ПРОТИВООПУХОЛЕВОЕ СРЕДСТВО БЕНЗАМИД Российский патент 2005 года по МПК A61K31/166 A61P35/00 

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к средству бензамид (I)

(амид бензойной кислоты), а также фармацевтическим составам, содержащим это вещество. Средство по изобретению может быть применено в медицинской или ветеринарной практике в качестве противоопухолевого препарата.

Аналоги бензамида и его производные сами по себе (без облучения или противоопухолевых препаратов) обладают противоопухолевой активностью [1-3], тогда как у самого бензамида противоопухолевые свойства не описаны. Бензамид, его аналоги и производные при совместном введении с противоопухолевыми средствами [4-14] и использованным для подавления роста опухолей ионизирующим излучением [15-25] повышают их эффективность.

Считается, что бензамид, его аналоги и производные при изолированном применении (без облучения или противоопухолевых препаратов) не только не обладают противоопухолевой активностью [26], но и способны даже усиливать действие канцерогенов [27-30].

В нашем патенте РФ №2205009 от 27.05.03 бензамид описан в качестве противорвотного средства. Согласно патенту бензамид в диапазоне доз от 5 до 150 мг/кг может быть применен в медицинской или ветеринарной практике для профилактики и лечения тошноты и рвоты различной этиологии, в частности обусловленных воздействием ионизирующего излучения или цитостатических препаратов.

Экспериментальные исследования показали, что область применения бензамида в онкологической практике может не ограничиваться его назначением в качестве противорвотного средства.

Целью изобретения является использование бензамида в медицинской, ветеринарной и фармацевтической практике как противоопухолевого средства.

Нами установлено, что бензамид способен существенно задерживать рост опухоли. Согласно изобретению бензамид предлагается в диапазоне доз от 25 до 100 мг/кг.

Для достижения необходимого эффекта бензамид можно вводить в клинически разумных количествах любыми способами, например перорально, ректально или парентерально. На его основе могут быть разработаны лекарственные препараты, содержащие кроме активного ингредиента необходимые фармацевтические добавки и компоненты.

Такие средства могут представлять собой препараты в дозированной форме и быть приготовлены по любому методу, известному в технике фармакопеи. При осуществлении всех этих методов предусматривается стадия совмещения активного вещества с носителем, который включает один или несколько вспомогательных компонентов.

Бензамид может применяться в качестве противоопухолевого препарата в сочетании с другими терапевтическими агентами, используемыми в онкологии.

Приведенный ниже экспериментальный пример иллюстрирует, но не ограничивает притязаний заявителя.

Специфическая активность

Способность бензамида оказывать противоопухолевое действие установлена в опытах на 52 мышах гибридах F1 (CBA×C57BL), массой 18-20 г в 2-х сериях экспериментов на модели перевиваемой карциномы Эрлиха.

Опухолевые клетки в количестве 1 млн. на мышь в 0,15 мл раствора Хенкса перевивали в мышцу голени. В течение всего эксперимента через сутки проводили измерение трех взаимоперпендикулярных диаметров опухоли и, принимая форму опухоли за эллипсоид, рассчитывали ее объем по формуле: V=(π/6)×d₁×d₂×d₃, где V - объем опухоли, d₁, d₂, d₃ - линейные размеры трех осей эллипсоида.

Бензамид в дозе 25, 50 или 100 мг/кг вводили внутрь, на протяжении 5 дней, начиная с 4-го дня после прививки карциномы. Противоопухолевый эффект препарата оценивали по влиянию на динамику роста карциномы. Наблюдение продолжали до 30 суток после инокуляции опухоли.

Результаты опытов подвергнуты статистической обработке, которую проводили стандартными методами с вычислением средних величин и средней арифметической ошибки. Достоверность результатов оценивали с помощью t-критерия Стьюдента.

Исследованиями установлено, что введение в мышцу голени мышей 1 млн. клеток перевиваемой карциномы Эрлиха приводит к развитию у 100% животных опухолевого образования эллипсоидной формы. Объем опухоли увеличивался пропорционально периоду времени, прошедшему от момента ее инокуляции, и к концу наблюдения в среднем составлял 9,3±0,4 см³ (таблица).

