ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ ЭХИНОКАНДИНА, СОДЕРЖАЩИЕ МИЦЕЛООБРАЗУЮЩИЕ ПОВЕРХНОСТНО-АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА Российский патент 2005 года по МПК A61K9/08 A61K9/19 A61K38/12 A61P31/10 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим рецептурным смесям, содержащим соединение эхинокандин, включающие, в частности, мицеллообразующие поверхностно-активные вещества, для усиления их стабильности и водорастворимости.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Парентеральные (ip) рецептурные смеси фармацевтических лекарственных средств могут быть введены пациентам внутримышечно (im), внутривенно (iv) или подкожно. Создание рецептурной смеси для конкретного лекарственного средства, зависит от определенной проблемы. В данной области техники, например, хорошо известно, что любая рецептурная смесь должна быть водорастворимой и стабильной. Лиофильно высушенная рецептурная смесь должна обладать способностью образовывать правильно отвердевший слой осадка и легко воссоздаваться (как правило, менее, чем за одну минуту). В конечном счете, рецептурная смесь должна обладать приемлемым внешним видом и содержать официально признанные безопасные наполнители.

Стабильность является существенной характеристикой создаваемой рецептурной смеси, особенно для парентерального применения. На практике рецептурная смесь должна сохраняться в течение, по меньшей мере, двух лет. Поэтому зачастую рецептурную смесь желательно лиофилизировать, чтобы обеспечить больший срок годности и лучшую сохраняемость при комнатной температуре.

Нестабильность и плохая водорастворимость (<0,1 мг/мл) соединений эхинокандина делает их особенно трудными для приготовления рецептурной смеси. Большинство рецептурных смесей, испытанных к настоящему времени, обладает сроком годности менее одного года. Вообще, срок годности должен составлять два и более лет. Поэтому для достижения требуемой стабильности рецептурную смесь, содержащую соединение эхинокандин, необходимо лиофилизировать.

Плохая водорастворимость соединений эхинокандина создает дополнительную проблему при создании рецептурной смеси, содержащей активный эхинокандин. Один из способов получения таких соединений состоит в добавлении поверхностно-активного вещества, которое усиливает растворимость данного лекарственного средства. Однако, в данной области техники общепризнано, что использование определенной концентрации поверхностно-активного вещества, как правило, ограничивает способность препарата лиофилизироваться. Типичная лиофилизированная рецептурная смесь обладает концентрацией поверхностно-активного вещества менее 5 мас.%. При изучении рынка лиофилизированных фармацевтических рецептурных смесей, содержащих поверхностно-активные вещества, установлено, что концентрация поверхностно-активного вещества составляет в лиофилизированном продукте, как правило, менее 5 мас.%. Смотрите, Carpenter et al., Pharm. Res., 14(8), 969-975, 1977-1997, Physicians' Desk Reference, 50^th edition, Medical Economics, Co. NJ (1996). Принято считать, что рецептурная смесь с более высокими концентрациями поверхностно-активного вещества вряд ли образует лиофилизированный продукт с требуемыми характеристиками. То есть присутствие поверхностно-активного вещества вызывает "деформацию" лиофилизированного слоя осадка (брикета), полученного на дне ампулы (флакона), вместо правильно отвердевшего слоя. Этот остаток, как правило, менее стабилен, труден для воссоздания и не воспроизводим.

Из-за плохой водорастворимости соединений эхинокандина для получения приемлемой концентрации соединения эхинокандин в растворе обычно требуется 2-4% (масса на объем) поверхностно-активного вещества. Как отмечено выше, при таком содержании поверхностно-активного вещества лиофилизирование затруднено. Поэтому существует потребность в рецептурной смеси, которая улучшает растворимость соединений эхинокандина в воде, и, вместе с тем, допускает лиофилизацию для получения оптимальной стабильности.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Заявители нашли группу поверхностно-активных веществ, которые солюбилизируют соединения эхинокандина при высоких концентрациях и, как ни странно, сохраняют способность к лиофилизации соответствующей рецептурной смеси. В первом варианте осуществления настоящего изобретения создавали парентеральную фармацевтическую рецептурную смесь, которая включает в себя (i) соединение эхинокандин (или его фармацевтически приемлемую соль), (ii) фармацевтически приемлемое мицеллообразующее поверхностно-активное вещество (напр., полисорбаты, лецитин, соли желчных кислот, полиоксиэтиленовые касторовые масла и их смеси), и (iii) нетоксичный, водный растворитель. Раствор фармацевтической рецептурной смеси факультативно содержит один или несколько стабилизирующих агентов, тонизирующий агент и/или буфер. Массовое соотношение эхинокандина к поверхностно-активному веществу составляет, приблизительно, от 1:1,75 до 1:25 (наиболее предпочтительное соотношение от около 1:2 до около 1:3), а соединение эхинокандин представлено в количестве, превышающем или равным 1 мг/мл. Соответствующее поверхностно-активное вещество, как правило, присутствует в количестве, превышающем 1 масс.% на объем.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения созданная лиофилизированная фармацевтическая рецептурная смесь включает в себя (i) соединение эхинокандин (или его фармацевтически приемлемую соль), (ii) фармацевтически приемлемое, мицеллообразующее поверхностно-активное вещество (напр., полисорбаты, лецитин, соли желчных кислот, полиоксиэтиленовые касторовые масла, и их смеси), и (iii) объемный наполнитель. Мицеллообразующее поверхностно-активное вещество присутствует в количестве, превышающем в лиофилизированном продукте 5 масс.%, а соотношение эхинокандина и поверхностно-активного вещества составляет, приблизительно, от 1:1,75 до 1:25 (предпочтительно соотношение от около 1:2 до около 1:3). Эта фармацевтическая лиофилизированная рецептурная смесь факультативно может содержать один или несколько стабилизирующих агентов и/или буфер. Создана также парентеральная фармацевтическая рецептурная смесь, полученная из лиофилизированного препарата.

Еще в одном варианте осуществления настоящего изобретения разработан способ получения парентеральной рецептурной смеси, который включает смешивание соединения эхинокандин (или комплекс эхинокандин/углевод) и фармацевтически приемлемого, мицеллообразующего поверхностно-активного вещества в водном растворителе.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения разработан способ создания лиофилизированной рецептурной смеси, включающий нижеследующий порядок стадий: (i) растворение в водном растворителе соединения эхинокандин (или комплекса эхинокандин/углевод) в присутствии фармацевтически приемлемого мицеллообразующего поверхностно-активного вещества, в котором данное поверхностно-активное вещество представлено в количестве, превышающем 1 масс.% на объем; (ii) стерильное фильтрование данного раствора; (iii) лиофилизация данного раствора. В большинстве случаев объемный наполнитель добавляется в полученный раствор перед лиофилизацией. Факультативно перед стадией (iii) можно добавить один или несколько буферов, стабилизирующих агентов, тонизирующих агентов, или их сочетание.

Разработано также альтернативное получение лиофилизированной рецептурной смеси, которое включает (i) забуферивание нетоксичного водного раствора до рН между 4,0 и 5,0 с получением буферного раствора; (ii) добавление в забуференный раствор фармацевтически приемлемое мицеллообразующее поверхностно-активное вещество; (iii) охлаждение раствора со стадии (ii) до температуры между 5°С и 15°С (предпочтительно между 7°С и 10°С) с получением охлажденного раствора; (iv) добавление к полученному охлажденному раствору суспензии, включающей соединение эхинокандин или комплекс эхинокандин/углевод и второй нетоксичный водный растворитель; (v) стерильное фильтрование указанного раствора со стадии (iv); и (vi) лиофилизация указанного раствора со стадии (v). Перед осуществлением стадии (v) факультативно могут быть добавлены один или несколько объемных агентов, стабилизирующих агентов и/или тонизирующих агентов.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения разработали парентеральный фармацевтический продукт, который получают растворением в водном растворителе соединения эхинокандин (или комплекс эхинокандин/углевод) в присутствии фармацевтически приемлемого, мицеллообразующего поверхностно-активного вещества с получением раствора, в котором данное поверхностно-активное вещество присутствует в количестве, превышающем 1 масс.% на объем; (ii) стерилизующим фильтрованием полученного раствора; и (iii) лиофилизацией данного раствора в ампуле, в котором массовое соотношение эхинокандина и поверхностно-активного вещества составляет, приблизительно, от 1:1,75 до 1:25. Перед использованием в эту ампулу приливают нетоксичный водный раствор.

Еще в одном варианте осуществления настоящего изобретения разработали способ лечения противогрибковой инфекции у млекопитающего, нуждающегося в нем, который включает введение этому млекопитающему вышеописанной парентеральной рецептурной смеси или парентеральной рецептурной смеси, полученной путем добавления фармацевтически приемлемого водного растворителя к одной из вышеописанной лиофилизированной рецептурной смеси.

Количества и проценты приведены здесь в виде массовых единиц, если не оговорено иначе.

