СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА Российский патент 2005 года по МПК A61K39/04 

Изобретение относится к ветеринарной иммунологии, в частности к способу специфической профилактики, и может быть использован для профилактики и оздоровления животноводческих ферм от туберкулеза.

Известен способ профилактики туберкулеза молодняка крупного рогатого скота (патент РФ №2146533, кл. А 61 К 39/04, 31/115; В.Н.Ласкавый, Э.Д.Лакман, 20.03.2000), который предусматривает введение телятам в возрасте от 1 до 10 суток внутримышечно в область крупа по 3-4 мл туберкулина и через 30-40 минут таким же способом вводят по 4-5 мл препарата, содержащего в качестве основного начала формальдегид, а в качестве целевых добавок NaCl и дистиллированную воду. Оба препарата вводят однократно и внутримышечно.

Недостатком данного способа является то, что такого рода иммунизация не создает у телят длительного противотуберкулезного иммунитета и поэтому в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах молодняк старших возрастов и коровы будут не защищены от туберкулеза.

Известен также способ профилактики туберкулеза животных (патент СССР №1790414, кл. А 61 К 39/04; А.С.Донченко с соавт., 23.01.93. Бюл. №3), который предусматривает иммунизацию животных вакциной БЦЖ с иммуномодулятором (высокомолекулярная РНК из дрожжей), затем иммуномодулятор вводят повторно без вакцины БЦЖ через 13-15 дней в том же количестве (0,5-50 мг/кг).

Недостатком данного способа является то, что использование для иммунизации иммуномодулятора повышает не только иммуногенные, но и усиливает реактогенные свойства вакцины БЦЖ, что снижает продолжительность протективного иммунитета у животных. Следовательно, известный способ профилактики длительно не защищает животных от заболевания туберкулезом.

Известен также способ специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота в неблагополучных хозяйствах с помощью вакцины БЦЖ (Наставление по применению вакцины БЦЖ при туберкулезе крупного рогатого скота, 26.02.1990 г.), согласно которому вакциной БЦЖ прививают телят однократно в возрасте 10-20 дней. Это позволяет сократить сроки оздоровления ферм с меньшими материальными затратами. Однако известный способ профилактики туберкулеза защищает животных в течение только одного года.

В ряде хозяйств течение туберкулеза приобретает длительный, стационарный характер. Эпизоотический процесс туберкулеза в таких хозяйствах становится неуправляемым и оздоровление их методом систематических аллергических исследований, как правило, не достигается. Это явилось основанием для использования радикального метода оздоровления - путем полной одномоментной замены неблагополучного поголовья здоровым (Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных // Сб. санитарных и ветеринарных правил. - М., 1996). Подготовка неблагополучной фермы для размещения здорового скота требует выполнения большого объема работ по санации помещений и территорий, что сопровождается большими материальными затратами.

Задачей изобретения является повышение эффективности профилактики туберкулеза путем создания у животных перманентного (непрерывного) иммунитета против туберкулеза.

Способ профилактики осуществляется иммунизацией вакциной БЦЖ телят в возрасте до 20 суток, реиммунизацией вакциной БЦЖ телок в возрасте 14-16 месяцев, затем нереагирующих животных на ППД-туберкулин дополнительно иммунизируют противотуберкулезной бесклеточной вакциной ТБЦ-2 в дозе 5-7 мг белка на одно животное. Последующие реиммунизации вакциной ТБЦ-2 проводят через каждые 12 месяцев в течение 4-6 лет (время возможной реинфекции). Коров, ревакцинированных ТБЦ-2, исследуют аллергической туберкулиновой пробой через каждые 6 месяцев.

Противотуберкулезная бесклеточная вакцина ТБЦ-2 - новый тип неживой бесклеточной (молекулярной) вакцины. Способ получения вакцины включает культивирование микобактерий из штамма БЦЖ, выделение 2 фракций - цитоплазматической и фракции клеточных оболочек. Фракцию клеточных оболочек конъюгируют на целлюлозной матрице в присутствии треххлористого хрома, затем добавляют цитоплазматическую фракцию. Испытание препарата на лабораторных животных и молодняке крупного рогатого скота показало, что вакцина нового типа обладает высокой иммуногенностью (патент 2217164, МПК А 61 К 39/04 от 27.11.2003, бюл. №33).