Бензамид при использовании внутрь в дозе 25 мг/кг, не изменяя долю животных с развившейся карциномой, существенно повлиял на динамику объема опухоли. При его введении в этой дозе отмечалось замедление роста опухоли на разные сроки наблюдения. Достоверные различия между мышами контрольной группы и животными, получавшими бензамид в дозе 25 мг/кг, имели место в период с 16-х по 18-е сутки, а также с 25-х по 30-е сутки (таблица). Бензамид в дозе 50 мг/кг, по сравнению с дозой 25 мг/кг, обладал менее выраженным ингибирующим действием на рост карциномы Эрлиха. У этих мышей на протяжении длительного времени (с 16-х по 30-е сутки) размеры опухоли были меньше, чем в контрольной группе, но выявленные различия не были достоверны (таблица). При дальнейшем повышении дозы бензамида до 100 мг/кг характер его влияния на динамику объема опухоли был аналогичен таковому при дозе 50 мг/кг. Некоторое замедление бензамидом роста опухоли, отмеченное с 16-х по 20-е сутки и с 25-х по 28-е сутки наблюдения, можно охарактеризовать только как тенденцию (таблица).

Следовательно, полученные результаты свидетельствуют о том, что в опытах на мышах бензамид обладает противоопухолевой активностью в отношении перевиваемой карциномы Эрлиха.

Таблица
Влияние бензамида (введенного per os) на динамику роста перевиваемой карциномы Эрлиха у мышейГруппаКол-во животныхОбъем опухоли, см³4 сут.6 сут.8 сут.12 сут.14 сут.16 сут.18 сут.20 сут.22 сут.25 сут.28 сут.30 сут.Контроль140,005±0,0010,3±0,020,7±0,041,4±0,12,2±0,12,8+0,253,4±0,24,1±0,245,2+0,36,8±0,38,5±0,59,3+0,4Бензамид 25 мг/кг130,002±0,0010,4±0,030,8±0,051,7±0,21,8±0,21,9±0,2*2,0±0,4*2,9±0,74,0±0,94,6±0,8*5,6+0,8*6,4±0,9*Бензамид 50 мг/кг140,002±0,0010,4±0,040,8±0,081,8±0,242,3±0,32,4+0,352,8±0,43,4±0,64,5±0,95,7±0,67,1±0,98,1±1,0Бензамид 100 мг/кг110,002±0,0010,4+0,050,8±0,131,7±0,32,3±0,42,5±0,53,1±0,74,0±0,55,4±0,66,2±0,88,4±1,09,5±1,0Примечание: * - различия достоверны (р≤0,05) с контролем

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Международный патент WO 03 /042191.

2. Патент США US 6447748.

3. Cookson M.R., Ince P.O., Shaw P.J. Peroxynitrite and hydrogen peroxide induced cell death in the NSC34 neuroblastoma x spinal cord cell line: role of poly (ADP-ribose) polymerase // J. Neurochem., 1998, v.70, n.2, p.501-508.

4. Европейский патент ЕР 0305008.

5. Cosi C. New ingibitors of poly(ADP-ribose) polymerase and their potential therapeutic targets // Expert Opin. Ther. Patents, 2002, v.l2, n.7, p.1047-1071.

6. Virag L., Szabo С. The Therapeutic potential of Poly(ADP-Ribose) polymerase inhibitors // Pharmacol. Rev., 2002, v.54, n3, p.375-429.

7. Horsman M.R., Brown D.M., Hirst D.G., Brown J.M. The effects of purine nucleoside analogs on the response of the RIF-1 tumor to melphalan in vivo // Int. J.Radiat. Oncol. Biol. Phys., 1986, v.12, n.5, p.801-806.

8. Horsman M.R., Brown D.M., Hirst D.G., Brown J.M. Changes in the response of the RIF-1 tumour to melphalan in vivo induced by inhibitors of nuclear ADP-ribosyI transferase // Br. J.Cancer, 1986, v.53, n.2, p.247-254.

9. Horsman M.R., Hirst D.G., Brown D.M., Brown J.M. Modification of alkylating agent cytotoxicity by cisplatin // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys., 1984, v.10, n.9, p.1669-1673.

10. Brown D.M., Horsman M.R., Hirst D.G., Brown J.M. Enhancement of melphalan cytotoxicity in vivo and in vitro by inhibitors of poly (ADP-ribose) polymerase // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys., 1984, v.10, n.9, p.1665-1668.

11. Institoris E., Fox B.W., Palyi I. Benzamide potentiation of the cytotoxicity of bifunctional galactitol [correction of galacticol] in resistant P388 leukemia correlates with inhibition of DNA ligase II // Cancer. Chemother. Pharmacol., 1992, v.30, n.4, p.325-329.

12. Sakamoto H., Kawamitsu H., Miwa M., et. al. Enhancement of antitumor activity of bleomycin by benzamide in vitro and in vivo // J. Antibiot. (Tokyo), 1983, v.36, n.3, p.296-300.

13. Ludwig A., Dietel M., Schafer G., et. al. Nicotinamide and nicotinamide analogues as antitumor promoters in mouse skin // Cancer Res., 1990, v.50, n.8, p.2470-2475.