Термин "эхинокандин" относится к соединению, обладающему следующей общей структурой:

где R представляет собой алкильную группу, алкенильную группу, алкинильную группу, арильную группу, гетероарильную группу или их сочетания; R₁, R₂, R₃, R₆, R₇ и R₁₀ независимо представляют собой гидрокси или водород; R₄ представляет собой водород, метил или –СН₂С(О)NH₂; R₅ и R₁₁ независимо представляют собой метил или водород; R₈ представляет собой -ОН, -ОРО₃Н₂, -ОРО₃НСН₃, -ОРО₂НСН₃ или ОSО₃Н; a R₉ представляет собой -Н, -ОН, или –ОSО₃Н.

Термин "алкил" относится к углеводородному радикалу общей формулы C_nH_2n+1, содержащему от 1 до 30 углеродных атомов, если не указано иначе. Алкановый радикал может быть неразветвленным, разветвленным, циклическим, или мультициклическим. Этот алкановый радикал может быть замещенным или незамещенным. Аналогично алкильная часть алкоксигруппы или алканоат имеют то же значение, которое указано выше.

Термин "алкенил" относится к ациклическому углеводороду, содержащему по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь. Алкеновый радикал может быть неразветвленным, разветвленным, циклическим или мультициклическим. Этот алкеновый радикал может быть замещенным или незамещенным.

Термин "алкинил" относится к ациклическому углеводороду, содержащему, по меньшей мере, одну тройную углерод-углеродную связь. Алкиновый радикал может быть неразветвленным или разветвленным. Этот алкиновый радикал может быть замещенным или незамещенным.

Термин "арил" относится к ароматическим составляющим, обладающим единственной (напр., фенильной) или конденсированной кольцевой системой (напр., нафталиновой, антраценовой, фенанатреновой и т.п.). Арильные группы могут быть замещенными или незамещенными. Замещенные арильные группы включают цепочку ароматических составляющих (напр., бифенильная, терфенильная, фенилнафталильная и т.п.).

Термин "гетероарил" относится к ароматическим составляющим, содержащим, по меньшей мере, один гетероатом в ароматической кольцевой системе (напр., пиррольной, пиридиновой, индольной, тиофеновой, фурановой, бензофурановой, имидазольной, пиримидиновой, пуриновой, бензимидазольной, хинолиновой и т.п.). Эта ароматическая составляющая может состоять из одной или конденсированной кольцевой системы. Гетероарильные группы могут быть замещенными или незамещенными.

В органической химии и особенно в органической биохимии обычно подразумевается, что существенное замещение соединений допускается или даже является полезным. В настоящем изобретении, например, термин алкильная группа допускает замещения, которые представляют собой классический алкил, такой как метил, этил, изопропил, изобутил, трет-бутил, гексил, изооктил, додецил, стеарил и т.п. Термин группа, в частности, подразумевает и допускает замещения по алкилам, которые обычны в данной области техники, такие как гидрокси, галоген, алкокси, карбонил, кето, сложный эфир, карбамато и т.п., а также включает незамещенную алкильную часть. Однако, специалистам в данной области понятно, что заместители должны быть выбраны так, чтобы не оказывать отрицательного влияния на фармакологические характеристики соединения или препятствовать использованию лекарственного средства. Подходящие заместители для любой вышеуказанной группы включают алкил, алкенил, алкинил, арил, галоген, гидрокси, алкокси, арилокси, меркапто, алкилтио, арилтио, моно- и диалкиламино, четвертичные аммонийные соли, аминоалкокси, гидроксиалкиламино, аминоалкилтио, карбамил, карбонил, карбокси, гликолил, глицил, гидразино, гуанил, и их сочетания.

"Комплекс эхинокандин/углевод" относится к кристаллическому комплексу, образованному эхинокандином и углеводом, при перекристаллизации эхинокандина из растворителя в присутствии углевода. Более подробное описание комплексов эхинокандин/углевод можно найти в публикации Larew, et аl., поданной 3 марта 1999, под названием "Echinocandin/Carbohydrate Complexes."

"Углевод" относится к альдегидному или кетонному производному многоатомных спиртов с формулой С_n(Н₂O)_n (напр., глюкоза, С₆(Н₂О)₆; сахароза, C₁₂(H₂O)_n). Углеводы включают соединения с относительно небольшими молекулами, такие как простые сахара (напр., моносахариды, дисахариды, и т.п.), а также макромолекулярные (полимерные) вещества, такие как крахмал, гликоген, и целлюлозные полисахариды. Сахара и их простые производные представляют собой углеводы (сахариды), обладающие общим составом (CH₂O)_n. Хотя простые мономерные сахара (глюкозы) описаны в виде полиоксиальдегидов или кетонов, напр., HOCH₂-(СНОН)₄-СНО для альдогексоз (напр., глюкоза) или НОСН₂-(СНОН)₃-СО-СН₂OН для 2-кетоз (напр., фруктоза), их структуры, как правило, изображаются в виде пяти- (фураноза) или шести- (пираноза) членного кольца циклического эфира, напр.

Термин "мицеллообразующее поверхностно-активное вещество" относится к амфифильному веществу, которое спонтанно и обратимо образует водорастворимый агрегат. Более подробное описание образования мицелл и перечень мицеллообразующих поверхностно-активных веществ смотрите у Attwood. et al. Surfactant Systems. Their Chemistry, Pharmacy and Biology, Chapman and Hall (1983). Блок-сополимеры из пропиленоксида и этиленоксида не зарекомендовали себя хорошо при получении рецептурных смесей настоящего изобретения; поэтому данные блок-сополимеры не рассматриваются в качестве мицеллообразующих поверхностно-активных веществ.

Термин "фармацевтически приемлемый", используемый здесь в качестве прилагательного, по существу означает нетоксичный и в основном не наносящий вреда конкретному реципиенту.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Циклические пептиды, используемые в настоящем изобретении, могут быть получены путем культивирования различных микроорганизмов. Подходящий природный продукт исходных материалов, относящихся к семейству циклического пептида эхинокандин включает эхинокандин В, эхинокандин С, эхинокандин D, акулеацин Аγ, мулундокандин, спориофунгин А, пневмокандин A₀, WF11899A и пневмокандин В₀. В большинстве своем циклические пептиды могут характеризоваться в качестве циклического гексапептидного ядра с ацилированной аминогруппой по одной из аминокислот. Аминогруппа естественно встречаемого циклического пептида обычно ацилируется жирнокислотной группой, образующей боковую цепь ядра. Примеры естественно встречаемых ацильных групп включают линолеоил (эхинокандин В, С и D), пальмитоил (акулеацин Аγ и WF11899A), стеароил, 12-метилмиристоил (мулундокандин), 10,12-диметилмиристоил (спориофунгин А и пневмокандин А₀) и им подобные.

Полусинтетические производные могут быть получены в результате удаления жирнокислотной боковой цепи из циклического пептидного ядра, которая образует свободную аминогруппу (т.е. дополнительная ацильная группа -С(О)R отсутствует). Затем этот свободный амин реацилируется подходящей ацильной группой. Например, ядро эхинокандина В реацилируется некоторыми не встречаемыми в природе частями боковой цепи, что создает ряд противогрибковых агентов. Смотрите Патент США №4293489. Специалистам в данной области техники очевидно, что N-ацильная боковая цепь включает целый ряд составляющих боковой цепи, известных в данной области техники. Соответствующие составляющие боковой цепи включают замещенные и незамещенные алкильные группы, алкенильные группы, алкинильные группы, арильные группы, гетероарильные группы и их сочетания. Предпочтительно, эта боковая цепь содержит жесткую кольцевую часть и гибкую алкильную часть, что повышает до предела противогрибковую эффективность. Репрезентативные примеры предпочтительных ацильных боковых цепей включают R-группы, обладающие следующими структурами:

где А, В, С и D независимо представляют собой водород, C₁-C₁₂ алкил, C₂-C₁₂ алкинил, C₁-C₁₂ алкокси, C₁-C₁₂ алкилтио, галоген, или -О-(СН₂)_m-[О-(СН₂)_n]_p-O-(C₁-C₁₂ алкил), или -O-(CH₂)_q-X-E; m равно 2, 3 или 4; n равно 2, 3 или 4; р равно 0 или 1; q равно 2, 3 или 4; X представляет собой пирролидино, пиперидино или пиперазино; а Е представляет собой водород, C₁-C₁₂ алкил, С₃-С₁₂ циклоалкил, бензил или С₃-С₁₂ циклоалкилметил.

Как отмечено выше, описанные здесь циклические пептиды могут быть получены путем ферментации известных микроорганизмов, которые описаны в данной области техники. Последующее деацилирование обычно осуществляется энзиматически с использованием фермента деацилазы с помощью известных материалов, а способ описан в данной области техники.

Например, Патент США №3293482 описывает деацилирование и получение циклического пептида формулы I, где R₄, R₅, и R₁₁ представляют собой метил. R₉ представляет собой водород, a R₁, R₂, R₆, R₇, R₈ и R₁₀, каждый, представляет собой гидрокси. Патент США №4299763 описывает деацилирование и получение циклического пептида формулы I, где R₄, R₅, и R₁₁ представляют собой метил, R₂ представляет собой гидрокси, R₇ и R₉ представляют собой водород, a R₁, R₃, R₆, R₈ и R₁₀, каждый, представляет собой гидрокси. Патент США №3978210 описывает получение акулеацина. Патент США №4304716 описывает деацилирование и получение циклического пептида формулы I, где R₅ представляет собой -CH₂C(O)NH₂; R₁₁ представляет собой метил; R₄ и R₉ представляют собой водород; R₁, R₂, R₃, R₆, R₇, R₈ и R₁₀, каждый, представляет собой гидрокси, а ацильная группа с заместителем R представляет собой миристоил.

