевременным родам, врожденным уродствам, мертворождениям (3). В клиническом аспекте следует также отметить, что у детей с ЦМВИ достоверно чаще наблюдалась внутриутробная гипотрофия, кандидозный стоматит, гепатит, отмечалось развитие вторичных иммунодефицитов (4).

Для профилактики и лечения цитомегаловирусной инфекции широко используются токсичные химиотерапевтические препараты - ганцикловир, ацикловир (5). Применение ацикловира в высоких дозировках может приводить к развитию у больных тяжелых токсических осложнений (панцитопения, нарушение почечной фильтрации, токсические поражения печени и центральной нервной системы) (1). При длительном лечении и повторных курсах указанными химиопрепаратами часто развивается резистентность (6). В случае резистентных штаммов прибегают к применению еще более токсичного препарата - фоскарнета, вызывающего у 20-50% пациентов анемию, у 20-30% - гастроинтестинальные побочные эффекты, у 15-43% - электролитные нарушения. Поэтому при данной нозоологии стали активно применять физиологические и безопасные препараты естественного происхождения - препараты нормального иммуноглобулина человека (7). Для усиления специфической активности в некоторых развитых странах перешли к выпуску гипериммунных антицитомегаловирусных иммуноглобулинов.

В настоящее время за рубежом для лечения и профилактики цитомегаловирусной инфекции применяются следующие специфические антицитомегаловирусные иммуноглобулины, такие как Cytotect (Biotest, ФРГ). CMV-Polyglobin^®, Cytogam (Medimmune, Англия) для внутривенного введения, CMV Ig (Massachusetts Public Health Biological Laboratories, США) и антицитомегаловирусный иммуноглобулин (Биофарма, Украина) для внутримышечного введения. В РФ аналогичные специфические иммуноглобулины отсутствуют.

В качестве основного принципа при получении специфического антицитомегаловирусного иммуноглобулина все вышеупомянутые производители использовали только один критерий - отбор плазмы с высоким естественным титром антител (AT) к ЦМВ у невакцинированных доноров. Основой такого подхода является сравнимость титров антиЦМВ AT у доноров плазмы после натурально прошедшей ЦМВИ и после специальной иммунизации ЦМВ вакциной (8).

По данным многих исследователей (9, 10, 11) между титром антиЦМВ AT (ELISA) и нейтрализующей, протективной активностью отсутствует корреляция, в то же время она наблюдалась между авидностью антиЦМВ антител и уровнем гуморальной защиты. Вероятно, поэтому многими исследователями получены противоречивые данные, в том числе и многочисленные отрицательные (12, 13), при тестировании на эффективность находящихся на рынке антиЦМВ иммуноглобулинов. Вариабельность результатов клинических испытаний объясняется значительной вариабельностью авидности, в том числе и низкой авидностью в различных сериях гипериммунных антиЦМВ иммуноглобулинов (14). На сегодняшний день ни один исследователь или производитель не использовали в качестве второго основного критерия отбора плазмы для фракционирования с целью получения антиЦМВ иммуноглобулина - определение авидности антиЦМВ AT.

Как известно, эффективность AT зависит от их аффинности (15). Аффинность AT - это прочность связи одного антигенсвязывающего центра AT с индивидуальным эпитопом антигена (АГ). Авидность или функциональная аффинность - это суммарная сила взаимодействия AT с АГ. Применительно к физиологическим условиям более адекватно рассматривать авидность, а не аффинность AT, поскольку природные AT и АГ обычно поливалентны. Высокоавидные AT гораздо активнее низкоавидных в ряде биологических реакций, таких как связывание комплемента, опсонизация, нейтрализация вирусов и т.д., и в организме они появляются на стадии реконвалесценции (выздоровления). В экспериментах на животных иммунные комплексы, содержащие низкоавидные AT, длительно персистируют в организме и откладываются на базальной мембране капилляров почек, нарушая их функцию. Высокоавидные антитела обладают более высокой вируснейтрализующей активностью (16). Использование плазмы доноров с низкоавидными AT (индексом авидности ниже 35%) может привести к снижению нейтрализующей активности готового препарата, несмотря на достаточный уровень титра AT к цитомегаловирусу. При наступлении первичной ЦМВИ у беременных уровень авидности антиЦМВ AT определял прогноз беременности - инфицирование плода, новорожденного, выкидыш. Только высокоавидные антиЦМВ AT обеспечили отсутствие врожденной ЦМВИ и сохранение беременности (17).