14. Wielckens K., Delfs T. Glucocorticoid-induced cell death and poly[adenosine diphosphate(ADP)-ribosyl]ation: increased toxicity of dexamethasone on mouse S49.1 lymphoma cells with the poly(ADP-ribosyl)ation inhibitor benzamide // Endocrinology, 1986, v.119, n.5, p.2383-2392.

15. Международный патент WO 86/06628.

16. Патенты США US 5032617, 5041653 и 5215738.

17. Cosi C. New ingibitors of poly(ADP-ribose) polymerase and their potential therapeutic targets // Expert Opin. Ther. Patents, 2002, v.12, n.7, p.1047-1071.

18. Virag L., Szabo C. The Therapeutic potential of Poly(ADP-Ribose) polymerase inhibitors // Pharmacol. Rev., 2002, v.54, n3, p.375-429.

19. Gradzka I., Iwanenko Т., Kruszewski M., et al. Modulation of the effect of camptothecin in x-irradiated L5178Y-R and L5178Y-S cells by benzamide // Radiat. Environ. Biophys., 1996, v.35, n.3, p.185-191.

20. Horsman M.R., Brown D.M., Lemmon M.J., et. al. Preferential tumor radiosensitization by analogs of nicotinamide and benzamide // Int. J.Radiat. Oncol. Biol. Phys., 1986, v.12, n.8, p.1307-1310.

21. Raaphorst G.P., Azzam E.I. Poly(ADP-ribose) synthetase inhibitors increase radiation and thermal sensitivity but do not affect thermotolerance // Radiat. Res., 1988, v.116, n.3, p.442-452.

22. Szwniel I., Wlodek D., Johanson K.J. Differential effect of benzamide on NAD+ content and the frequency of chromatid aberrations in X-irradiated L5178Y-R and L5178Y-S cells // Acta Oncol., 1988, v.27, n.6b, p.851-855.

23. Ben-Hur E. Involvement of poly (ADP-ribose) in the radiation response of mammalian cells // Int. J.Radiat. Biol. Relat. Stud. Phys. Chem. Med., 1984, v.46, n.6, p.659-671.

24. Kjellen E., Pero R.W., Nilsson P. Comparison of low dose nicotinamide versus benzamide, administered per os, as radiosensitizers in a C3H mammary carcinoma // Radiother. Oncol., 1988, v.12, n.4, p.327-331.

25. Thraves P.J., Mossman K.L., Brennan Т., Dritschilo A. Differential radiosensitization of human tumour cells by 3-aminobenzamide and benzamide: inhibitors of poly(ADP-ribosylation) // Int. J. Radiat. Biol. Relat. Stud. Phys. Chem. Med., 1986, v.50, n.6, p.961-972.

26. Вартанян Л.А., Русанов А.М., Колосова М.Б. и др. Восстановительные процессы в опухолевых клетках при воздействии пуриновых ингибиторов репарации // «Восстановит. и компенсатор. процессы при луч. поражениях. Тез. 7-й Всес. науч. конф., 1979». Л., 1979, 57-58.

27. Durkacz B.W., Lunec J., Grindley H. et al. Murine melanoma cell differentiation and melanogenesis induced by poly(ADP-ribose) polymerase inhibitors // Exp. Cell. Res., 1992, v.202, n.2, p.287-291.

28. Burkle A., Heilbronn R., zur Hausen H. Potentiation of carcinogen-induced methotrexate resistance and dihydrofolate reductase gene amplification by inhibitors of poly(adenosine diphosphate-ribose) polymerase // Cancer Res., 1990, v.50, n.18, p.5756-5760.

29. Kasid U.N., Stefanik D.F., Lubet R.A., et. al. Relationship between DNA strand breaks and inhibition of poly (ADP-ribosylation): enhancement of carcinogen-induced transformation // Carcinogenesis, 1986, v.7, n.2, p.327-330.

30. Kun E., Kirsten E., Milo G.E., et al. Cell cycle-dependent intervention by benzamide of carcinogen-induced neoplastic transformation and in vitro poly(ADP-ribosyl)ation of nuclear proteins in human fibroblasts // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1983, v.80, n.23, p.7219-7223.

Изобретение относится к медицине. Противоопухолевое средство представляет собой амид бензойной кислоты (бензамид). Бензамид применяют в интервале доз от 25 до 100 мг/кг. Изобретение расширяет арсенал средств указанного назначения. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Противоопухолевое средство, отличающееся тем, что фармакологически активным агентом является бензамид.2. Средство по п.1, отличающееся тем, что бензамид применяют в интервале доз 25÷100 мг/кг.