Циклические пептиды, где R₂ и R₇, каждый, представляет собой гидрокси, могут быть получены в результате воздействия на соответствующее соединение (где R₂ и R₇, каждый, представляет собой гидрокси; альфа-аминогруппа орнитина может являться свободной аминогруппой или быть ацилированной) сильной кислоты и восстанавливающего агента в соответствующем растворителе при температуре между -5°С и 70°С. Подходящие сильные кислоты включают трихлоруксусную кислоту, трифторуксусную кислоту или эфират трифторида бора. Предпочтительной сильной кислотой является трифторуксусная кислота. Подходящие восстанавливающие агенты включают цианборгидрид натрия или триэтилсилан. Предпочтительным восстанавливающим агентом является триэтилсилан. Подходящие растворители включают метиленхлорид, хлороформ или уксусную кислоту, предпочтительно метиленхлорид. Сильная кислота присутствует в количестве от 2 до 60 моль на моль субстрата, а восстанавливающий агент присутствует в количестве от около 2 до 60 моль на моль субстрата. Процесс кислотного восстановления избирательно удаляет аминную (R₂) и бензильную (R₇) гидроксигруппы.

Ацилирование α-аминогруппы орнитина можно осуществить разными способами, хорошо известные специалистам в данной области техники. Например, указанную аминогруппу можно ацилировать в реакции с замещенным соответствующим образом галоидным ацилом, предпочтительно в присутствии кислотного акцептора, такого как третичный амин (напр., триэтиламин). Обычно реакция осуществляется при температуре между, приблизительно, -20°С и 25°С. Соответствующие реакционные растворители включают полярные апротонные растворители, такие как диоксан или диметилформамид. Выбор растворителя не является существенным, поскольку используемый растворитель является инертным в происходящей реакции, а реагенты достаточно солюбилизированы для проведения требуемой реакции.

Аминогруппу можно также ацилировать в реакции с замещенной соответствующим образом карбоновой кислотой в присутствии связывающего агента. Соответствующие связывающие агенты включают дициклогексилкарбодиимид (DCC), N,N'-карбонилдиимидазол, бис(2-оксо-3-оксазолидинил)фосфинхлорид (ВОР-Сl), N-этоксикарбонил-2-этокси-1,2-дигидрохинолин (EEDQ), бензотриазол-1-илокси-трипирролидинофосфонийгексафторфосфат (РyВОР) и им подобные.

Альтернативно аминогруппа может быть ацилирована сложным активированным эфиром карбоновой кислоты, таким как пара-нитрофенил (НОВТ. H₂O), 2,4,5-трихлорфенил, гидрат гидроксибензотриазола, пентафторфенол, и сложными карбоксилатными эфирами N-гидроксисукцинимида. Предпочтительными ацилирующими составляющими являются 2,4,5-трихлорфенил и сложные карбоксилатные эфиры НОВТ. Обычно реакция продолжается в течение 1-65 часов при температуре от около 0°С до 30°С в апротонном растворителе. Как правило, реакция заканчивается через, примерно, 24-48 часов, осуществляясь при температуре между, примерно, 15°С и 30°С. Соответствующие растворители включают тетрагидрофуран и диметилформамид или их смеси. В большинстве случаев аминогруппа присутствует в эквимолярных соотношениях по отношению к активированному эфиру или с небольшим избытком аминогруппы.

Кислотные предшественники R-COOH получают путем гидролиза нитрила формулы R-CN или сложного эфира формулы R-COO(C₁-C₄ алкил). Промежуточные продукты нитрила и сложного эфира могут быть получены с использованием способов, известных в данной области техники. Например, промежуточные продукты нитрила и сложного эфира, в которых R представляет собой алкоксиарильную составляющую, могут быть получены с использованием Метода А или Метода В.

Метод А. Один эквивалент алкилбромида, йодида, или пара-толуолсульфоната добавляют в смесь, содержащую один эквивалент основания, такого как трет-бутоксид калия или углекислый калий (К₂СО₃), и один эквивалент гидроксиарильного соединения в 200-300 мл ацетонитрила (CN₃CN). Эту реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 6 ч, а затем концентрируют при отрицательном давлении с получением осадка, который растворяют в смеси Et₂O/2N NaOH. Полученные слои разделяют и органический слой сушат над сульфатом магния (МgSО₄), фильтруют и сушат до получения алкоксиарильного продукта.

Метод В. Диэтилазодикарбоксилат (1 экв.) по каплям добавляют к смеси, содержащей гидроксиарильное соединение (1 экв.), алкиловый спирт (1 экв.) и трифенилфосфин (1 экв.) в 200-300 мл THF. Через 17 ч при отрицательном давлении удаляют растворитель с получением остатка, который растворяют в Et₂O. Полученную смесь промывают раствором 2N NaOH, сушат над МgSO₄, фильтруют и концентрируют, получая продукт, который затем кристаллизуют из смеси Et₂O/пентан или, если этот продукт содержит третичный амин, получают хлористоводородную соль и кристаллизуют из метанольной смеси (МеОН)/EtOAc. Промежуточные продукты нитрила и сложного эфира, в которых R представляет собой алкиниларильную составляющую можно получить с использованием Метода С.

Метод С. Смесь, содержащую Et₂O (2 экв.), дихлорид палладия (0,05 экв.), трифенилфосфин (0,1 экв.), йодида меди (0,025 экв.) и алкин (1 экв.), добавляют под азотом (N₂) к одному эквиваленту арилбромида, йодида, или трифторметансульфоната в CH₃CN (600 мл/0,1 моль арильного реагента). Полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 11 ч, а затем при отрицательном давлении удаляют растворитель, чтобы получить остаток, который представляет собой суспензию в 300 мл Et₂O, и затем фильтруют. Полученный фильтрат промывают раствором 1N HCl, сушат над MgSO₄, фильтруют и затем сушат с получением искомого продукта. Эфирные интермедиаты, в которых R представляет собой терфенильную составляющую, могут быть получены с использованием Метода Д.

Метод Р.

1. Получение реагента борной кислоты

К одному эквиваленту охлажденного (-78°С) галоидарила в THF добавляют бутиллитий (1,2 эквивалента). Через 15 минут добавляют триизопропилборат (2 эквив.). Через 10 минут эту реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и резко охлаждают добавлением воды (Н₂O) с последующим добавлением 1N HCl. Полученные слои разделяют и органический слой концентрируют при отрицательном давлении с получением твердого вещества, которое собирают путем фильтрования, и сушат при помощи гексана.

2. Получение терфенилового эфира

В смесь, содержащую арилборную кислоту (1 экв.), К₂СО₃ (1,5 экв.) и метил 4-йодобензоат (1 экв.) (или трихлорфениловый эфир йодобензоата) в толуоле, продуваемом N₂, добавляют тетракис(трифенилфосфин)палладий (0,03 экв.). Полученную реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 7 ч, а затем декантируют для удаления К₂СО₃ и сушат при отрицательном давлении до получения остатка. Этот остаток растирают в CH₃CN и фильтруют до получения искомого продукта. Вышеописанные арильные нитрилы и сложные эфиры могут быть преобразованы в результате гидролиза в соответствующие карбоновые кислоты с использованием Способа Е или Способа F.

Способ Е. Арилнитрил растворяют в этаноле (EtOH) и в избытке 50%-го раствора NaOH и кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч. В эту реакционную смесь добавляют воду до получения осадка твердого вещества. Это твердое вещество собирают фильтрованием, добавляют смесь диoкcaн/6N НСl и полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 17 ч. После практического завершения реакции полученный продукт карбоновой кислоты кристаллизуют путем добавления H₂O, а затем собирают фильтрованием и сушат при отрицательном давлении.

Способ F. К сложному ариловому эфиру в МеОН приливают избыток 2N NaOH и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в течение 5 ч, а затем подкисляют, добавляя избыток НСl. К полученной реакционной смеси добавляют воду до выпадения твердого осадка (карбоновая кислота). Собирают фильтрованием карбоновую кислоту и сушат при отрицательном давлении. Карбоновые кислоты могут быть преобразованы в соответствующие сложные 2,4,5-трихлорфениловые эфиры с использованием нижеприведенного Способа G. Активированные сложные эфиры используют затем для ацилирования аминного центра.

Способ G. Смесь, содержащую ариловую карбоновую кислоту (1 экв.), 2,4,5-трихлорфенол (1 экв.) и DCC (1 экв.) в CH₂Cl₂ перемешивают в течение 17 ч и затем фильтруют. Полученный фильтрат концентрируют с получением остатка, который растворяют в Et₂O, фильтруют, и затем добавляют пентан вплоть до начала кристаллизации. Кристаллы собирают путем фильтрования и сушат при отрицательном давлении. Альтернативно, с использованием способа Н полученную карбоновую кислоту можно активировать путем ее преобразования в соответствующий сложный гидроксибензотриазольный эфир.