Пример 1. Для опыта отобрали 20 телок и в возрасте 10-20 дней, привили вакциной БЦЖ в кожу шеи по 1 мг (1-я группа). Для контроля также отобрали 20 телок в возрасте до 20-ти дней, которым вакцину БЦЖ не вводили (2-я группа).

Затем через 45 дней после иммунизации телят обеих групп исследовали на туберкулез с помощью однократной ППД-туберкулиновой пробы, больными считают среди привитых животных по утолщению кожной складки на 15 мм и выше (патент №1829929, МПК А 61 В 10/00 от 23.07.93, бюл №27) и среди непривитых телят по утолщению кожной складки на 3 мм и выше (Наставление по применению (ППД) туберкулинов для млекопитающих и птиц. Утверждено Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ от 16.02.1999 года).

С целью оценки иммунного статуса в периферической крови животных опытных групп определили число иммунокомпетентных клеток в абсолютном содержании (иммунологические параметры). Реакцией спонтанного розеткообразования (Е-рок) определили количество Т-лимфоцитов; реакцией непрямого глобулинового розеткообразования (ЕА-рок) - клетки-киллеры; комплементарным розеткообразованием (ЕАС-рок) - В-лимфоциты; лимфоциты, реагирующие с антигенами микобактерий с помощью розеткообразования (ЕТ-рок) с эритроцитами быка, адсорбировавшими туберкулин. Подсчет лейкоцитов и лейкограмм проводили по общепринятым методикам.

Далее иммунологические параметры исследовали дискретно-динамическим методом, который автоматизирован специальной программой для ЭВМ (заявка на выдачу патента №00669275 от 21.01.2003 г.). По результатам этих исследований составлены дифференциально-прогностические таблицы, позволяющие оценить иммунный статус животных, привитых противотуберкулезными препаратами.

В результате исследований установили (табл.1) высокую активность иммунокомпетентных клеток у 75% животных через 5 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ, у 40% животных через 12 месяцев (табл.2) и у 35% животных через 14 месяцев (табл.3).

Результаты этих исследований убеждают о необходимости проведения реиммунизаций телок в возрасте 14 месяцев вакциной БЦЖ внутрикожно в дозе 1 мг на одно животное.

Иммунный статус у животных после ревакцинации определяли также с помощью дискретно-динамического анализа. Установили у 70% животных (табл.4) повышенную активность иммунокомпетентных клеток через 6 месяцев и у 25% животных через 14 месяцев после ревакцинации.

Последующую реиммунизацию коров опытной группы провели через 14 месяцев бесклеточной вакциной ТБЦ-2. Перед реиммунизацией животных исследовали туберкулиновой аллергической пробой и установили, что у всех коров кожная реакция на ППД-туберкулин отсутствовала. Коровам опытной группы вакцину ТБЦ-2 ввели подкожно в дозе 6 мг белка на одно животное.

Через 6 месяцев после введения вакцины ТБЦ-2 животных исследовали туберкулиновой аллергической пробой и оценку иммунного статуса коров провели дискретно-динамическим анализом. Туберкулиновой аллергической реакции у коров не обнаружено. Иммунный статус коров, реиммунизированных вакциной ТБЦ-2, описан в таблице 5, где у 12 из 20 коров (60%) установили повышенную активность иммунокомпетентных клеток.

Аналогичные исследования коров проведены через 9 месяцев после реиммунизации вакциной ТБЦ-2. Животных, реагирующих на ППД-туберкулин, не выявлено, оценка иммунного статуса коров показана в дифференциально-прогностической таблице 6.

Таким образом, в эксперименте разработана схема вакцинации крупного рогатого скота, позволяющая создавать у животных перманентный протективный иммунитет, этим самым повысить профилактический эффект в 1,5-2 раза.

Пример 2. Производственное испытание схемы вакцинации крупного рогатого скота провели в ОПХ СибМИС Таврического района Омской области.