Примерно 15% ЦМВ сероположительных доноров плазмы положительны в полимеразной цепной реакции (ПЦР) (18), т.е. обладают потенциальной вирусологической опасностью. Вероятно, поэтому до 25% обменных, даже однократных трансфузий крови новорожденным, родившимся от ЦМВ-серонегативных матерей, приводило к развитию ЦМВИ (19). По литературным данным при производстве антиЦМВ иммуноглобулина не используется третий критерий при отборе сырья - контроль за содержанием ДНК-цитомегаловируса в плазме, обеспечивающий максимальную вирусологическую безопасность по отношению к цитомегаловиросу. Максимальная вирусологическая безопасность обеспечивается использованием наиболее высокочувствительного на сегодняшний день метода - полимеразной цепной реакции, в отличие от метода культур клеток и детекции антигена (20). Кроме того, нахождение компонентов цитомегаловируса в плазме доноров при наличии у них антицитомегаловирусных антител говорит о неэффективности этих антител у данного донора - отсутствии иммунного клиренса.

В мировой практике с целью получения антительных антицитомегаловирусных препаратов используется наиболее традиционный подход - оттитровывание гипериммуного сырья - плазмы и более современнный - получение рекомбинантных моноклональных антицитомегаловирусных антител (21). Применение моноклональных AT в отличие от поликлональных, направленных ко всем антигенам вируса - как по природе - белкам, полисахаридам (гликопротеинам), нуклеиновым кислотам, липидам, так и по расположению - оболочечным, матричным, цитоплазматическим, ядерным АГ, имеет свои недостатки.

Основным недостатком является узкая специфичность и возможность “дрейфа” антигенного состава цитомегаловируса, что в итоге может привести к отсутствию эффекта моноклонального препарата. В патентной литературе имеется два патента (22, 23), посвященных классическому способу - отбору высокотитражного сырья для получения специфического антиЦМВ иммуноглобулина. В связи с тем, что в патенте (22) получают препарат с очень низкой электрофоретической чистотой - всего 90% IgG, что не соотвествует требованиям Европейской Фармакопеи (24) на иммуноглобулин человеческий - не менее 95%, поэтому нами данный источник не рассматривался в качестве прототипа.

Известен способ получения препарата антицитомегаловирусного иммуноглобулина (23), который выбран нами в качестве прототипа, предусматривает отбор плазм нативных невакцинированных доноров с высоким титром антител к цитомегаловирусу. Популяция высокотитражных доноров среди всех доноров составила по их данным 4-8%. Титр антиЦМВ AT определялся иммуноферментным способом (ELISA). Плазма далее объединяется и фракционируется этанольным способом по методу Cohn или Oncley. Получают антиЦМВ иммуноглобулин для внутримышечного или для внутривенного введения, которые, могут быть использованы с лечебной или профилактической целью. Как считают сами авторы положительным моментом при отборе высокотитражной плазмы является отсутствие риска вакцинации, а значит вызванных ею побочных эффектов.

Недостатком данного метода является необходимость многоточечного титрования плазм доноров для определения титра антител к ЦМВ, что требует больших финансовых затрат и увеличивает трудоемкость титрования. В отличие от концентрации титр антител для данного способа не является постоянной величиной, а зависит от чувствительности и точности метода анализа (25).

Проведенные нами исследования показали, что приблизительно 35,0±8,1% (М±m, n=40) доноров с высоким титром антител к цитомегаловирусу (не менее 10 РЕ/мл) имеют индекс авидности ниже и равный 42%, т.е. не относятся к высокоавидным антителам. Наличие антител с более низкой авидностью при получении специфического иммуноглобулина может привести к снижению нейтрализующей активности препарата.

Задачей настоящего изобретения является получение иммуноглобулина человека против цитомегаловируса с высоким индексом авидности.

Технический результат заключается в получении иммуноглобулина против цитомегаловируса с высокой специфической активностью.

Сущность изобретения состоит в том, что на первом этапе скрининга осуществляют определение титра антител к ЦМВ. Отбирается плазма невакцинированных доноров с высоким титром антицитомегаловирусных антител, не менее 10 РЕ/мл (Института Пауля Эрлиха). На втором этапе осуществляют отбор плазм доноров, отобранных на первом этапе, с индексом авидности выше 42%. Перед формированием котловой смеси проводят генотипирование минипулов донорского сырья на цитомегаловирус методом полимеразной цепной реакции. Получают этанольным методом фракционирования на холоду по методу Кона 6 иммуноглобулин антицитомегаловирусный с титром антител к цитомегаловирусу не менее 150 РЕ/мл, с индексом авидности не менее 60%, с электрофоретической чистотой не менее 97%, концентрацией белка 9,5-16,0%.

