СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ ЦЕННОСТИ МЯСА ЖИВОТНОГО Российский патент 2005 года по МПК A61B5/145 G01N33/02 

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, в частности биохимии животных.

Определение содержания гликогена является одним из важных тестов в выявлении энергетического ресурса организма животных.

Гликоген - полисахарид, или животный крахмал, синтезируется организмом и депонируется во всех его органах и тканях. Гликоген является легко мобилизируемой резервной формой глюкозы и представляет собой разветвленный полимер из остатков глюкозы крови.

Известно определение гликогена в крови цитохимически ШИК-реакцией, методом Шабадаша [см. Клиническая лабораторная аналитика под ред. В.В.Меньшикова Том 2 - Частные аналитические технологии в клинической лаборатории. М.: “Лабинформ” - РАМЛД, 1999. С. 59-61], где осуществляют подготовку мазков крови, фиксацию в абсолютном спирте и обработку инкубацию в растворе периодита и окрашивают реактивом Шиффа с последующим окрашиванием гемотоксилином и высушиванием. Где гликоген окрашивается в вишнево-фиолетовый цвет на зеленом фоне препарата и микроскопированием.

Также известно определение гликогена в крови [Horeysi J. Et al. Zaklady chemickeho vysetrovani v lekarstvi. Pppraha, 1957. Справочник Биохимические методы исследования в клинике. Под редакцией академика АМН СССР проф. А.А.Покровского Изд. “Медицина” М. - 1969. Определение гликогена в крови колориметрическим методом с орцином (по Хорейши), стр. 230-231], где гликоген осаждают спиртом, гидролизуют в кислой среде до глюкозы и нагревают в серной кислоте, которая превращается в оксиметилфурфурол и конденсируется орцином, образуя окрашенное соединение. Все вышеуказанное осуществлялось путем кипячения исследуемого биологического субстрата в концентрированном растворе гидроксида натрия в центрифужной пробирке с последующим добавлением спирта, охлаждением, центрифугированием, отбором надосадочной жидкости, растворением осадка в полунасыщенном растворе сернокислого натрия с последующим дополнительным охлаждением, центрифугированием и растворением осадка, одновременное добавление в центрифужную пробирку с исследуемым биологическим субстратом, в контрольную пробирку с водой и в пробирку со стандартным раствором глюкозы 13 мл серной кислоты и 1 мл 1% раствора орцина с последующим нагреванием, охлаждением, фотометрирование против контроля и определение гликогена по формуле:

где Х - количество гликогена, в мг%; Е_о - экстинция опытной пробы; Е_ст - экстинция стандартного раствора.

Недостатком известных методов является отсутствие возможности определения содержания гликогена в мышечных тканях животных для определения питательной ценности мяса животного.

Техническим решением задачи является расширение технологических возможностей.

Поставленная задача достигается тем, что в способе определения питательной ценности мяса животного, включающем кипячение исследуемого биологического субстрата в центрифужной пробирке с последующим добавлением спирта, охлаждением, центрифугированием, отбором надосадочной жидкости, растворением осадка с последующим дополнительным охлаждением, центрифугированием и растворением осадка, одновременное добавление в центрифужную пробирку с исследуемым биологическим субстратом, в контрольную пробирку с водой и в пробирку со стандартным раствором глюкозы 13 мл серной кислоты и 1 мл 1% раствора конденсата с последующим нагреванием, охлаждением, фотометрирование против контроля и определение гликогена по формуле:

где Г - количество гликогена, в мг%; Е_о - экстинция опытной пробы; Е_ст - экстинция стандартного раствора, что в качестве биологического субстрата используют экстракт из мышечной ткани животного, который кипятят в 5% растворе трихлоруксусной кислоты, при этом после первого охлаждения и перед вторым охлаждением в исследуемый образец добавляют по 1 мл диэтилового эфира, насыщенного водой 1:1, причем охлаждение осуществляют в течение 15 минут, центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 15 минут, добавляют в пробирки 2 мл 1% конденсата, в качестве которого используют резорцин, и фотометрируют при длине волны λ=315 нм.

Новизна заявляемого способа обусловлена тем, что предложенный метод позволяет определить содержание гликогена в экстракте из мышц, по которому определяется ценность мяса. Кроме того, заявляемое предложение является более экономичным, т.к. не требует применения особо дорогостоящих химических реактивов.

Пример конкретного осуществления способа определения питательной ценности мяса животного

Подготовка экстракта из мышц животных

Для этого готовили экстракт из мышц - бедренной и голени, полученных от животных крупного рогатого скота, свиней, овец, кроликов, нутрий, лягушек. Мышцы измельчали ножницами и прокручивали через мясорубку, а затем получали гомогенат. Гомогенат готовили с помощью ручного гомогенизатора с тефлоновым пестиком с добавлением физиологического раствора в разведении 1:2 (1 часть измельченных мышц и 2 части физиологического раствора). Затем содержимое перемещали в конические колбы, оставляли на 2 часа в холодильнике, периодически перемешивая для получения насыщенного экстракта из мышц, и фильтровали через бумажный фильтр.