Способ Н. Ариловую карбоновую кислоту (1 экв.) и небольшой избыток N-метилсульфонильного замещенного гидроксибензотриазола (1,2 экв.) вводят в реакцию, под азотом, в присутствии небольшого избытка основания в DMF, такого как триэтиламин (Et₃N) (1,3 экв.). По окончании реакции данную смесь разбавляют толуолом и промывают H₂O. Полученую органическую часть разбавляют Н₂O и затем фильтруют с использованием сложного трет-бутилметилового эфира (МТВЕ) для перемещения данного вещества. Полученный твердый осадок промывают с помощью МТВЕ и затем сушат при отрицательном давлении.

Соединение эхинокандина можно выделить очисткой и использовать как таковое в форме его фармацевтически приемлемой соли или гидрата, или в виде комплекса эхинокандин/углевод. Термин "фармацевтически приемлемая соль" относится к нетоксичным кислым аддитивным солям, полученным из неорганических и органических кислот. Соответствующие дериваты солей включают галоидные соединения, тиоцианаты, сульфаты, бисульфаты, сульфиты, бисульфиты, арилсульфонаты, алкилсульфаты, фосфонаты, двузамещенные фосфаты, однозамещенные фосфаты, метафосфаты, пирофосфонаты, алканоаты, циклоалкилалканоаты, арилалконаты, адипаты, аспартаты, бензоаты, фумараты, глюкогептаноаты, глицерофосфаты, лактаты, малеаты, никотинаты, оксалаты, пальмитаты, пектинаты, пикраты, пивалаты, сукцинаты, тартраты, цитраты, камфораты, камфорсульфонаты, диглюконаты, трифторацетаты и им подобные.

"Комплекс эхинокандин/углевод" относится к кристаллическому комплексу, образованному эхинокандиновым соединением и углеводом (или сахаром) при перекристаллизации эхинокандина из растворителя в присутствии углевода. Более подробное описание комплексов эхинокандин/углевод можно найти в публикации Larew, et al., поданную 3 марта 1999 г. под названием "Echinocandin/Carbohydrate Complexes" и включенную здесь путем ссылки. Эти комплексы образуются с использованием стандартных методов кристаллизации, которые обычно применяют для очистки соединений путем их перекристаллизации. Вещество эхинокандина и углевод растворяют при повышенной температуре (приблизительно 45-60°С, предпочтительно ниже 55°С) в растворителе. Затем полученный раствор медленно охлаждают вплоть до начала кристаллизации. Для инициации кристаллизации можно добавить затравочный кристалл (такой, например, как ранее закристаллизованный комплекс или нерастворенный сахар). Подходящие растворители включают любой растворитель, или смесь растворителей, инертные к происходящей реакции, которые достаточно солюбилизируют реагенты, создающих среду, в которой происходит требуемое комплексообразование между углеводом и соединением эхинокандина, такие, например, как протонный или кетонный растворители, включающие метанол, этанол, бензиловый спирт, а также смеси бензилового спирта с растворителями, такими как метанол, этанол, н-пропанол, изопропанол, н-бутанол, 2-бутанол, трет-бутанол, 2-пентанол, 2-метил-1-пропанол, МЕК, ацетон, этилацетат, толуол, ацетонитрил, фторбензол, метиленхлорид, нитрометан, или циклические кетоны, такие как циклопентанон и циклогексанон. Предпочтительные растворители включают метанол, этанол, бензиловый спирт, и смеси бензилового спирта с метилэтил-кетоном, этилацетатом и ацетонитрилом.

Подходящие углеводы включают адонит, арабинозу, арабит, аскорбиновую кислоту, хитин, D-целлюбиозу, 2-дезокси-D-рибозу, дульцит, (S)-(+)-эритрулозу, фруктозу, фукозу, галактозу, глюкозу, инозит, лактозу, лактулозу, ликсозу, мальтол, мальтозу, мальтотриозу, маннит, маннозу, мелецитозу, мелибиозу, микрокристаллическую целлюлозу, палатинозу, пентаэритритол, раффинозу, рамнозу, рибозу, сорбит, сорбозу, крахмал, сахарозу, трегалозу, ксилит, ксилозу и их гидраты. Подходящие углеводы включают также D и L энантиомеры, а также альфа и бета аномеры вышеперечисленных соединений. Предпочтительные углеводы представляют собой простые сахара (напр., моно- и дисахариды).

Соединение эхинокандина может быть включено в рецептурную смесь настоящего изобретения до лиофилизации в концентрациях, превышающих или равных 1 мг/мл. Обычно соединение эхинокандина присутствует в диапазоне от около 1 мг/мл до около 50 мг/мл, предпочтительно в диапазоне концентраций от около 1 мг/мл до около 40 мг/мл, более предпочтительно от около 1 мг/мл до около 30 мг/мл и наиболее предпочтительно от около 8 мг/мл до около 12 мг/мл.

Рецептурные смеси настоящего изобретения содержат мицеллообразующее поверхностно-активное вещество, которое представляет собой фармацевтически приемлемый амфифильный наполнитель, обладающий гидрофобными и гидрофильными элементами или группами, которые обладают способностью солюбилизировать в воде водонерастворимое лекарственное средство. В большинстве случаев значения HLB 10-18 наиболее благоприятны для солюбилизации соединений эхинокандина. Поверхностно-активное вещество представлено в рецептурной смеси в массовом соотношении эхинокандина и поверхностно-активного вещества от около 1:1,75 до около 1:25, более предпочтительно - в соотношении от около 1:2 до около 1:3. Верхний предел добавляемого к рецептурной смеси поверхностно-активного вещества может быть ограничен из-за его токсичности применительно к фармацевтическому лекарственному средству; поэтому верхний предел может варьировать в зависимости от конкретного выбранного поверхностно-активного вещества. Подходящие поверхностно-активные вещества включают полисорбаты (напр., полисорбат 80, полисорбат 40, полисорбат 20), производные полиоксиэтиленового касторового масла (напр., Chemophors™ (касторовое масло полиоксил 35, гидрогенизированное касторовое масло полиоксил 40 и гидрогенизированное касторовое масло полиоксил 60), доступные от BASF)), полиоксиэтиленстеараты (напр., Solutol™ HS 15 (макрогол-660-гидроксистеарат, доступный от BASF), сорбиттриолеат, соли желчных кислот (напр., холевые кислоты, дезоксихолевые кислоты и их соли) (напр., натрийдезоксихолат или натрийтауродезоксихолат)), лецитин, и им подобные. Предпочтительные поверхностно-активные вещества включают полисорбат 80, полисорбат 40, полисорбат 20, и полиоксиэтиленгидроксистеараты, обладающие восстанавливаемыми гистаминными эффектами (напр., Solutol™ HS 15). Поверхностно-активные вещества, которые солюбилизируют неудовлетворительно, включают полоксамеры, которые представляют собой группу сополимеров пропиленоксида и этиленоксида.

"Полисорбат" относится к веществам, обладающим нижеследующей общей формулой:

где x+y+w+z равно целому числу между 5 и 20.

Коммерческий продукт Твин™ 20, 40 и 80 (доступный от ICI Americas Inc., Wilmington, DL) представлен вышеприведенной структурой, когда x+y+w+z=20.

"Лецитин" относится к веществам, обладающим нижеследующей общей структурой:

R представляет собой типичный остаток стеариновой кислоты, пальмитиновой кислоты или олеиновой кислоты.

"Соли желчных кислот" относятся к веществам, обладающим нижеследующей общей структурой:

где R3, R7, и R12 представляют собой группы -ОН, Н или SО₃, a R24 представляет собой -ОН или щелочную соль СО-2

Типичный раствор рецептурной смеси включает соединение эхинокандина и мицеллообразующее поверхностно-активное вещество. Заявители наблюдали, что включение мицеллообразующего поверхностно-активного вещества не только оптимизирует солюбилизацию соединения эхинокандина, но также повышает стабильность данного раствора. Рецептурная смесь может факультативно включать один или несколько компонентов в виде буфера, стабилизирующего агента, и/или тонизирующего агента. Если данная рецептурная смесь находится в виде раствора, то в нем присутствует также и растворитель. Растворители обычно выбирают с учетом их безопасного (GRAS) парентерального введения млекопитающему. Как правило, безопасные растворители представляют собой нетоксичные водные растворители, такие, например, как вода и другие нетоксичные растворители, которые являются водорастворимыми или смешиваются с водой. Подходящие растворители включают воду, этанол, пропиленгликоль, полиэтиленгликоли (напр., PEG400, PEG300), и т.д. и их смеси. Предпочтительным растворителем является вода.

Типичная лиофилизированная рецептурная смесь включает эхинокандиновое соединение, фармацевтически приемлемое поверхностно-активное вещество, объемный наполнитель и/или стабилизирующий агент. Данный препарат может необязательно включать один или несколько буферящих агентов. Завители наблюдали, что добавление мицеллообразующего поверхностно-активного вещества не только оптимизирует воссоздание лиофилизированной рецептурной смеси в нетоксичном водном растворителе, но также придает повышенную стабильность лиофилизированным материалам.