В отличие от прототипа заявленный способ отличается тем, что отбирается плазма доноров с титром антицитомегаловирусных антител не менее 10 РЕ/мл. Дальнейший скриниг высокотитражных плазм доноров с индексом авидности более 42% позволяет повысить авидность, а значит и вируснейтрализующую активностью целевого продукта. Для обеспечения вирусологической безопасности перед формированием котловой смеси проводят генотипирование минипулов донорского сырья на цитомегаловирус методом полимеразной цепной реакции.

Совокупность отличительных признаков заявляемого способа позволяет получить вирусологически безопасный по отношению к цитомегаловирусу целевой продукт со специфической активностью не менее 150 РЕ/мл и с индексом авидности не менее 60%.

Определение титра антицитомегаловирусных антител может осуществляться любыми доступными иммуноферментными тест-системами для определения антител класса IgG или общих иммуноглобулинов к цитомегаловирусу: "ЦМВ-скрин" Биосервис, "BeктоЦMB-IgG-стрип" ЗАО "Вектор-Бест", "Эколаб" Электрогорск.

Авидность антицитомегаловирусных антител определялась с помощью иммуноферментной тест-системы для выявления низкоавидных иммуноглобулинов G к цитомегаловирусной инфекции. "ЦМВ-Диагност" (ТОО Биотехнологическая компания "Биосервис"). Согласно инструкции по ее применению высокоавидными антиЦМВ антителами считались образцы с индексом авидности более 42%. Титр антицитомегаловирусных антител выражался в единицах стандарта Института Пауля Эрлиха (Paul Ehrlich Institute Units, ФРГ) - РЕ/мл. Молекулярные параметры антицитомегаловирусного иммуноглобулина определялись на гель-сорбенте Ультрагеле АкА34 (Фармация-ЛКБ, Швеция) согласно методическим рекомендациям (26). Содержание цитомегаловируса определялось доступным способом, например методом полимеразной цепной реакции (27, 28).

Как видно из представленных в таблице данных, использование предлагаемого способа позволяет получить препарат не только с высоким титром антител к цитомегаловирусу, но существенно повысить авидность антицитомегаловирусных антител и вирусологическую безопасность.

По данным, представленным в таблице, наблюдается статистически достоверное увеличение авидности в полученном препарате по сравнению с препаратом, получаемым на основе только отбора высокотитражного сырья. В качестве препарата сравнения в таблице взят немецкий коммерческий препарат Цитотект (29), зарегистрированный на территории РФ. Это вызвано невозможностью адекватно оценить титр в препарате-прототипе, так как он представлен в виде обратного титра на неизвестной иммуноферментной тест-системе, а не на основе стандарта антител Института Пауля Эрлиха (ФРГ), в единицах активности которого большинство исследователей в мире сравнивают специфическую активность антиЦМВ AT в различных препаратах иммуноглобулина (30, 31, 32, 33).

Способ осуществляется следующим образом.

В качестве сырья используется плазма невакцинированных цитомегаловирусом доноров. Для получения антицитомегаловирусного иммуноглобулина сначала (на первом этапе) отбирают иммуноферментным одноточечным способом плазму доноров с титром антител к ЦМВ не менее 10 РЕ/мл (например, на иммуноферментной тест-системе "Векто ЦМВ-скрин" или "ЦМВ-скрин"). Затем проводят определение авидности в отобранной на первом этапе плазме доноров. Отбирают высокотитражную плазму с индексом авидности 42% и выше. Определение авидности осуществляют на доступной иммуноферментной тест-системе, например на иммуноферментной тест-системе для выявления низкоавидных иммуноглобулинов G к цитомегаловирусной инфекции "ЦМВ - Диагност" (Биосервис, Москва). Перед формированием котловой смеси для исключения попадания цитомегаловируссодержащего материала в объединенный пул плазмы и обеспечения вирусологической безопасности проводят генотипирование минипулов донорского сырья на цитомегаловирус методом полимеразной цепной реакции. Для индентификации вирус-позитивных доноров использован метод перекрестных промежуточных пулов из 8 и 12 донаций (34). Образцы плазмы из донаций, обозначенные цифрами 1-96, объединяются по 8 в промежуточные минипулы 1-8 и по 12 в минипулы А-Н, а также в общий минипул из 96 образцов. В случае положительного результата ПЦР для общего минипула из 96 образцов проводят дополнительный ПЦР-анализ 20 промежуточных минипулов 1-12 и А-Н, по результату которого определяют вирус-положительную донацию.