Приготовление растворов

Для приготовления 52% серной кислоты объемом 325 мл необходимо взять 225 мл концентрированной серной кислоты и осторожно прилить 100 мл дистиллированной воды.

Для приготовления 1% раствора резорцина необходимо взять 1 г резорцина и 99 мл 52% раствора серной кислоты.

Для приготовления 5% раствора трихлоруксусной кислоты необходимо взять 5 г трихлоруксусной кислоты и 99 мл дистиллированной воды.

Для приготовления стандартного раствора глюкозы берут 10 мг глюкозы и растворяют его 300 мл дистиллированной воды.

Осаждение и гидролиз гликогена из экстракта мышц животных

Полученный экстракт из мышц помещали в пластмассовую центрифужную пробирку в количестве 3 мл и 3 мл 5% раствора трихлоруксусной кислоты. Затем пробирку помещали в водяную баню на 1,5-2 часа, после охлаждения в пробирку вносили 1 мл диэтилового эфира, насыщенного водой (1:1), суспендировали и охлаждали на льду в течение 15 минут, затем раствор центрифугировали при 3 тыс. об/мин в течение 15 минут. Надосадочную жидкость осторожно убирали пастеровской пипеткой, а в осадок добавляли 1 мл диэтилового эфира, насыщенного водой (1:1), и охлаждали на льду в течение 15 минут, затем вновь центрифугировали при 3 тыс. об/мин в течение 15 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость осторожно убирали пастеровской пипеткой, а осадок перемешали с 3 мл дистиллированной воды, 13 мл 52% раствора серной кислоты перемешивали и 2 мл 1% резорцина.

В контрольную (чистую пробирку) пробирку и со стандартным раствором глюкозы наливали по 3 мл дистиллированной воды, по 13 мл 52% раствора серной кислоты перемешивали и по 2 мл 1% резорцина.

Все пробирки помещали в водяную баню при 80°С в течение 20 минут, затем охлаждали на льду в течение 15 минут. Пробирки с наличием глюкозы имели коричнево-желтое окрашивание.

Фотокаллориметрирование проводили против контроля на КФК-3 при подборе длины волны (λ=315 нм). Расчет содержания гликогена в экстракте из мышц проводят по формуле:

где Г - количество гликогена, в мг%;

Е_o - экстинция опытной пробы;

Е_ст - экстинция стандартного раствора.

Пример: у крупного рогатого скота

Е_o - экстинция опытной пробы составила 0,845;

Е_ст - экстинция стандартного раствора составила 0,253.

Таким образом, подставляя в формулу, получим следующий результат: гликогена

Таблица 1Содержание гликогена в экстракте из мышц у животных (M±m; n=10)Вид животныхКоличество гликогена, в мг%Крупный рогатый скот333,9±0,07Свиньи301,9±0,05Овцы238,3±0,02Кролики2278,5±0,09Нутрии110±0,08Лягушки140,7±0,03

По данным таблицы 1 можно сделать вывод, что высокой питательной ценностью обладает мясо кроликов, затем мясо крупного рогатого скота и т.д.

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, в частности биохимии животных. Способ предусматривает использование в качестве биологического субстрата экстракта из мышечной ткани животного, который кипятят в 5% растворе трихлоруксусной кислоты, при этом после первого охлаждения и перед вторым охлаждением в исследуемый образец добавляют по 1 мл диэтилового эфира, насыщенного водой 1:1, причем охлаждение осуществляют в течение 15 минут, центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 15 минут, добавляют в пробирки 2 мл 1% конденсата, в качестве которого используют резорцин, и фотометрируют при длине волны λ=315 нм. Это позволяет расширить биологические возможности. 1 табл.

Способ определения питательной ценности мяса животного, предусматривающий кипячение исследуемого биологического субстрата в центрифужной пробирке с последующим добавлением спирта, охлаждением, центрифугированием, отбором надосадочной жидкости, растворением осадка с последующим дополнительным охлаждением, центрифугированием и растворением осадка, одновременное добавление в центрифужную пробирку с исследуемым биологическим субстратом, в контрольную пробирку с водой и в пробирку со стандартным раствором глюкозы 13 мл серной кислоты и 1 мл 1%-ного раствора конденсата с последующим нагреванием, охлаждением, фотометрирование против контроля и определение гликогена по формуле

где Х - количество гликогена, мг%; Е_о - экстинция опытной пробы; Е_ст - экстинция стандартного раствора,

отличающийся тем, что в качестве биологического субстрата используют экстракт из мышечной ткани животного, который кипятят в 5%-ном растворе трихлоруксусной кислоты, при этом после первого охлаждения и перед вторым охлаждением в исследуемый образец добавляют по 1 мл диэтилового эфира, насыщенного водой 1:1, причем охлаждение осуществляют в течение 15 мин, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин, добавляют в пробирки 2 мл 1% конденсата, в качестве которого используют резорцин и фотометрируют при длине волны λ=315 нм.