Раствор и лиофилизированная рецептурная смесь могут необязательно содержать стабилизирующий агент. Стабилизирующий агент обычно представлен в диапазоне концентраций от около 0,5% до около 40% (масс./об.), более предпочтительно в диапазоне концентраций от около 1% до около 6%. Термин "стабилизирующий агент" относится к фармацевтически приемлемому наполнителю, который усиливает химическую или физическую стабильность активного ингредиента в рецептурной смеси. Подходящие стабилизирующие агенты включают полиолы (напр., полиэтилен, и пропиленгликоли, и углеводы, такие как сахароза, трегалоза, фруктоза, лактоза и маннит), аминокислоты и поверхностно-активные вещества, такие как полисорбаты и соли желчных кислот. Предпочтительные стабилизирующие агенты для лиофилизированной рецептурной смеси включают маннит, сахарозу, трегалозу, фруктозу, лактозу и их сочетания. В растворе наиболее предпочтительными стабилизирующими агентами являются соли желчных кислот, полиэтиленгликоли и пропиленгликоль.

И раствор, и лиофилизированные препараты могут также факультативно содержать буфер. Буфер присутствует в диапазоне концентраций от около 0,03% до около 5,0% (масс/об.), более предпочтительно - в диапазоне концентраций от около 0,1% до около 1,0%. Термин "буфер" относится к фармацевтически приемлемому наполнителю, который поддерживает рН раствора в конкретном диапазоне, специфичном для забуфериваемой системы. Подходящий диапазон рН находится в интервале 3,0-7,0. Предпочтительный диапазон рН находится в интервале 4,0-5,5, наиболее предпочтительный 4,0-5,0. Подходящие буферы включают ацетаты, цитраты, фосфаты, тартраты, лактаты, сукцинаты, аминокислоты и тому подобное. Предпочтительные буферы для растворимого препарата включают ацетат, цитрат, тартраты, фосфатные соли и их сочетания. Для лиофилизированной рецептурной смеси предпочтительным буфером является винная кислота.

Растворимые рецептурные смеси могут факультативно содержать один или несколько тонизирующих агентов. Тонизирующий агент присутствует, как правило, в диапазоне концентраций от около 1 до около 100 мг/мл, более предпочтительно в диапазоне от около 9 до около 50 мг/мл. Термин "тонизирующий агент" относится к фармацевтически приемлемому наполнителю, который делает данный раствор совместимым с кровью. Желательно, чтобы тонизирующие агенты присутствовали в рецептурных смесях для инъекций. Подходящие тонизирующие агенты включают глицерин, лактозу, маннит, декстрозу, хлорид натрия, сульфат натрия, сорбит и тому подобное. Предпочтительные тонизирующие агенты включают маннит, лактозу и хлорид натрия и их сочетания.

При лиофилизации эти рецептурные смеси могут факультативно содержать объемный наполнитель. Такой объемный наполнитель присутствует в препарате в диапазоне концентраций от около 2% до около 10% (масс./об.), более предпочтительно в диапазоне концентраций от около 3% до около 6%.

Термин "объемный наполнитель" относится к фармацевтически приемлемому наполнителю, который увеличивает объем рецептурной смеси, образующей при лиофилизации правильно отвердевший осадок (брикет). Подходящие объемные наполнители включают маннит, глицин, лактозу, сахарозу, трегалозу, декстран, гидроксиэтиловый крахмал, фиколл и желатин. Предпочтительные объемные наполнители включают маннит, сахарозу, трегалозу, лактозу и их сочетания.

Рецептурные смеси можно получать с использованием традиционных способов растворения и перемешивания. Например, большое количество лекарственного вещества (напр., эхинокандиновое соединение или комплекс эхинокандин/углевод) растворяют в нетоксичном водном растворителе в присутствии фармацевтически приемлемого мицеллообразующего поверхностно-активного вещества и факультативно одного или нескольких объемных наполнителей, буферов, стабилизирующих агентов и/или тонизирующих агентов. Затем полученный раствор стерильно фильтруют и для создания требуемой рецептурной смеси предпочтительно лиофилизируют. Как правило, перед лиофилизацией в растворе находится поверхностно-активное вещество в количестве, превышающем 1% (масс./об.).

Альтернативно фармацевтический раствор можно получить путем создания водного буферного раствора, забуференного, приблизительно, до рН 3,0-7,0 (предпочтительно от 4,0 до 5,5, более предпочтительно от около 4,0 до 5,0). Используемый буфер может представлять собой любой из ранее описанных буферов. Затем к забуференному раствору добавляют мицеллообразующее поверхностно-активное вещество и этот раствор охлаждают, приблизительно, до 5°С-15°С (предпочтительно около 7°С-10°С). Суспензию соединения эхинокандина или комплекса эхинокандин/углевод в нетоксичном водном растворителе (который может быть или не быть тем же растворителем, что используется в буферном растворе) добавляют к охлажденному раствору, содержащему соответствующее поверхностно-активное вещество. Перед лиофилизаций к этому раствору можно добавить один или несколько объемных наполнителей, стабилизаторов и/или тонизирующих агентов. Затем результирующий раствор разбавляют растворителем, фильтруют и лиофилизируют до получения требуемой рецептурной смеси.

Подходящий способ лиофилизаций описан у Nail et al. Freeze Drying Principles and Practice in Pharmaceutical Dosage Forms, 2^nd Ed., Marcel Dekker, Inc. NY, pp.163-233 (1993). Рецептурную смесь предпочтительно лиофилизируют в ампуле, которую можно хранить до использования. Перед употреблением в ампулу приливают нетоксичный водный растворитель для растворения лиофилизированного материала, получая таким образом раствор, который может быть использован для парентерального терапевтического применения. Специалистам в данной области технике очевидно, что водный растворитель включает и другие традиционные растворы, используемые для такого применения (напр., физиологический раствор, раствор декстрозы и т.д. и т.п.).

Обычно, лиофилизированные рецептурные смеси содержат объемный наполнитель, а нелиофилизированные рецептурные смеси содержат один или несколько тонизирующих агентов. При применении эти рецептурные смеси обычно разбавляют или воссоздают (если препарат лиофилизирован) и в дальнейшем, по необходимости, перед введением разбавляют. Примерная инструкция воссоздания лиофилизированного продукта заключается в добавлении десяти мл воды для инъекций (WFI) в ампулу и осторожного встряхивания для его растворения. Обычно время воссоздания составляет менее одной минуты. Затем, перед введением этот полученный раствор дополнительно разбавляют инфузионным раствором, таким, например, как 5%-ный раствор декстрозы в воде (D5W).

Активный ингредиент, как правило, готовят в виде фармацевтически дозированных форм, чтобы получить легко контролируемую дозу лекарственного средства и дать пациенту простой и легкий в обращении продукт. Рецептурные смеси могут включать активный ингредиент от 0,1 масс.% до 60 масс.%, более предпочтительно от около 10 масс.% до около 30 масс.%.

Используемый здесь термин "дозовая единица" или "дозируемая единица" относится к физически дискретным элементам, которые содержат заранее установленное количество активного ингредиента, предназначенного для получения требуемого терапевтического эффекта. Если дозовую единицу вводят парентерально, ее обычно создают в форме измеренных единиц в ампулах (или во флаконах).

Доза для введения может варьировать в зависимости от физических характеристик пациента, серьезности болевых симптомов пациента и используемых способов введения лекарственного средства. Конкретную дозу для данного пациента обычно устанавливают на основании заключения лечащего врача.

Подходящие носители, разбавители и наполнители, известные в данной области техники, включают материалы, такие, например, как углеводы, мази, водорастворимые и/или набухающие полимеры, гидрофильные или гидрофобные вещества, желатин, масла, растворители, вода, и им подобные. Выбор конкретного носителя, разбавителя или наполнителя зависит от способов и цели, с которой применяется активный ингредиент. Рассматриваемые рецептурные смеси могут также включать увлажняющие агенты, смазочные агенты, эмульгаторы, суспендирующие средства, консерванты, подсластители, отдушки, ароматизаторы и их сочетания.

Фармацевтическую композицию можно вводить с использованием разных способов. Подходящие способы включают инъекцию. Применяемый конкретный способ лечения зависит от вида инфекционного заболевания, которое лечат.

Установлено, что эхинокандин и полусинтетические соединения эхинокандина проявляют противогрибковую и антипаразитическую активность, подавляя рост различных заразных грибов, включая виды Candida (т.е., С.Albicans, С.Рагарsilosis, С.Krusei, С.Glabrata, С.Tropicalis или С.Lusikaniaw); виды Torulopus (т.е., Т. Glabrata); виды Aspergillus (т.е., A. Fumigatus); виды Histoplasma (т.е., H. Capsulatum); виды Cryptococcus (т.е., С.Neoformans); виды Blastomyces (т.е., В. Dermatitidis); виды Fusarium; виды Trichophyton, Pseudallescheria boydii, Coccidioides immits, Sporothrix schenckii, и т.д.

