Способ определения сахара в крови Советский патент 1982 года по МПК G01N33/48 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ САХАРА В КРОВИ

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в клинике. Известен способ определения сахара в крОви путем осаждения гликогена этанолом и обработки,осадка серной кислотой. Образовавшуюсяглюкозу фосфорилируют АТФ с ферментом гексокиназы с последующей обработкой АДФ. Количество глюкозы определяют по изменению содержания НАД-Н fl 3-

Однако известный способ трудоемок и не обеспечивает высокой точности (возможны ошибки i15-20%).

Наиболее близким к предлагаемому является способ определения сахара в крови путем получения безбелнового фильтрата ее, обработки последнего антроновым реактивом и фотометрии образовавшегося окрашенного раствора 12 3.

Однако известный способ не обеспечивает высокой точности, трудоемок и требует большого расхода дефицитных реактивов.

Целью изобретения является пов шение точности и ускорение способа.

Цель достигается тем, что согпасно способу определения сгисара в крови путем получения безбелкового фильтрата ее, обработки последнего антроновым реактивом и фотометрии образовавшегося окрашенного раствора, до внесения антронового реактива безбелковый | 1льтрат крови обрабатывают серной кислотой.

Пример. В центрифужную пробирку наливают 0,9 мл 5%-ного раствора трихлоруксусной кнслоты (ТХУ) и сюда же вносят 0,1 МП исследуемой капил10лярной крови, смешивают и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин-. Надосадочную жидкость в количестве 0,5 мл (соответствует 0,05 мл крови) с переносят в обыкновенную пробирку, сюда 1 мл концентрированной серной кислоты и 2 мл антронового индикатора (реактив готовят путем смешивания 34 мл дистиллированной водц с 66 мл концентрированной серной

20 кислоты и растворения в этой смеси 50 мг антрона и 1 г тиомочевины, реактив хранят в холодильнике). Содержимое опытной пробирки смешивают и на 10 мин в кипящую водяную

25 баню, затем охлаждсшт до комнатной температуры н колориьютрируют на ФЭКе с красным светофильтром в кюветах с рабочей шириной 5 мм. Вместо компенссщионной жидкости берут контрольный

30 раствор, которйяй готовят так же, как

опытную пробу, только вместо крови берут 0,5 МП 5%-ного раствора.

Расчет концентрации сахара в исследуемой крови проводят по данным стандартного раствора глюкозы, который обрабатывают так же, как опытную пробу.

Пример построение кёшибровочной таблицы.

Из чистой и просушенной до постоянного веса глюкозы готовят стандартный раствор, который содержит в 1 мл 0,35 мг глюкозы.

Берут 5 обыкновенных пробирок, в первую вводят 0,1 мл стандартного раствора глюкозы, во вторую - 0,2 мл, в третью - 0,3 мл, в четвертую 0,4 мл, в пятую - 0,5 мл. Все пробирки доливают до 0,5 мл дистиллированной водой. После этого во все пробирки доливают по 1 мл концентрированной серной кислоты и по 2 мл антронового реактива. В пробирку для контрольного раствора, т.е. раствора для

0,1

Ог4 0,2 0,3 0,2 0,3 0,4 0,1 0,5

Расчет. Для вычисления концентрации сахара в испытуемой крови необходимо весовые количества глюкозы, которыми пользовались для калибровки, выразить для каждой стандартной точки таблицы в концентрациях глюкозы крови применительно к тем условиям исследования, которие имели место при данном определении сахара в крови. Делают этом по формуле где KX С

наполнения компенсационных кювет, вносят 0,5 МП дистиллированной воды и обрабатывают ее так же, как стандартные пробы. Содержимое смешивают и пробирки помещают на 10 мин в кипятую водяную баню, после охлаждения при комнатной температуре или в холодной воде содержимое пробирок колориметрируют.

При колориметрировании на фотоэлектроколориметре пользуются красным светофильтром и кюветами, с рабочей шириной 5 мм. В качестве компенсационной жидкости напивают контрольный

раствор, который также приобретает некоторую окраску. Отсчет оптической плотности,т.е.экстинкции, ведут по красной шкале правого барабана.В заключение строят калибровочную таблицу оптической плотности стандартных растворов в зависимости от количества глюкозы в них и проводят расчет копустрёщии сахара в исследуемой крови.

0,10 0,20 0,30 0,40 0,50

К - количество глюкозы в стандарте по данным калибровочной таблицы. Предложенный способ позволяет сократить в 2-3 раза время на проведение одного исследования, в 4-5 раз уменьшить объем исследуемого субстрата и реактивов, значительно повысить точность способа и в 2-3 раза повысить его чувствительность. KX-C;-KI концентрация сахара в крови; объем крови, в котором тре- Способ определения сахара в крови буется определить концентра- путем получения безбелкового фильтрацию сахара;та ее, обработки последнего антронообъем крови, пошедшей в опыт,65 вым реактивом и фотометрии образовавФормула изобретения

5 9«35416

шегося окрашенного раствора, о т л и-Идточннки информации,

чающийся тем, что, с цельюпринятые во внимание при экспертизе

повышения точности и ускорения спосо-1. Биохимические методы исследоваба, до внесения антронового реактивания в клинике. М., 1969, с. 232.

безбелковый фильтрат крови обрабаты-2. Петрунькина A.M. Практическая

вают серной кислотой. биохимия. Л., 1961, с. 208.