ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АТИПИЧНОЙ ПНЕВМОНИИ Российский патент 2005 года по МПК A61K31/404 A61P31/14 

Изобретение относится к области фармации, конкретно к использованию 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола и его солей в качестве лекарственного средства для лечения или профилактики атипичной пневмонии (SARS).

Атипичная пневмония - респираторное заболевание, относительно недавно выявленное в Азии, Северной Америке и Европе. Заболевание вызывается вирусами и характеризуется скоротечным развитием и высокой летальностью. Первые случаи были описаны в 2003 году. В самом начале эпидемии нового вируса медики полагали, что уровень смертности от него составляет 4%, однако последующие данные показали, что уровень смертности в Гонконге, Канаде и Сингапуре выходит на значения в 7,6%, 10,7% и 9,9% соответственно. В дальнейшем изучение атипичной пневмонии и обобщение данных по всем странам, где была зарегистрирована SARS, показало, что люди пожилого возраста гораздо чаще рискуют заболеть атипичной пневмонией, чем молодые. Кроме того, среди них гораздо выше смертность: умирает до 40% заболевших, в то время как среди пациентов младше 60 лет - около 13%. Такая высокая смертность делает поиск средств для лечения SARS чрезвычайно актуальной задачей.

Известно средство для лечения коронавирусной инфекции, применявшееся для терапии атипичной пневмонии, - рибавирин (“Medicus Amicus”, 2003, №3, стр.1, 13). Однако применение данного препарата для лечения SARS дает недостаточный эффект, что показывает высокий процент летальности. Кроме того, при применении рибавирина нередко проявляется побочное действие и имеется ряд противопоказаний.

1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола гидрохлорид моногидрат ранее был известен как препарат для лечения вирусов гриппа А и В (Патент РФ №2008004), обладающий также иммуномодулирующим действием (Патент РФ №2033157).

Задачей изобретения является расширение арсенала средств при лечении коронавирусной инфекции, снижение токсичности и повышение эффективности лечения атипичной пневмонии.

Для решения этой задачи мы предлагаем использовать помимо 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола также ряд его солей, а именно: гидрохлорид, цитрат, малеат, сукцинат и фумарат. Все соли получают при помощи добавления соответствующих кислот к основанию - (1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдолу), который, в свою очередь, получают из известного вещества - арбидола (1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола хлоргидрат).

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

ПРИМЕР 1. Получение основания: 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4- диметиламинометил-5-окси-6-броминдола

К смеси 20 мл 2М Na₂CO₃, 40 мл 1М NаНСО₃ и 200 мл СНСl₃ при перемешивании прибавляют небольшими порциями 10,64 г арбидола (1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола хлоргидрата). После растворения всего хлоргидрата СНСl₃ отделяют, водный слой экстрагируют 50 мл СНСl₃. Объединенные СНСl₃ -вытяжки промывают насыщенным NaCl, высушивают над MgSO₄ и упаривают в вакууме досуха. Остаток перекристаллизовывают из абсолютного спирта высушивают в вакууме над Р₂O₅/КОН. Получают 8,46 г (выход: 88,6%) 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола (далее - основание) с Тпл.=125-126°С.

ПРИМЕР 2. Получение 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола сукцината

К раствору 509 мг основания (полученного в Примере 1) в 2 мл теплого тетрагидрофурана (ТГФ) прибавляют 0,5 мл раствора 91,7 мг янтарной кислоты в 1 мл горячего ТГФ. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, вносят затравку сукцината и оставляют на 3 часа при +4°С. Выпавшие кристаллы отфильтровывают, промывают небольшим количеством ТГФ и высушивают в вакууме над Р₂O₅/КОН. Получают 450 мг (выход 75%) продукта. Тпл=138-139°С. Структура полученного соединения подтверждена спектром ЯМР (см. Таблицу №2).

ПРИМЕР 3. Получение 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола цитрата

К суспензии 978 мг основания (полученного в Примере 1) в 14 мл абсолютного этилового спирта прибавляют при перемешивании раствор 493 мг моногидрата лимонной кислоты в 6 мл абсолютного этилового спирта. Осадок растворяется при комнатной температуре, реакционную смесь упаривают досуха. Остаток растворяют в 4 мл абсолютного этилового спирта и продукт в виде густого масла высаживают прибавлением 50 мл этилового эфира. Масло дважды растирают со свежими порциями эфира, осадок отфильтровывают, промывают этиловым эфиром и сушат в вакууме над Р₂O₅/КОН. Получают 1,13 г (выход 85%) продукта. При нагревании до 78-82°С вещество плавится с разложением. Структура соли подтверждена ЯМР-спектром (см. Таблицу №3).

