СПОСОБ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ХЛАМИДИЙНЫХ КОНЪЮНКТИВИТОВ Российский патент 2005 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для диагностики хламидийного конъюнктивита.

Известен способ серологической диагностики офтальмохламидиоза методом иммуноферментного анализа, основанного на выявление в сыворотке крови антител к антигену хламидий классов Ig M, Ig А и Ig G. Определение их концентраций в крови позволяет установить хламидийную этиологию заболевания, его течение (острое, хроническое, хроническое с рецидивами). В промежутке между 5 и 20 днями после появления клинических симптомов заболевания последовательно возникают антитела этих трех классов к антигену хламидий. Ig M является маркером острой стадии, он определяется уже через 5 дней после начала заболевания. В течение 10 дней происходит смена Ig M на Ig А, незначительное время они присутствуют одновременно. В это же время или с небольшой задержкой в 2-3 недели могут быть определены Ig G. Прогрессирование заболевания, переход его в хроническую форму характеризуется появлением антител класса Ig А и Ig G.

Стандартным подходом в серологической диагностике хламидийной инфекции любой локализации является двухкратное обследование больного с интервалом 2-3 недели и по 4-кратному и выше определению антител класса Ig А и G в сыворотке крови против антигена хламидий устанавливают хламидийную этиологию заболевания. Однако повторные исследования через 2-3 недели значительно удлиняют сроки диагностики, а определение концентрации специфических антител путем титрования делают их дорогостоящими.

Наиболее близким по технической сущности является способ серологической диагностики урогенитального хламидиоза методом иммуноферментного анализа (ИФА), заключающийся в однократном количественном путем титрования определении всех трех классов (Ig A, G и М) антител против антигена хламидий. При этом в случае первичной хламидийной инфекции данный способ предусматривает два варианта: первый - Ig G в титре <100, Ig А<50 или ≥50 и Ig М≥50; второй - Ig G≥100, Ig А≥50 и Ig Мі50. Для диагностики хронической (затяжной) хламидийной инфекции, ее рецидива или реинфекции определяют Ig G400, Ig A≥200 и Ig M < 50. Указанный способ имеет существенные недостатки. Так, специфические антитела класса Ig М существуют непродолжительное время - с 5 по 10 день заболевания, что не позволяет их определить у больных, обращающихся к врачу, как правило, в более поздние сроки. Способ не позволяет определить оптимальные сроки болезни, в которые необходимо ее проводить. Он имеет высокую стоимость ввиду количественного определения уровня антител путем титрования и предусматривает диагностику только хронических форм и рецидива этой инфекции. Невысока и эффективность этого способа (М.А.Башмакова с соавт., 2000. 68 с.).

Техническим результатом изобретения является повышение частоты диагностики хламидийных конъюнктивитов, уменьшение числа ложноположительных реакций и сокращение сроков исследования.

Технический результат достигается способом серологической диагностики хламидийных конъюнктивитов, заключающимся в определении двух классов антител против антигена хламидий в сыворотке крови больных с помощью иммуноферментного анализа, отличающийся тем, что определяют одновременно антитела классов Ig А и Ig G против антигена хламидий в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа в сроки конъюнктивита 10-120 дней и в пределах пороговых значений концентрации Ig А от 0,600 до 1,800 и Ig G от 0,800 до 2,700 в единицах оптической плотности диагностируют конъюнктивит хламидийной этиологии.

Способ осуществляют следующим образом. У пациента с конъюнктивитом берут кровь натощак в количестве 5,0 мл из вены в стерильную пробирку.

Затем автоматической пипеткой добавляют необходимые предусмотренные для этого метода реагенты. ИФА проводят на автоматическом фотометре “Униплан” (Россия).

Принцип диагностики: антитела классов Ig А и Ig G против антигена Chlamidia trachomatis, присутствующие в сыворотке пациента, связываются с антигенами хламидий, сорбированными на поверхности лунок полистироловых планшетов, формируя комплекс “антиген -антитело”, меченный ферментом. И последним процессом в ИФА является трансформация ферментной метки в соответствующий сигнал, измеряемый с помощью спектрофотометра. Визуально положительные пробы окрашиваются в желтый цвет. Результаты ИФА регистрируются с помощью спектрофотометра, измеряя оптическую плотность на длине волны 450 нм. И при определении антител против антигена хламидий в концентрации Ig А от 0,600 до 1,800 и Ig G от 0,800 до 2,700 в единицах оптической плотности в сыворотке крови больного, полученной в период с 10 по 120 день заболевания, диагностируют конъюнктивит хламидийной этиологии.

С помощью разработанного способа проведено исследование сыворотки крови 43 больных хламидийным конъюнктивитом (основная группа) в сроки заболевания от 10 до 120 дней. Контрольную группу составили 18 практически здоровых лиц. Полученные результаты представлены в таблице.