Соединения данного типа подавляют также рост некоторых организмов, ответственных, главным образом, за условно-патогенные инфекции у индивидуумов с угнетенным иммунитетом, подавляя, например, рост Pneumocystis carinii (являющихся причиной заболевания организма пневмоцистной пневмонией (РСР) у пациентов со СПИД и у других пациентов с пораженным иммунитетом. Другие простейшие, деятельность которых подавляется соединениями эхинокандинового типа, включают виды Plasmodium, виды Leishmania, виды Trypanosoma, виды Cryptosporidium, виды Isospora, виды Cyclospora, виды Trichomonas, виды Microsporidiosis, и т.д. и т.п.

Следовательно, указанные рецептурные смеси настоящего изобретения пригодны для борьбы с системными грибковыми инфекциями или с кожными грибковыми инфекциями. В соответствии с этим рассмотренные способы и рецептурные смеси настоящего изобретения могут использоваться с целью производства лекарственного средства для описанного здесь терапевтического применения. Например, грибковая активность (предпочтительно активность Candida albicans или Aspergillus fumigakis) или паразитическая активность может ингибироваться в результате контактирования фармацевтического препарата, полученного в настоящем изобретении, соответственно с грибком или паразитом. Термин "контактирование" включает слияние, или соединение, или явное прикосновение, или обоюдное соприкосновение соединения настоящего изобретения с паразитом или с грибком. Данный термин не подразумевает каких-либо дополнительных ограничений для данного способа, как, например, для механизма подавления. Указанные способы касаются подавления паразитической и грибковой активности в результате действия данных соединений и присущих им антипаразитических и противогрибковых свойств.

Разработан также способ лечения грибковой инфекции, который включает введение эффективного количества фармацевтической рецептурной смеси настоящего изобретения хозяину, нуждающемуся в таком лечении. Предпочтительный способ включает лечение инфекции, вызванной Candida albicans или Aspergillus fumigatis. Термин "эффективное количество" относится к количеству активного соединения, которое обладает способностью ингибировать грибковую активность. Вводимая доза варьирует в зависимости от таких факторов, как природа и тяжесть инфекции, возраст и общее состояние здоровья хозяина и толерантность хозяина к данному противогрибковому агенту. Режим введения отдельной дозы также может варьировать в соответствии с этими факторами. Данное лекарственное средство можно давать в виде однократной ежедневной дозы или в виде нескольких доз в течение дня. Назначенный режим может длиться от около 2-3 дней до около 2-3 недель или дольше. Типичная ежедневная доза (вводимая однократно или разделенная на субдозы) ограничена дозовым порогом между около 0,01-100 мг активного соединения на 1 кг массы тела. Предпочтительные ежедневные дозы обычно составляют между около 0,1-60 мг/кг и более предпочтительно между около 2,5-40 мг/кг.

Ниже приведены примеры, которые иллюстрируют, но не ограничивают настоящее изобретение. Все представленные здесь ссылки включены таким образом в описание изобретения, как если бы они были прямо в нем воспроизведены.

ПРИМЕРЫ

Эхинокандиновое соединение, используемое в качестве иллюстрации рецептурных смесей настоящего изобретения, получают как описано для нижеследующих препаратов. В частности, приводимая ниже последовательность описывает получение противогрибкового соединения 6 (а), обладающего следующей структурой:

Специалистам в данной области техники следует иметь ввиду, что нижеприведенное служит в качестве иллюстративного примера и что другие полусинтетические соединения эхинокандина, пригодные в качестве противогрибковых агентов, могут быть синтезированы с использованием аналогичных методик или методик, описанных в ранее приводимых ссылках, представленных в настоящем описании. Материалы, используемые в нижеследующих образцах, доступны от Aldrich Chemicals (Milwaukee, Wisconsin), если не указано иначе.

Препараты соединения

Получение 4-Бром-4'-пентилоксибифенила 1(а)

Безводный К₂СОз (416 г, 3 моль) добавляют в смесь, состоящую из 4-бромо-4'-гидроксибифенила (300 г, 1,2 моль), 1-йодопентана (234 мл, 1,79 моль) и 2-бутанона (600 мл). Полученную реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 44 ч пока ТСХ (гексан/EtOAc 85:15) не покажет полного поглощения бромного спирта. По окончании кипячения смесь охлаждают до около 30°С, разбавляют ее с помощью СН₂Сl₂ (600 мл) и затем фильтруют. Фильтрат дважды промывают с помощью Н₂O и дважды насыщенным водным раствором NaCl, сушат над безводным Na₂SO₄, фильтруют и затем сушат при пониженном давлении до получения твердого вещества. Это твердое вещество выделяют путем фильтрования, повторно промывают общим объемом 2 л ледяного гептана для удаления всех следов йодопентана и затем сушат в течение ночи при высоком отрицательном давлении. Выход: 340 г (88%) белого порошка.

Альтернативное получение 4-бромо-4'-пентилоксибифенила 1(а):

4-Бром-4'-гидроксибифенил (12,5 г, 50,2 ммоль) вносят в раствор NaOH (2,28 г, чистотой 97%, 55,2 ммоль) на деионизованной Н₂O (150 мл) с последующим добавлением 1-йодопентана (11,9 г, 60,2 ммоль) и тетрабутиламмонийбромида (0,82 г, 2,51 ммоль). Полученную смесь перемешивают при 90°С в течение 3,75 ч до появления в растворе твердых частиц. Затем, поскольку реакция продолжается, начинает осаждаться требуемый продукт. Эту смесь медленно охлаждают и затем фильтруют до получения твердого вещества, которое промывают деионизованной водой до нейтрального рН в фильтрате и затем сушат в течение 16 ч при отрицательном давлении в термостате при 30°С.

Выход: 15,41 г (96%) 5а. R_f 0,5 (гексан/EtOAc 97:3). ¹H ЯМР: δ 0,93 (т, 3Н, J=6,9 Гц); 1,41 (м, 4Н); 1,79 (м, 2Н); 3,97 (т, 2Н, J=6,6 Гц); 6,98 (м, 2Н); 7,23 (м, 6Н). ¹³С ЯМР: δ 14,03: 22,43: 28,22; 28,98; 68,12; 114,91; 120,71; 127,93; 128,27; 131,77; 132,24; 139,82; 159,03. MS(FAB⁺); м/z 320. ИК(СНСl₃): 2960, 2936, 2874, 1608, 1518, 1485, 1475 см^-1. Анализ С₁₇Н₁₉ВrО: Теоретический расчет: С, 63,96; Н, 6,00; Вr, 25,0; Фактически обнаружено: С, 64,10; Н, 5,97; Вr, 25,28.

Получение 4-борная кислота-4'-пентилоксибифенила 2 (а)

К охлажденной (-20°С) смеси соединения 1 (а) (100 г, 0,31 моль) в трет-бутилметилэфире (МТВЕ) (1 л) медленно по каплям под N₂ приливают н-бутиллитий (150 мл 2,5 М гексанового раствора, 0,37 моль) при поддержании внутренней температуры между -19°С и -18°С. Полученную смесь перемешивают в течение 3,5 ч при температуре между -17°С и -16°С, что дает светлый желто-зеленый раствор. Этот раствор охлаждают до -78°С и разбавляют 100 мл безводного THF, что приводит к выпадению белого осадка. Затем, в течение 1,5 ч по каплям под азотом приливают охлажденный (-78°С) раствор триизопропилбората (145 мл, 0,62 моль) в МТВЕ (200 мл), поддерживая температуру реакции между -78°С и -74°С. Полученную реакционную смесь перемешивают в течение 1,5 ч при -78°С, затем согревают до -50°С в течение 1 ч, после чего удаляют охлаждающую баню и эту смесь перемешивают в течение ночи (16-21 ч), что приводит к выпадению белого порошка. Смесь энергично встряхивают с 2 М НСl (1000 мл) в течение 5 минут, полученные слои разделяют и органический слой сушат при пониженном давлении до получения остатка. Данный остаток разбавляют с МВТЕ (100 мл), затем гептаном (800 мл) и получают белый порошок, который выделяют отсасывающим фильтрованием и промывают 3 раза гептаном (300 мл).

Выход: 88 г (98%). R_f 0,45 (CH₂Cl₂/MeOH 95:5). ¹H ЯМР: δ 0,92 (м, 3Н); 1,41 (м, 4Н); 1,80 (м, 2Н); 4,00 (м, 2Н); 6,99 (м, 2Н); 7,45-7,63 (м, 3Н); 7,67 (м, 2Н); 8,24 (д, 1Н, J=8,3 Гц). ¹³С ЯМР: 14.01; 22,26; 28,03; 28,77; 39,61; 39,89; 40,17; 40,45; 67,82; 114,77; 125,32; 127,83; 132,93; 134,84; 141,88; 158,71. MS(FD^-): m/z 284/ ИК(СНСl₃): 2959, 2952, 2874, 1606, 1526, 1500 см^-1.