Таблица №3.
Данные ЯМР-спектра для безводного 1-метил-2-фенилтиометил-3-
карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола цитратаХимический сдвигТип пикаЧисло протоновГруппа1,26триплет32,50синглет6N(СН₃)₂2,54-2,65мультиплет4С-СН₂ (цитрат)3,66синглет3N-СН₃4,38синглет2CH₂-N4,15квадруплет2O-СН₂4,67синглет2CH₂-S7,27-7,35мультиплет5ароматические протоны8,00синглет1Н₍₇₎

ПРИМЕР 4. Получение 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола малеата

К раствору 477,4 мг основания, полученного в Примере 1, в 4 мл абсолютного этилового спирта прибавляют теплый раствор 105,8 мг малеиновой кислоты в 2,5 мл этилацетата. Смесь охлаждают до +4°С, осадок отфильтровывают, промывают холодным этилацетатом и высушивают в вакууме над Р₂O₅/КОН. Получают 336 мг (выход 60%) продукта с Тпл=133-135°С. Структура полученного соединения подтверждена спектром ЯМР (см. Таблицу №4).

Таблица №4.
Данные ЯМР-спектра для 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-
диметиламинометил-5-окси-6-броминдола малеатаХимический сдвигТип пикаЧисло протоновГруппа1,26триплет32,73синглет6N(CH₃)₂3,69синглет3N-СН₃4,72синглет2CH₂-N4,20квадруплет2O-CH₂4,77синглет2CH₂-S6,03синглет2CH=CH (малеат)7,28-7,38мультиплет5ароматические протоны8,13синглет1Н₍₇₎

ПРИМЕР 5. Получение 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола фумарата

К суспензии 241,8 мг основания, полученного в Примере 1, в 2 мл абсолютного этилового спирта прибавляют раствор 47,7 мг фумаровой кислоты в 1,5 мл теплого абсолютного этилового спирта. Нагревают почти до кипения и охлаждают до комнатной температуры. Оставляют на ночь при температуре +4°С, отфильтровывают осадок, промывают холодным этиловым спиртом и высушивают в вакууме над Р₂О₅/КОН. Получают 157 мг (выход 55%) продукта с Тпл=154-156°С. Структура полученного соединения подтверждена спектром ЯМР (см. Таблицу №5).

Таблица №5.
Данные ЯМР-спектра для 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола фумаратаХимический сдвигТип пикаЧисло протоновГруппа1,25триплет32,31синглет6N(CH₃)₂3,66синглет3N-СН₃4,11синглет2CH₂-N4,16квадруплет2О-СН₂4,63синглет2CH₂-S6,60синглет2СН=СН7,24-7,34мультиплет5ароматические протоны7,80синглет1Н₍₇₎

ПРИМЕР 6. Противовирусное действие арбидола в отношении вируса тяжелого острого респираторного синдрома (ТОРС), штамм СОД, на культуре клеток (VERO-E6).

Испытание профилактического действия препарата.

Из пробирок с монослоем клеток удаляли ростовую среду и вносили в опытные пробирки по 1,0 мл поддерживающей среды, содержащей различные концентрации исследуемых препаратов. Через 4 часа инкубирования при температуре 37,0°С питательную среду сливали и в пробирки вносили по 0,1 мл суспензии вируса ТОРС, с концентрацией 0,001-0,004 БОЕ на клетку. Контакт вируса с клетками - 60 минут при 37,0°С. После этого вирус из пробирок удаляли, инфицированные клетки промывали средой ПС, затем в опытные и контрольные пробирки добавляли по 1,0 мл поддерживающей среды ПС, содержащей 2,5% сыворотки крови крупного рогатого скота (КРС). Использовали по 4 пробирки на каждую концентрацию препарата.

Дополнительные контроли:

а) контроль культур клеток - в 4 пробирки вносили по 1,0 мл поддерживающей среды,

б) контроль дозы вируса - в 4 пробирки вносили по 0,1 мл суспензии вируса ТОРС и через 60 минут инкубирования после удаления вируссодержащей суспензии добавляли 1,0 мл поддерживающей среды.

Испытание лечебно-профилактического действия препарата.

Из пробирок с монослоем клеток удаляли ростовую среду и вносили по 0,1 мл суспензии вируса ТОРС, с концентрацией 0,001-0,004 БОЕ (бляшкообразующая единица) на клетку. Контакт вируса с клетками продолжительностью 60 минут. После удаления вируса клетки промывали средой ПС с 2,5% сыворотки КРС и добавляли поддерживающую среду, содержащую различные дозы препарата. Инкубирование клеток осуществляли при температуре 37,0°С. Через 72 часа после заражения инфицированные клетки механически разрушали, объединяли в одну пробу и затем десятикратными разведениями инфицировали монослойные культуры клеток во флаконах с последующим нанесением агарового покрытия для оценки уровня накопления вируса методом негативных колоний. Учет формирования негативных колоний осуществляли через 72 часа после инфицирования. Результаты оценивали по подавлению продукции вируса в культуре клеток в присутствии различных доз оцениваемых препаратов.