Таблица
Серологическая диагностика хламидийного конъюнктивита с помощью ИФАИсследуемые группыКоличество наблюденийЧастота выявления антител к хламидиямIg A (0,6-1,8 в ед. ОП)Ig G (0,8-2,7 в ед. ОП)Ig A+ Ig Gабс. ч.%абс. ч.%абс. ч.%Основная432762,83479,03274,4Контрольная19315,8631,615,2

У 27 (62,8%) из 43 обследованных больных хламидийным конъюнктивитом в сыворотке крови выявлены антитела класса Ig А, у 34 (79,0%) - классаIg G к хламидиям. Одновременно эти антитела были выявлены у 32 больных в пределах пороговых значений их концентраций, отмеченных выше, что лабораторно подтвердило клинический диагноз хламидийной инфекции глаз в 74,4% случаев, повысив частоту диагностики. Кроме того, предлагаемый способ уменьшил число ожидаемых ложноположительных результатов до 5,2%, так как у здоровых лиц по отдельности Ig А и Ig G против антигена хламидий определяют соответственно в 15,8 и 31,6% случаев и вместе - в 5,2%. Исследование продолжалось в течение 2-2,5 часов, что значительно короче по сравнению с 2-3 неделями, необходимыми для исследования парных сывороток.

Как видно из проведенных исследований, не представляется возможным диагностировать хламидийный конъюнктивит отдельно по одному из двух антител к антигену хламидий ввиду их встречаемости у здоровых лиц (Ig А в 15,8%, Ig G в 31,6% случаев), а в случае одновременного выявления антител к антигену хламидий обоих классов (Ig А и Ig G) значительно реже возможны ложноположительные результаты (в 5,2% случаев). Следует также отметить, что среди больных с конъюнктивитами неясной этиологии, обратившихся в клинику УфНИИ глазных болезней, разработанный способ диагностирует хламидийный конъюнктивит в 42,8%, что обосновывает проведение соответствующих лечебно-профилактических мероприятий.

Пример 1. У одного из госпитализованных больных с конъюнктивитом в отделение по изучению инфекционных заболеваний глаз Уфимского НИИ глазных болезней на 10-й день болезни при проведении иммуноферментного анализа образца сыворотки больного показатели значения антител Ig А составили 0,899, а значение класса Ig G - 0,920 в единицах оптической плотности. В соответствии с разработанным способом диагностирован хламидийный конъюнктивит. Правильный результат исследования был подтвержден и обнаружением ДНК хламидий в соскобе конъюнктивы методом ПЦР. Диагностическое исследование продолжалось всего 2 часа, что значительно короче других известных серологических способов диагностики.

Пример 2. В кабинете инфекционных заболеваний глаз Уфимского НИИ глазных болезней у одного из больных с конъюнктивитом на 90-й день болезни взяли кровь из вены. При проведении иммуноферментного анализа показатели значений антител против антигена Chl. trachomatis класса Ig А составили 1,544, а класса Ig G - 1,683 в единицах оптической плотности и был выявлен у пациента хламидийный конъюнктивит.

Пример 3. В глазном кабинете муниципальной поликлиники г. Уфы у одного из больных с конъюнктивитом неясной этиологии на 7-й день болезни взяли кровь. Хламидийный конъюнктивит не был диагностирован, так как в соответствии с разработанным способом при проведении иммуноферментного анализа сыворотки показатели значений антител к антигену хламидий класса Ig А составили 0,350, а класса Ig G - 0,420, что не соответствовало пороговым значениям их уровней по предлагаемому способу.

Таким образом, предлагаемый способ дает возможность за короткое время лабораторно диагностировать хламидийный конъюнктивит в 74,4% случаев при условии одновременного определения двух классов антител к антигену хламидий в пределах пороговых значений их концентрации (Ig А от 0,600 до 1,800 и Ig G от 0,800 до 2,700 в единицах оптической плотности) в сроки заболевания от 10 до 120 дней. Этот метод ввиду простоты в постановке, доступности рекомендуем для широкого внедрения в лечебные учреждения.

Изобретение относится к области иммунологической диагностики и может быть использовано для диагностики хламидийных конъюнктивитов. Сущность изобретения состоит в том, что методом иммуноферментного анализа одновременно определяют антитела классов Ig А и Ig G против антигена хламидий в сыворотке крови в сроки конъюнктивита 10-120 дней и при концентрации Ig А от 0,600 до 1,800 и Ig G от 0,800 до 2,700 в единицах оптической плотности диагностируют конъюнктивит хламидийной этиологии. Техническим результатом является повышение точности и сокращение сроков диагностики. 1 табл.

Способ серологической диагностики хламидийных конъюнктивитов, заключающийся в определении антител против антигена хламидий в сыворотке крови больного методом иммуноферментного анализа, отличающийся тем, что определяют одновременно антитела классов Ig А и Ig G против антигена хламидий в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа в сроки конъюнктивита 10-120 дней и в пределах пороговых значений концентрации Ig А от 0,600 до 1,800 и Ig G от 0,800 до 2,700 в единицах оптической плотности диагностируют конъюнктивит хламидийной этиологии.