ПЦР-положительные донации отбраковывают и исключают из загрузки. Только ПЦР-отрицательные плазмы объединяют в пул для фракционирования. Выделение специфического антицитомегаловирусного иммуноглобулина осуществляют спиртовым способом при отрицательных температурах по методу Кона (35). Затем вводят известные стабилизаторы, например глицин, до концентрации 2,3-3,0%, доводят содержание натрия хлорида до концентрации 0,45-0,95% и проводят стерилизующую фильтрацию. После чего в асептических условиях полученный раствор иммуноглобулина разливают по ампулам и запаивают. При необходимости препарат может быть лиофилизирован. Получают препарат антицитомегаловирусного иммуноглобулина для внутримышечного применения с титром антител к цитомегаловирусу не менее 150 РЕ/мл, с индексом авидности не менее 60%, с электрофоретической чистотой не менее 97%, концентрацией белка 9,5-16,0%, содержанием полимеров - не более 5%, фрагментов - не более 5%, мономеров и димеров - не менее 90%, с рН 7,0±0,5.

Примеры конкретного выполнения

Пример 1. На первом этапе с использованием иммуноферментной тест-системы "Векто ЦМВ IgG-скрин" одноточечным методом отбирают плазму 600 доноров с титром антител к ЦМВ не менее 10 РЕ/мл в количестве 200 литров плазмы. На втором этапе скрининга (при разведении пробы плазмы 1:1000) из отобранных на первом этапе плазм 600 доноров с использованием иммуноферментной тест-системы "ЦМВ-Диагност" (Биосервис, Москва) отбирают плазму 400 доноров с индексом авидности выше 42%, примерно 133 литров плазмы. Перед формированием котловой смеси (объединением индивидуальных плазм) проводят генотипирование минипулов донорского сырья на цитомегаловирус методом полимеразной цепной реакции. Выявлено 58 доноров ПЦР-положительных, их донации бракуют и исключают из загрузки. В реактор загружают котловую смесь иммунной плазмы с содержанием антицитомегаловирусных антител 15 РЕ/мл и с индексом авидности 45%, не содержащую ДНК цитомегаловируса. Выделение специфической иммуноглобулиновой фракции проводят спиртовым методом при низких температурах по методу Кона 6. Затем препарат стабилизируют, доводят содержание натрия хлорида до физиологического уровня, концентрацию белка до 11% и проводят стерилизующую фильтрацию. После чего в асептических условиях полученный раствор иммуноглобулина разливают по ампулам, запаивают и лиофилизируют.

Полученный препарат иммуноглобулина человека против цитомегаловируса имеет титр антител к цитомегаловирусу 160 РЕ/мл, индекс авидности 65%, электрофоретическую чистоту 99%, рН 7,0, содержание полимеров 1,7%, фрагментов 1,1%, мономеров и димеров 97,2%.

Пример 2. На первом этапе с использованием иммуноферментной тест-системы "ЦМВ-скрин" Биосервис одноточечным методом отбирают плазму 500 доноров с титром антител к ЦМВ не менее 10 РЕ/мл в количестве 180 литров плазмы. На втором этапе скрининга из отобранных на первом этапе плазм 500 доноров с использованием иммуноферментной тест-системы "ЦМВ - Диагност" (Биосервис, Москва) отбирают 303 донора с индексом авидности более 42%, примерно 110 литров плазмы. Перед формированием котловой смеси (объединением индивидуальных плазм) проводят генотипирование минипулов донорского сырья на цитомегаловирус методом полимеразной цепной реакции. Выявлено 49 доноров ПЦР-положительных, их донации бракуют и исключают из загрузки. В реактор загружают котловую смесь иммунной плазмы с содержанием антицитомегаловирусных антител 20 РЕ/мл и с индексом авидности 45%, не содержащую ДНК цитомегаловируса. Выделение специфической иммуноглобулиновой фракции до стадии III (Б) проводят спиртовым методом при низких температурах по методу Кона 6. Удаление этанола и концентрирование иммуноглобулина осуществляют ультрафильтрацией на полисульфоновых кассетах фирмы Millipor (США). Затем вводят глицин, доводят содержание натрия хлорида до концентрации 0,6% и проводят стерилизующую фильтрацию. После чего в асептических условиях полученный раствор иммуноглобулина разливают по ампулам и запаивают.