В хозяйстве по причине туберкулеза в 1999 году поголовье крупного рогатого скота сдали на убой. После проведения санитарных мероприятий в одно из подготовленных помещений разместили 144 телки в возрасте 14-16 месяцев из благополучных по туберкулезу ферм. При исследовании на туберкулез по всей группе дважды получили отрицательный результат. При исследовании через 4 месяца после завоза выделили 18 животных, реагирующих на туберкулин. Провели диагностический убой животных и у двух патологоанатомическим исследованием установили туберкулез.

Затем дважды двойной туберкулиновой пробой исследовали оставшихся животных, отделили реагирующих на ППД-туберкулин и нереагирующих животных привили вакциной БЦЖ внутрикожно в дозе 1 мг на одно животное.

Через 14 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ коров исследовали туберкулиновой аллергической пробой и установили, что у всех животных реакция отсутствовала. Также дискретно-динамическим анализом иммунологических параметров было установлено уменьшенное число взаимосвязей в системе иммунитета, что явилось основанием провести реиммунизацию коров бесклеточной вакциной ТБЦ-2. Коров через 6 и 12 месяцев после реиммунизации исследовали аллергической реакцией и установили, что все животные не реагируют на ППД-туберкулин.

Следовательно, реиммунизация вакциной ТБЦ-2 предохраняет животных от заболевания туберкулезом и позволяет контролировать стадо крупного рогатого скота на туберкулез аллергической реакцией 2 раза в год (через 6 месяцев после ревакцинации). В последующем по результатам дискретно-динамического анализа ревакцинацию провели еще дважды с интервалом 12 месяцев, что позволило в условиях неблагополучной по туберкулезу крупного рогатого скота ферме сохранить благополучие стада более 3 лет (срок наблюдения), предотвратить экономический ущерб только за один год на сумму 432 тыс. рублей.

В дальнейшем родившихся телят от коров данного стада иммунизируют вакциной БЦЖ в возрасте 10-20 дней, затем через 30-45 дней после иммунизации их дополнительно исследуют на туберкулез с помощью однократной туберкулиновой пробы, нереагирующих телят допрививают, реагирующих по увеличению кожной складки до 15 мм и более изолируют, после откорма сдают на убой. Из вакцинированного молодняка комплектуют отдельные группы по полу и возрасту и содержат обособленно. Повторное исследование однократной туберкулиновой пробой привитого молодняка проводят через 14 месяцев, реагирующих сдают на убой, нереагирующих телок формируют в отдельное стадо (телки перед осеменением) и ревакцинируют БЦЖ. В дальнейшем с этими животными поступают как описано ранее.

Последующие вакцинации коров ТБЦ-2 проводят ежегодно в течение 4-6 лет (время возможной реинфекции) после оздоровления хозяйства (фермы) от туберкулеза. Исследование коров на туберкулез проводят 2 раза в год через 6 месяцев. Из числа реагирующих отбирают 2-3 коровы для проведения контрольно-диагностического убоя.

Таблица 1Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у телок через 5 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ, тыс/мкл№ п/пСочетание, вариабельный параметр (базис)ИнтактныеПривитые  nt-критерий по Стьюдентувариабельныйбазисnt-критерий по Стьюдентувариабельныйбазис1В-лимфоциты (Т-киллеры)203,46⇐0,71⇐0,65202,55⇐0,29⇐0,462Т-киллеры (лейкоциты) 2,92⇐1,21⇐6,65    3Антигенреактивные лимфоциты (лейкоциты) 2,50⇐0,73⇐6,65    4Лейкоциты (В-лимфоциты) 2,42⇐6,20⇐1,05    5В - (Т-лимфоциты) 2,29⇐0,76⇐1,01    6Лейкоциты (Т-киллеры) 2,27⇐6,20⇐0,65    7Т-лимфоциты (лейкоциты)     4,29⇐0,80⇐6,208Т-лимфоциты (нейтрофилы)     3,63⇐0,53⇐1,109Лимфоциты (нейтрофилы)     2,89⇐3,26⇐1,1010Антигенреактивные лимфоциты (Т-киллеры)     2,82⇐0,28⇐0,4611Нейтрофилы (лимфоциты)     2,72⇐1,03⇐3,3812Лейкоциты (Т-лимфоциты)     2,58⇐5,13⇐0,6413В - (антигенреактивные лимфоциты)     2,49⇐0,64⇐0,4214Нейтрофилы (Т-лимфоциты)     2,20⇐0,94⇐0,64Количество иммунных животных735%1575%

