4-{ Бис[(гептилтио)метил]амино} бензамид и способ его получения Российский патент 2023 года по МПК C07C319/14 C07C323/42 A61P35/00 

Предлагаемое изобретение относится к области органической химии, конкретно к 4-{бис[(гептилтио)метил]амино}бензамиду формулы (1), обладающему умеренной цитотоксической активностью, и способу его получения:

Азотсодержащие производные аминобензамидов обладают противоопухолевыми свойствами [Sh. Kiyokawa, Yo. Hirata, Ya. Nagaoka, M. Shibano, M. Taniguchi, M. Yasuda, K. Baba, Sh. Uesato. New orally bioavailable 2-aminobenzamide-type histone deacetylase inhibitor possessing a (2-hydroxyethyl)(4-(thiophen-2-yl)benzyl)amino group. Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2010, 18, p. 3925–3933; Cai J., Wei H., Hong K.H., Wu X., Cao M., Zong X., Li L., Sun C., Chen J., Ji M. Discovery and preliminary evaluation of 2-aminobenzamide and hydroxamate derivatives containing 1,2,4-oxadiazole moiety as potent histone deacetylase inhibitors. Eur. J. Med. Chem. 2015. Vol. 96. P. 1-13; Caldini R., Fanti E., Magnelli L., Barletta E., Tanganelli E., Zampieri M., Chevanne M. Low doses of 3-aminobenzamide, a poly(ADP-ribose) polymerase inhibitor, stimulate angiogenesis by regulating expression of urokinase type plasminogen activator and matrix metalloprotease 2. Vascular Cell. 2011. Vol. 3. № 12], а также могут найти применение в качестве люминесцентных маркеров в биологических системах [More P., Patil A., Salunkhe R. Natural surfactant mediated phytosynthesis and solvatochromic fluorescence of 2-aminobenzamide derivatives. RSC Adv. 2014. Iss. 96. No 4. P. 63039 - 63047].

Известен способ [Sh. Kiyokawa, Yo. Hirata, Ya. Nagaoka, M. Shibano, M. Taniguchi, M. Yasuda, K. Baba, Sh. Uesato. New orally bioavailable 2-aminobenzamide-type histone deacetylase inhibitor possessing a (2-hydroxyethyl)(4-(thiophen-2-yl)benzyl)amino group. Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2010, 18, p. 3925–3933] синтеза производных 2-аминобензамида (2) с выходами 19-45% взаимодействием 2-нитробензамидов с галогенидами и альдегидами и последующим восстановлением NaBH(OAc)₃ и SnCl₂.

Известный способ не позволяет получать 4-{бис[(гептилтио)метил]амино}бензамид формулы (1).

Известен способ [Хайруллина Р.Р., Акманов Б.Ф., Кунакова Р.В., Ибрагимов А.Г., Джемилев У.М. эффективное каталитическое тиометилирование гидразидов карбоновых кислот. Изв. АН. Сер.хим.- 2013.- 1. – с 98 – 103] получения N,N-бис[(алкил(фенил)сульфанил)метил] арилгидразидов (3) взаимодействием гидразидов кислот с формальдегидом, тиолами (пентилтиол, тиофенол) в присутствие CuCl₂·2H₂O с выходами 70-84% соответственно.

Известный способ не позволяет получать 4-{бис[(гептилтио)метил]амино}бензамид формулы (1).

Таким образом, в литературе отсутствуют сведения о способе получения 4-{бис[(гептилтио)метил]амино}бензамид формулы (1).

Предлагается новый способ получения 4-{бис[(гептилтио)метил]амино}бензамида формулы (1), обладающего умеренной цитотоксической активностью.