Полученный препарат иммуноглобулина человека против цитомегаловируса имеет титр антител к цитомегаловирусу 200 РЕ/мл, индекс авидности 70%, электрофоретическую чистоту 98%, концентрацию белка 10,0%, рН 6,6, содержание полимеров 0,5%, фрагментов 0,8%, мономеров и димеров 98,7%.

Используемая литература

1. Чешик С.Г., Мартынов К.А., Штыкунова Е.В. Лекарственная терапия цитомегаловирусной инфекции. Медицинский и фармацевтический бюллетень. 1996. N7. c-8.

2. Сонькина А.А., Мартынова В.Н. и др. Сравнительная оценка специфических методов лабораторной диагностики цитомегаловирусной инфекции. Герпесвирусные инфекции. M. 1990. с.72-76.

3. Серов В.Н., Манухин И.Б., Кузьмин В.Н. Цитомегаловирусная инфекция в патологии беременности и плода. Акушерство и гинекол. 1997. N6. с.16-19.

4. Чешик С.Г., Фарбер Н.А. и другие. Проблема цитомегаловирусной инфекции в очаге ВИЧ-инфекции. Герпесвирусные инфекции. М. 1990. с.92-98.

5. Dunn D.L., Gillingham K.J., Kramer M.A., et al. A prospective randomized study of acyclovir versus ganciclovir plus human immune globulin prophylaxis of cytomegalovirus infection after transplantation. Transplantation. 1994. V.57(6). p.876-884.

6. Grossi P., Baldanti F., et.al. Treatment of ganciclovir-resistant human cytomegalovirus infection. Journal Nephrology. 1997. v.10. N3, p.146-51.

7. Афанасьева О.И. Высокотитражные иммуноглобулины направленного действия в терапии острых респираторных вирусных инфекций у детей. Автореф. дис. канд. мед. наук. Санкт-Петербург. 1999.

8. Adier S.P., Hempfling S.H., et.al., Safety and immunogenicity of the Towne strain cytomegalovirus vaccine. Pediatric infectious disease Journal. 1998. 17(3). Mar. P.200-206.

9. Lewis R.B., Matzke D.S. et.al. Assesment of the presence of Cytomegalovirus-neutralizing antibody by Plaque-Reduction assay. Rev. Infect. Dis. 1986. 8(suppl.4). p.434-s.438.

10. Schmitz H., Essuman S. Comparison of the neutralizing and ELISA antibody liters to human cytomegalovirus (HCMV) in human sera and in Gamma Globulin preparations. J.Med. Virol. 1986. 20. p.177-182.

11. Weinberg A. Therapy review. The role of immune reconstitution in cytomegalovirus infection.Biodrugs. 2002. 16(2). p.92.

12. Reed E.C., Bowden R.A. et.al. Efficacy of cytomegalovirus immunoglobulin in marrow transplant recipients with cytomegalovirus pneumonia. J.Infect. Dis. 1987. 156. p.641-5.

13. O'Reilly R.Y., Reich L., Gold J., et.al. A randomized trial of intravenous hyperim-mune globulin for the prevention of cytomegalovirus infection following marrow transplantation: preliminary results. Transplant Proc. 1983. 15. pl405.

14. Dussaix E., Chantot S., et.al. CMV-IgG avidity and CMV-IgM concentration in both immunocompromised and immunocompetent patients. Pathol. Biol. (Paris). 1996. May. 44(5). p.405-10.

15. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. М.: Мир. 2000. с.528.

16. Bachmann M.F., Kalinke U. The role antibody concentration and avidity in antiviral protection. Science. - 1997. - v.276. - p.2024.

17. Lazarotto Т., Spezzacatena P., Varani S. Et.al. Anticytomegalovirus immunoglobulin G avidity in identification of pregnant women at risk of transmitting congenital CMV infection. Clinical and diagnostic laboratory immunology, 1999-jan., p.127-129.

18. Elfath M. et al. Detection of CMV by polymerase chain reaction (PCR) in seropositive blood donors. Transfusion. - 1996. - v.36. Supplement.

19. Benson J.W.T., Bodden S.J., Tobin J. Cytomegalovirus and blood transfusion in neonates. Arch. Dis. Child. 1979. - V.54. - p.538-541.

20. Veal N., Payan C., Fray D. et.al. Novel DNA assay for cytomegalovirus detection:

Comparison with conventional culture and pp65 antigenemia assay. Journal of clinical microbiology. 1996. 34(12).p.3097-3100.