Получение соединения 3(а):

Раствор толуола (174 мл) и пропанола (20 мл) дегазируют 3 раза, прилагая к данному раствору отрицательное давление в течение 20-30 секунд с последующей продувкой N₂. Дегазируют также 2 М раствор Na₂CO₃. К смеси из метил 4-йодбензоата (14,12 г, 53,9 ммоль) и соединения 2 (а) (15,0 г, 52,8 ммоль) приливают раствор толуол/пропанол (97 мл) с последующим дегазированием 2 М раствора Na₂CO₃ (29 мл, 58,0 ммоль). Полученную смесь дегазируют 2 раза в течение 20-30 секунд каждый раз под давлением N₂ выше атмосферного с последующим добавлением ацетатпалладия (II) (0,24 г, 1,1 ммоль) и трифенилфосфина (0,84 г, 3,2 ммоль), а затем дегазируют более 2 раз. Затем эту реакционную смесь кипятят с обратным холодильником под N₂ в течение 5 ч, получая светло-желтую смесь. Данную смесь охлаждают до 23°С с образованием осадка, который собирают фильтрованием, последовательно промывают толуолом (123 мл), MTBE/EtOAc 2:1 (143 мл), деионизованной водой (123 мл) и MTBE/EtOAc 2:1 (42 мл), а затем сушат в течение 16 ч в вакуумном термостате при 35°С. Выход: 18,7 г (94%). R_f 0,48 (бензол). ¹H ЯМР: δ 0,93 (т, 3Н, J=6,80 Гц); 1,42 (м, 4Н); 1,81 (м, 2Н); 3,95 (с, 3Н); 4,00 (т, 2Н, J=6,48 Гц); 6,97 (д, 2Н, J=8,52 Гц); 7,55 (д, 2Н, J=8,52 Гц); 7,66 (м, 6Н); 8,10 (д, 2Н, J=8,20 Гц); MS(FD⁺): m/z 374. ИК(КВr): 2938, 1723^-1. Анализ С₂₅Н₂₆O₃: Теоретический расчет: С, 80,18; Н, 7,00;

Фактически обнаружено: С, 79,91; Н, 6,94.

Получение Соединения 4(а):

Смесь, состоящую из соединения 3(а) (80 г, 0,21 ммоль), 5 М КОН (160 мл) и цетилтриметиламмонийбромида (4,8 г, 0,013 моль) в ксилене (800 мл), кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч, а затем охлаждают до 10°С и фильтруют, получая белое твердое вещество. Это твердое вещество промывают 3 раза H₂O (каждый раз 500 мл) для удаления катализатора и большей части основания. Полученное вещество обрабатывают DME (500 мл). Доводят до нужного рН добавлением 6 М НСl (100 мл). Полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 30 минут, периодически замеряя рН, чтобы убедиться в уровне кислотности, затем охлаждают и фильтруют. Полученное твердое вещество последовательно промывают МТВЕ (400 мл) и водой (4×400 мл) до получения (по лакмусу) нейтрального значения промывочных жидкостей. Выход: 76 г (98%-ный выход). ¹H ЯМР δ 0,89 (т, 3Н, J=6,82 Гц), 1,38 (м, 4Н), 1,73 (м, 2Н), 3,96 (т, 2Н, J=6,3 Гц), 6,95 (д, 2Н, J=8,56 Гц), 7,57 (д, 2Н, J=8,54 Гц), 7,64-7,74 (м, 6Н), 8,00 (д, 2Н, J=8,21 Гц), 8,09 (с, 1Н). MS (FD⁺) m/z 360. ИК(КВr): 2958, 2937, 2872, 1688 см^-1. Анализ С₂₄Н₂₄O₃: Теоретический расчет: С, 79,97; Н, 6,71;

Фактически обнаружено: С, 80,50; Н, 6,77.

Получение сложного НОВТ эфира соединения 4(а):

А. Получение НОВТ-мезилата

К охлажденной (0°С) смеси, состоящей из гидроксибензотриазолгидрата (200 г, 1,48 моль) в безводном CH₂Cl₂ (1,5 л), медленно приливают Еt₃Н (268 мл, 1,92 моль), поддерживая температуру 0-10°С, после чего, поддерживая температуру 0-5°С, добавляют метансульфонилхлорид (126 мл, 1,63 моль). Полученную смесь перемешивают в течение 3 ч при 0°С и последовательно промывают холодной водой (2×1,2 л) и раствором соли (1,2 л). Объединенные органические экстракты концентрируют при пониженном давлении для получения твердого вещества. Это вещество перекристаллизовывают из CH₂Cl₂ (100 мл) и гептана (1 л). Полученные кристаллы собирают фильтрованием с отсосом и повторно промывают гептаном, общим объемом 1 л, а затем сушат в течение ночи под высоким вакуумом (0,5 мм Нg). Выход: 245 г (78%). R_f 0,55 (гексаны/СН₂Сl₂ 1:1). ¹H ЯМР: δ 3,58 (с, 3Н), 7,46 (т, 1Н, J=7,60 Гц), 7,60 (д, 1Н, J=8,28 Гц), 7,65 (д, 1Н, J=8,56 Гц), 7,68 (д, 1Н, J=8,20 Гц), 8,05 (д, 1Н, J=8,41 Гц).

В. Получение сложного НОВТ эфира

Смесь, состоящую из соединения 4(а) (50 г, 0,14 моль) и вышеописанного в части А вещества (36 г, 0,17 моль) в DMF (650 мл), подвергают капельно воздействию Et₃N (25 мл, 0,18 моль), под N₂. Полученную смесь перемешивают в течение 4 ч при комнатной температуре до полного расходования кислоты, что определяют с помощью ТСХ (CH₂Cl₂/MeOH 95:5). После расходования всей кислоты аликвота данной реакционной смеси (~3 пипеточные капли) при ее разбавлении в 3 мл CH₂Cl₂/THF 1:1 дает прозрачный гомогенный раствор. Затем эту реакционную смесь разбавляют толуолом (500 мл). Органический слой (содержащий твердый продукт) разбавляют водой (500 мл) и фильтруют с использованием МТВЕ для перемещения. Твердое вещество ополаскивают МТВЕ (2×400 мл) и сушат при отрицательном давлении до получения зеленовато-белых хлопьев вещества. ПРИМЕЧАНИЕ: Данное вещество можно растворить в THF и профильтровать для удаления остаточных металлических примесей. Выход: 61 г (92%). R_f 0,68 (СН₂Сl₂/гексаны 1:1). ¹H ЯМР: δ 0,93 (т, 3Н, J=7, 0 Гц), 1,42 (м, 4Н), 1,81 (м, 2Н), 4,00 (т, 2Н, J=6,53 Гц), 6,99 (д, 2Н, J=8,6 Гц), 7,42-7,59 (м, 5Н), 7,71 (дд, 4Н, J=13,91, Гц 8,40 Гц), 7,86 (д, 2Н, J=8,30 Гц), 8,11 (д, 1Н, J=8,31 Гц), 8,35 (д, 2Н, J=8,33 Гц), ¹³Н ЯМР: δ 14,03, 22,44, 28,18, 28,94, 40,10, 40,37, 68,11, 108,45, 110,11, 114,95, 118,71, 120,48, 123,04, 124,94, 124,99, 127,00, 127,23, 127,51, 127,73, 128,06, 128,82, 128,86, 131,35, 132,30, 137,15, 141,43, 143,54, 147,85, 159,15, 162,73. MS(FD⁺); m/z 477. ИК(СНСl₃): 2960, 2936, 2874, 1783, 1606 см^-1. Анализ C₃₀H₂₇N₃O₃: Теоретический расчет: С, 75,45; Н, 5,70; N, 8,80; Фактически обнаружено: С, 75,69; Н, 5,58; N, 8, 92.

Получение противогрибкового соединения 6(а)

Деионизованная вода используется везде. Смесь, состоящую из соединения 5 (а) (11 г, 23 ммоль) и центра соединения 6 (а) (где R представляет собой водород - 92% чистоты согласно HPLC, 19,25 г, 22,2 ммоль) в безводном DMF (275 мл), перемешивали под N₂ в течение 4 ч (пока HPLC не покажет полного расходования циклического пептида исходного вещества). Данную смесь фильтруют через слой целита и полученный фильтрат концентрируют при пониженном давлении при 35°С до получения пасты, которую перемешивают. Данную пасту вливают в МТВЕ (500 мл), что приводит к выпадению мелкозернистого порошка, который собирают фильтрованием при отрицательном давлении и сушат с получением 27 г неочищенного вещества. Данное вещество измельчают в порошок пестиком в ступке, пульпируют в течение 5 минут в толуоле (200 мл), фильтруют с отсосом (медленное фильтрование), ополаскивают МТВЕ (100 мл) и затем сушат при отрицательном давлении до получения твердого вещества желтого цвета. Выход: 23 г (95% чистоты по HPLC, время удерживания=7,79 мин).

Альтернативно, данное преобразование можно осуществлять с использованием избытка циклического ядра (1,1 экв.). После практического завершения данной реакции, что определяют по HPLC, полученное неочищенное вещество частями вводят в энергично перемешиваемую смесь ацетон/вода 9:1 (60 мл). В полученную суспензию добавляют целит (2,5 г целита, предварительно промытого смесью ацетон/вода 9:1). После перемешивания в течение 2 минут эту смесь фильтруют через слой целита (предварительно отмытого смесью ацетон/вода 9:1) и полученный слежавшийся слой дважды ополаскивают смесью ацетон/вода 9:1 (10 мл). Фильтрат выливают в стакан с деионизованной водой (200 мл) при осторожном турбулентном перемешивании этой смеси, что приводит к образованию осадка. Осадок собирают путем фильтрования с отсосом, ополаскивают Н₂O (4×25 мл) и затем сушат при отрицательном давлении при комнатной температуре. Выход: 6,81 г (97% чистоты по HPLC).