Сущность способа заключается во взаимодействии 4-аминобензамида с параформальдегидом и гептилтиолом в присутствии в качестве катализатора SmCl₃·6H₂O, взятых в мольном соотношении 4-аминобензамид : параформальдегид : гептилтиол : [SmCl₃·6H₂O] = 1:2:2:(0.01‒0.1), предпочтительно 1:2:2:0.05, при температуре 60-80°С, предпочтительно 70°С, в течение 10-14 ч, предпочтительно 12 ч, в смеси растворителей EtOH : CHCl₃ (3:1, объемные). Выход 4-{бис[(гептилтио)метил]амино}бензамида (1) составляет 22-69%. Реакция проходит по схеме:

Проведение указанной реакции в присутствии катализатора SmCl₃·6H₂O больше 0.1 ммолей не приводит к существенному увеличению выхода целевого продукта (1). Без катализатора целевой продукт (1) не образуется.

Способ поясняется примерами:

Пример 1. В двугорлую колбу помещали гептилтиол (2 ммоль, г), параформальдегид (2 ммоль, г) в 10 мл растворителя (EtOH:CHCl₃ = 1:1) и перемешивали в течение 1 ч при температуре 70°С. Затем добавили 4-аминобензамид (1 ммоль, г) и 0.05 ммоль катализатора (SmCl₃·6H₂O, 0.04 г), растворенных в 5 мл EtOH. Реакционную массу перемешивали в течение 12 часов при температуре 70°С. Методом колоночной хроматографии на SiO₂ выделили 4-{бис[(гептилтио)метил]амино}бензамид (1), элюент гексан : этилацетат = 1 : 1. Другие примеры, подтверждающие способ, приведены в таблице 1.

Таблица 1. Влияние соотношения 4-аминобензамида и катализатора, температуры, реакции на выход 4-{бис[(гептилтио)метил]амино}бензамида (1)

№
п/п Cоотношение
4-аминобензамид : (CH₂O)_n : гептилтиол : [SmCl₃·6H₂O], ммоль Температура реакции, °С Время реакции, ч Выход
(1), % 1 1:2:2:0.05 70 12 61 2 1:2:2:0.01 «-« «-« 22 3 1:2:2:0.1 «-« «-« 69 4 1:2:2:0.05 80 «-« 64 5 «-« 60 «-« 57 6 «-« «-« 14 63 7 «-« «-« 10 58

Реакции проводились в смеси растворителей (EtOH : CHCl₃, 2:1, объемные)

Спектральные характеристики 4-{бис[(гептилтио)метил]амино}бензамида формулы (1)

Аморфное вещество белого цвета, т.пл. 79-81 °С. Спектр ЯМР ¹Н (CDCl₃, δ, м.д., J/Гц): 0.89 (т, 6H, CH₃, ³J = 8.0); 1.27‒1.36 (м, 16H, CH₂); 1.61 (м, 4H, CH₂); 2.59 (т, 4H, -CH₂S-, ³J = 8.0); 4.67 (с, 4H, -HNCH₂S-); 6.04 (уш.с, 2H, NH₂); 6.94 (д, 2H, CH_Ar, ³J = 8.0); 7.76 (д, 2H, CH_Ar, ³J = 8.0). Спектр ЯМР ¹³С (CDCl₃, δ, м.д.): 14.09 (CH₃); 22.60, 28.87, 30.01, 31.57, 31.70 (CH₂); 53.24 (-HNCH₂S-); 113.72 (CH); 122.96 (-C(CONH₂)); 129.04 (CH); 149.56 (-C(NHCH₂)); 169.17 (-C(CONH₂)). Масс-спектр: найдено: m/z 447.2510 [M + Na]⁺; вычислено для C₂₃H₄₀N₂NaOS₂⁺ 447.2480.

Пример 2. Определение цитотоксической активности.

Соединения: (1), препарат сравнения (фторурацил) и исходный 4-аминобензамид растворяли в 100% ДМСО (Sigma, США) до концентрации 100 мМ. Исходные растворы соединений (100 мМ в 100 % ДМСО) разводили непосредственно перед экспериментами в полной питательной среде DMEM или RPMI (Gibco, США), содержащей 10 % эмбриональной бычьей сыворотки (FBS, Gibco, США), 2 мМ L-глутамина (PanEco, Россия), 50 мкг/мл гентамицина сульфата (БиолоТ, Россия), для получения конечных концентраций. Конечная концентрация ДМСО составляла 0.1 %.