Таблица №6
Противовирусная эффективность арбидола в отношении вируса ТОРС в культуре клеток VERO-E6ПрепаратДоза препара та, мкг/млСхема внесения препаратаУровень накопления возбудителя, lg БОЕ/млПодавление репродукции вируса, Δ, lgКоэффициент ингибирования, процентАрбидол
 50,0
 За 4 часа
до инфицирования5,90,779,5После инифицирования6,00,677,7Рибавирин
 50,0
 За 4 часа до инфицирования6,00,677,7После инфицирования5,01,697,5Контроль дозы вируса  6,60 

Антивирусная активность арбидола

Профилактическая и лечебная эффективность препаратов, определяемая по разнице накопления возбудителя ТОРС в опытных и контрольных культурах, представлена в таблице 6. Арбидол обладал практически одинаковой эффективностью в отношении вируса ТОРС по сравнению с рибавирином в одинаковых дозах.

ПРИМЕР 7. Противовирусное действие арбидола в отношении вируса тяжелого острого респираторного синдрома (ТОРС), штамм СОД, на экспериментальной модели (сирийские хомячки)

Животные: сирийские хомячки массой от 60 до 80 г, поставленные из питомника Вирусологического центра НИИМ МО РФ (г. Сергиев Посад)

Вирус возбудителя тяжелого острого респираторного синдрома - штамм СоД из музея Вирусологического центра НИИМ МО РФ; инокулят - суспензия культуры клеток VERO-E6, предварительно инфицированных возбудителем ТОРС.

Препараты вводили перорально. Препараты разводили на физиологическом растворе с добавлением ДМСО (0,01-0,005%).

Оценка эффективности препаратов: по снижению уровня накопления возбудителя в легких, нормализации уровня аминотрансфераз и лейкоцитов в крови опытных животных по сравнению с контрольными группами.

Результаты исследования. Результаты представлены в таблице 7, из которых следует, что введение препарата по лечебно-профилактической схеме способствует снижению уровня накопления вируса в легких на 2,1 lg БОЕ, способствует снижению активности аминотрансфераз в крови и нормализует уровень лейкоцитов. Арбидол обладает противовирусной эффективностью против возбудителя ТОРС. В отличие от используемого для лечения данной инфекции рибавирина арбидол малотоксичен.

Таблица №7
Оценка эффективности препаратов на нелетальной модели - сирийских хомячках по изменению уровня накопления вируса ТОРС в легких биохимическим и гематологическим показателям кровиПрепаратДоза, мг/кгСхема введенияСнижение накопления вируса в легких, ΔlgАктивность аминотрансфераз в сыворотке крови, мМ/ч.л.Уровень лейкоцитов в крови, мкл * 10³АлАТАсАТАрбидол60,0-24, -1, +24, +482,10,440,414,8Рибавирин80,0+24 и далее 6 суток1,40,400,256,9Контроль дозы   2,171,5812,8Контроль стада   0,410,306,2Примечание: заражающая доза 5,0 lg БОЕ при пероральном использовании.

Соли 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола, обладающие противовирусным действием, могут применяться в различных лекарственных формах, в том числе с использованием фармацевтических носителей, принятых в фармацевтической химии для приготовления средства доставки активного компонента в организм пациента.

ПРИМЕР 8. Получение фармацевтической композиции для приготовления таблетной массы

Готовят смесь, состоящую из 10 г 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола малеата; 4,5 г крахмала картофельного; 0,25 г метилцеллюлозы; 0,15 г кальция стеарата; 0,10 г кислоты стеариновой. Полученную после перемешивания массу используют для таблетирования.

ПРИМЕР 9. Получение фармацевтической композиции для приготовления капсул

Для получения содержимого капсулы готовят смесь, состоящую из 10 г 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола фумарата; 2,8 г крахмала картофельного; 6,0 г микрокристаллической целлюлозы; 0,9 г коллидона, 0,2 г аэросила, 0,2 г кальция стеарата. Полученный после перемешивания порошок используют для капсулирования.

Предложено: средство для лечения и предупреждения инфекции, вызванной коронавирусами, в частности для лечения атипичной пневмонии (SARS), и фармацевтическая композиция указанного назначения на его основе. Средство представляет собой 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметил-аминометил-5-оксиброминдол или гидрохлорид моногидрата 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-оксиброминдола (арбидол), ранее известный как иммуномодулятор и препарат против вирусов гриппа. Изобретение обеспечивает снижение накопления корона-вируса (на примере вируса ТОРС) в легких. 2 н.п. ф-лы, 7 табл.

1. Применение 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола или его соли, выбранной из группы безилата, фумарата, малеата, цитрата или гидрохлорида моногидрата в качестве лекарственного средства для лечения или профилактики коронавирусной инфекции, в частности атипичной пневмонии.2. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики коронавирусной инфекции, в частности атипичной пневмонии, содержащая активный компонент по п.1 в эффективном количестве и фармацевтически приемлемый носитель.