Далее этот продукт выделяют очисткой препаративной HPLC. R_f 0,29 (CHCl₃/MeOH 80:20). MS(FAB⁺): m/z С₅₈Н₇₄N₇О₇, Теоретический расчет: 1140,5141; Фактически обнаружено: 1140,5103. ИК(КВr): 3365, 2934, 1632, 1518 см^-1.

Фармацевтические составы

Нижеследующие дримеры иллюстрируют рецептурные смеси настоящего изобретения и способы их получения. Эти примеры ни в коей мере не ограничивают объем настоящего изобретения и их не следует рассматривать в качестве такого ограничения.

Нижеследующие рецептурные смеси получают методом А, методом В или методом С. Количество соединения 6 (а) определяют путем вычисления теоретической эффективности, необходимой для экспериментов, и разделения этой величины на фактическую HPLC - эффективность данного соединения.

Способ А. После доведения рН в 50 мл 0,1 М цитратного исходного буферного раствора до значения 4,0 в него добавляют 2,5 г полисорбата 80 и полученную смесь перемешивают до растворения с последующим добавлением 1 г соединения из образца 6 (а) (эффективного). Эту смесь перемешивают до растворения с последующим добавлением 3 г маннита (объемный наполнитель) и 2 г трегалозы (стабилизирующий агент). Полученную смесь вновь перемешивают до растворения. Полученный раствор разбавляют водой в мерной колбе до 100 мл. 3 мл данного раствора переносят в ампулу и затем высушивают замораживанием в лиофилизаторе.

Способ В. Раствор 0,3005 г уксусной кислоты в 50 мл воды доводят до рН 4,0, используя 1 N раствор едкого натра, В процессе перемешивания добавляют 2,5 г полисорбата 80 и 5,0 г маннита (объемный наполнитель) и полученную смесь перемешивают до растворения с последующим добавлением 1 г Соединения 6 (а) (эффективного). Эту смесь вновь перемешивают до растворения. Полученный раствор разбавляют водой в мерной колбе до 100 мл, фильтруют и помещают в ампулы. Раствор в ампулах может быть высушен замораживанием в лиофилизаторе или храниться при 5°С.

Способ С. Раствор 0,113 г винной кислоты в 50 мл воды доводят до рН 4,3, используя 10% раствор едкого натра. В процессе перемешивания добавляют полисорбат 80 и продолжают перемешивать до растворения. Температуру раствора снижают до 5°С-15°С с последующим добавлением 1 г соединения 6 (а) (эффективного) в виде суспензии в воде. Полученную смесь вновь перемешивают до растворения с последующим добавлением 1,0 г фруктозы (стабилизирующий агент) и 5,0 г маннита (объемный наполнитель). Эту смесь вновь перемешивают до растворения. Полученный раствор разбавляют водой в мерной колбе до 100 мл, фильтруют и затем разливают в ампулы. Раствор в ампулах может быть высушен замораживанием в лиофилизаторе или храниться при 5°С.

Нижеследующие рецептурные примеры 1-27 получены в соответствии с вышеописанными методами А и В. Условное обозначение "-" означает, что указанный ингредиент исключен из состава. В таблице 1 и в последующих таблицах все массы указаны в (граммах); концентрации ([]) указаны в мг/мл; СА означает лимонная кислота; Y означает да; N означает нет; Man означает маннит; Тrе означает трегалоза; Col. означает деформацию слоя; С означает цитрат; ВА означает объемный наполнитель; В означает буфер; PEG означает полиэтиленгликоль; PPG - означает пропиленгликоль; SА означает стабилизирующий агент; Асе означает ацетат; Poly 80 означает полисорбат 80; Com означает соединение; Suc означает сахароза; His означает гистидин; Sur означает поверхностно-активное вещество; Lac означает лактоза; Fru означает фруктоза; ТА означает винная кислота и АА означает уксусная кислота.

Изучение растворимости

Исследования по растворимости осуществляют при комнатной температуре после переноса испытуемого раствора (поверхностно-активное вещество, факультативно содержащее объемный наполнитель, буфер или стабилизирующий агент) и 50 мг соединения 6(а) в стеклянную тестовую пробирку. Тестовые пробирки встряхивают в течение ночи и проверяют на наличие избытка твердого вещества. Пробирки, содержащие избыток твердого вещества, удаляют для анализа. В пробирки, которые не содержат избытка твердого вещества, дополнительно добавляют 50 мг соединения 6(а) и полученную смесь перемешивают встряхиванием. Эту операцию повторяют до тех пор, пока в пробирке наблюдают избыток твердого вещества. Все образцы оставляют на 1 ч, удаляют супернатант, фильтруют и анализируют в обращенно-фазовой HPLC для определения эффективности соединения 6(а) на 1 мл раствора.

Стабильность раствора и лиофилизированных композиций оценивают путем мониторинга образца композиции на процентное увеличение родственных веществ в обращенно-фазовой HPLC вначале и через 2 недели, и через 4 недели хранения при 40°С.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается новой парентеральной фармацевтической композиции, включающей эхинокандиновое соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, фармацевтически приемлемое мицеллообразующее поверхностно-активное вещество и нетоксичный водный растворитель, и стабилизирующий агент. Композиция обладает повышенной стабильностью и биодоступностью. 7 н. и 41 з.п. ф-лы, 4 табл.

1. Парентеральная стабилизированная фармацевтическая композиция, включающая (i) эхинокандиновое соединение или его фармацевтически приемлемую соль; (ii) фармацевтически приемлемое мицеллообразующее поверхностно-активное вещество; (iii) нетоксичный водный растворитель и (iv) стабилизирующий агент, где указанное поверхностно-активное вещество присутствует в композиции в соотношении (мас.) от около 1:1,75 до около 1:25 к соединению эхинокандина, а эхинокандиновое соединение присутствует в количестве, превышающем или равном 1 мг/мл, и где указанный стабилизирующий агент представляет собой углевод.2. Композиция по п.1, в которой соединение эхинокандина имеет следующую структуру:

где R представляет собой алкильную, алкенильную, алкинильную, арильную, гетероарильную группу или их сочетание;

R₁, R₂, R₃, R₆, R₇, и R₁₀ независимо представляют собой гидрокси или -Н;

R₄ представляет собой -Н, метил или -CH₂C(O)NH₂;

R₅ и R₁₁ независимо представляют собой метил или -Н;

R₈ представляет собой -ОН, -ОРО₃Н₂, -ОРО₃НСН₃, -ОРО₂НСН₃, или –ОSО₃Н;

R₉ представляет собой -Н, -ОН, или –ОSО₃Н,

и их фармацевтически приемлемые соли.

где А, В, С и D независимо представляют собой -Н, (С₁-С₁₂)алкил, (С₂-С₁₂)алкинил, (С₁-С₁₂)алкокси, (С₁-С₁₂)алкилтио, галоген, или -O-(CH₂)_m-[O-(CH₂)_n]_p-O-(C₁-C₁₂)алкил, или -O-(CH₂)_q-X-E; m равно 2, 3 или 4; n равно 2, 3 или 4; р равно 0 или 1; q равно 2, 3 или 4; X представляет собой пирролидино, пиперидино или пиперазино; Е представляет собой –Н, (С₁-С₁₂)алкил, (С₃-С₁₂)циклоалкил, бензил или (С₃-С₁₂)циклоалкилметил.

где x+y+z+w равно целому числу между 5 и 20.

где R представляет собой алкильную, алкенильную, алкинильную, арильную или гетероарильную группу или их сочетание.

R₁, R₂, R₃, R₆, R-, и R₁₀ независимо представляют собой гидрокси или -Н;

R₄ представляет собой -Н, метил или -CH₂C(O)NH₂;

R₅ и R₁₁ независимо представляют собой метил или -Н;

R₈ представляет собой -ОН, -OPO₃H₂, -ОРО₃НСН₃, -ОРO₂НСН₃, или –ОSО₃Н;

R₉ представляет собой -Н, -ОН или –ОSО₃Н,

и их фармацевтически приемлемая соль.

где А, В, С и D являются независимо -Н, (С₁-С₁₂)алкилом, (С₂-С₁₂)алкинилом, (C₁-C₁₂)алкокси, (С₁-С₁₂)алкилтио, галогеном, или -O-(СН₂)_m-[O-(СН₂)_n]_р-O-(С₁-С₁₂)алкилом, или -O-(CH₂)_q-X-E; m равно 2, 3 или 4; n равно 2, 3, или 4; р равно 0 или 1; q равно 2, 3 или 4; X - пирролидино, пиперидино или пиперазино; Е является -Н, (С₁-С₁₂)алкилом, (С₃-С₁₂)циклоалкилом, бензилом или (С₃-С₁₂)циклоалкил метилом.

26. Композиция по п.25, где R₂ и R₇ каждый является гидрокси, R₈ представляет собой гидрокси и

где x+y+z+w равно целому числу между 5 и 20.