Исследование цитотоксичности соединений проводили in vitro с использованием клеточных линий нормального происхождения HEK293 (иммортализованные эмбриональные клетки почки человека) и опухолевого происхождения HepG2 (гепатоцеллюлярная карцинома человека), HTC116 (колоректальная карцинома человека), SH-SY5Y (нейробластома человека), A549 (аденокарцинома легкого человека), MCF-7 (аденокарцинома протоков молочной железы человека), Jurkat (Т-лимфобластная лейкемия) и THP-1 (острый моноцитарный лейкоз). Клеточные линии получены из Российской коллекции клеточных культур (Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург). Клетки линии HEK293 (2×10⁴ клеток на лунку), HepG2 (1.5×10⁴ клеток на лунку), SH-SY5Y (5×10⁴ клеток на лунку), HTC116 (1×10⁴ клеток на лунку), MCF-7 (1×10⁴ клеток на лунку), A549 (0.5×10⁴ клеток на лунку) высаживали в 96-луночные планшеты в 100 мкл среды DMEM (Gibco, США) в присутствии 10 % эмбриональной телячьей сыворотки (FBS, HyClone, США), 2 мМ L-глутамина и 50 мкг/мл гентамицина сульфата (Биолот, Россия). Клетки линии Jurkat (5×10⁴ клеток на лунку) и THP-1 (2×10⁴ клеток на лунку) высаживали в 96-луночные планшеты в 100 мкл среды RPMI-1640 (Gibco, США) в присутствии 10 % эмбриональной телячьей сыворотки (FBS, HyClone, США), 2 мМL-глутамина и 50 мкг/мл гентамицина сульфата (Биолот, Россия). Через 24 ч к клеткам добавляли вещества в концентрациях 1, 10, 100 мкМ (0.1 % ДМСО) с последующей инкубацией в течение 48 ч при 37°С, 5 % СО₂. Влияние соединений на выживаемость клеток оценивали с помощью витального красителя PrestoBlue®, согласно протоколу изготовителя (Invitrogen, США). Детекцию флуоресценции проводили, используя мультипланшетный анализатор 2300 EnSpire® Multimode Plate Readers («Perkin Elmer», США). Расчет величины IC₅₀ (концентрация вещества, при которой наблюдается 50 % ингибирование жизнеспособности клеток) осуществляли с помощью программы GraphPadPrizm 4.0 (GraphPadSoftwareInc., США). Данные представлены в виде значений среднего арифметического ± стандартной ошибки среднего, полученных в двух независимых экспериментах (N=2).

Цитотоксические свойства соединения (1) оценивали по способности подавлять жизнеспособность опухолевых (HepG2, HTC-116, THP-1, MCF-7, A549, Jurkat и SH-SY5Y) и условно-нормальных (HЕК293) клеток человека in vitro (таблица 2). Установлено, что (1) проявляет умеренную цитотоксическую активность в отношении всех клеточных линий с наиболее выраженным действием в отношении линии Т-клеточного лейкоза Jurkat.

Таблица 2. Цитотоксическая активность соединений in vitro

Соединение IC₅₀, мкМ HEK293 HepG2 HTC116 SH-SY5Y MCF-7 A549 Jurkat THP-1 Фторурацил 6.30
±0.70 3.90
±0.70 2.40
±0.90 1.20
±0.30 1.00
±0.04 0.30
±0.02 0.70
±0.10 4.30
±0.80 (1) 72.14
±1.47 68.51
±0.53 72.81
±2.06 54.99
±0.55 63.79
±2.29 64.48
±0.72 39.09
±0.07 46.36
±0.72 4-амино-бензамид < 100

Клетки инкубировали в присутствии соединений в течение 48 ч. Данные представлены в виде в виде среднего арифметического ± стандартная ошибка среднего (N=2; n=6).

Изобретение относится к области органической химии, конкретно к 4-{бис[(гептилтио)метил]амино}бензамиду формулы (1), который обладает умеренной цитотоксической активностью. 2 табл., 2 пр.

4-{Бис[(гептилтио)метил]амино}бензамид формулы (1)

,

обладающий умеренной цитотоксической активностью.