21. Европейский патент ЕР0664834. Recombinant humanized anti-cytomegalovirus antibodies. A 61 K 39/42. Дата публикации 1995-08-16.

22. Патент SK278869. Specific hyperimmune anti-cytomegaloviral immunoglobulin preparation for intravenous application and method of producing the same. A 61 K 39/245. Publication date 1998-04-08.

23. U.S. Pat. No.4.617.379 High titer cytomegalovirus immune serum globulin. C 07 K 16/08 A 16 D. Дата публикации 1986-10-14.

24. European Pharmacopoeia, 2000.

25. Егоров A.M. Новые методы иммуноанализа. M.: Мир, 1991.

26. Методические рекомендации по применению физико-химических, химических и иммунохимических методов контроля препаратов иммуноглобулина. МЗ СССР. 1982. с.34-47.

27. Набор для однопробирочного выделения суммы РНК и ДНК ТУ 9398-423-47621885-00.

28. Набор реагентов для обнаружения цитомегаловируса методом полимеразной цепной реакции ТУ 9398-428-17253567-01.

29. Rohm D., Stephan W. Comment on the article intravenous 'immunoglobulins: pharmacological aspects and therapeutic use' by A.Hassig. Vox Sang. 1987. 52: p.158.

30. Filipovich A.H., Peltier M.H., et.al., Circulating cytomegalovirus neutralizing activity in bone marrow transplant recipients: comparison of passive immunity in a randomized study of four intravenous IgG products administered to CMV-seronegative patients. Blood. 1992. Nov 15; 80(10). p.2656-60.

31. Rufenacht R., Morell Immunochemical characterization of intravenous immunoglobulin preparations. Allergol. et. Immunopatol. 1991. 19; 5. p.197-200.

32. Skvaril F., Gardi A. Differences among available immunoglobulin preparations for intravenous use.Rev.Infect. Dis.J. 1988. 7. p.43-48.

33. Патент RU 2157240. Способ получения иммуноглобулинов из фракций, которые образуются при фракционировании человеческой плазмы крови. А 61 К 39/395. Дата публикации 10.10.2000.

34. Федоров Н.А., Елов А.А., Суханов Ю.С. Универсальные технологии предподготовки биоматериалов, выделение ДНК+РНК (НК) однопробирочным методом, последующего их ПЦР- и РТ-ГЩР-анализа на вирусы, бактерии и ПЦР-генотипирования тромбоцитов и лейкоцитов. СПК ФУ "Медбиоэкстрем" МЗ РФ ЦНИИТММТ АМТН. - М. 2000.

35. Cohn E., Strong L.E., Hughes W.L. et.al. Preparation and properties of serum and plasma proteins. IV. A system for the separation into fraction of the proteins and lipoprotein components of bilogical tissues and fluids. J.Am.Chem.Soc. 1946. 68.459.

Изобретение относится к медицинской биотехнологии, а именно к производству медицинских биологических препаратов, и касается способа получения антицитомегаловирусного иммуноглобулина, который может использоваться для иммунопрофилактики и иммунотерапии цитомегаловирусной инфекции. Сущностью изобретения является препарат иммуноглобулина человека против цитомегаловируса для внутримышечного введения, представляющий собой иммуноглобулин G со специфической активностью не менее 150 РЕ/мл и авидностью не менее 60%, и способ его получения. Техническим результатом является получение иммуноглобулина с высоким титром антител к цитомегаловирусу, повышенной авидностью антицитомегаловирусных антител и вирусологической безопасностью. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Препарат иммуноглобулина человека против цитомегаловируса для внутримышечного введения, отличающийся тем, что представляет собой иммуноглобулин G со специфической активностью не менее 150 РЕ/мл и авидностью антицитомегаловирусных антител не менее 60%.2. Препарат по п.1, отличающийся тем, что препарат иммуноглобулина G имеет электрофоретическую чистоту не менее 97%.3. Препарат по п.1, отличающийся тем, что препарат иммуноглобулина G имеет концентрацию белка в растворе 9,5-16,0%.4. Способ получения иммуноглобулина человека, охарактеризованного в п.1, включающий отбор плазмы невакцинированных доноров с титром антицитомегаловирусных антител не менее 10 РЕ/мл, определение индекса авидности, отбор плазмы с индексом авидности выше 42%, генотипирование минипулов донорского сырья на цитомегаловирус методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), объединение ПЦР-отрицательных плазм в пул для фракционирования, фракционирование плазмы по методу Кона 6 и выделение целевого продукта.