Таблица 2Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у телок через 12 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ, тыс/мкл№ п/пСочетание, вариабельный параметр (базис)ИнтактныеПривитые  nt-критерий по Стьюдентувариабельныйбазисnt-критерий по Стьюдентувариабельныйбазис1Антигенреактивные-(В-лимфоциты)203,31⇐0,12⇐1,8520   2Лейкоциты (В-лимфоциты) 4,26⇐6,92⇐1,85    3Лейкоциты (Т-киллеры) 2,75⇐6,23⇐0,99 3,08>=10,4>=2,124Т-киллеры (лейкоциты)     3,14>=2,22>=8,50Количество иммунных животных630%840%

Таблица 3Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у телок через 14 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ, тыс/мкл№ п/пСочетание, вариабельный параметр (базис)ИнтактныеПривитые  nt-критерий по Стьюдентувариабельныйбазисnt-критерий по Стьюдентувариабельныйбазис1Е- (лейкоциты)203,20⇐2,02⇐7,3020   2ЕТ- (нейтрофилы) 2,17⇐1,26⇐1,55    3Т-киллеры (Т-лимфоциты)     3,30⇐1,41⇐1,174В-лимфоциты (Т-киллеры)     2,44⇐1,06⇐1,645В- (Т-лимфоциты)     2,23⇐1,14⇐1,17Количество иммунных животных630%735%

Таблица 4Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у телок и нетелей, привитых вакциной БЦЖ, тыс/мкл Через 6 месяцев после вакцинацииЧерез 14 месяцев после вакцинации№ п/пСочетание, вариабельный параметр (базис)nt-критерий по СтьюдентувариабельныйБазисnt-критерий по СтьюдентувариабельныйБазис1Т-лимфоциты (лейкоциты)202,71⇐0,90⇐6,40204,56⇐0,79⇐7,802Лейкоциты (Т-лимфоциты) 4,29⇐8,10⇐1,30 2,73⇐7,93⇐0,693Нейтрофилы (Т-киллеры)     2.55⇐1,50⇐0,614Лейкоциты (Т-киллеры) 4,29⇐8,10⇐1,14 2,44⇐8,38⇐0,61Количество иммунных животных1470%525%

Таблица 5Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у коров через 6 месяцев после ревакцинации ТБЦ-2, тыс/мкл№ п/пСочетание, вариабельный параметр (базис)nt-критерий по СтьюдентуВариабельныйБазис1В - (Т-лимфоциты)205,00⇐0,42⇐0,362Т-киллеры (лейкоциты) 4,50⇐1,07⇐4,903Антигенреактивные (В-лимфоциты) 4,45⇐0,10⇐0,444Лейкоциты (Т-киллеры) 4,11⇐4,87⇐1,145Антигенреактивные (Т-лимфоциты) 3.80⇐0,08⇐0,366Лейкоциты (Т-лимфоциты) 3,76⇐4,87⇐0,367Т-лимфоциты (антигенреактивные) 3,46⇐0,40⇐0,078Т-лимфоциты (Т-киллеры) 3,37⇐0,47⇐1,149Т-киллеры (Т-лимфоциты) 3,35⇐1,16⇐0,3610Т-лимфоциты (лейкоциты) 3,30⇐0,40⇐4,9011Лейкоциты (В-лимфоциты) 3,17⇐5,00⇐0,4412Т - (В-лимфоциты) 3,13⇐0,42⇐0,4413В-лимфоциты (лейкоциты) 2,60⇐0,51⇐4,9014Лейкоциты (антигенреактивные) 2,53⇐4,90⇐0,0715В-лимфоциты (антигенреактивные) 2,51⇐0,45⇐0,0716Т-киллеры (антигенреактивные) 2,41⇐1,07⇐0,0717В-лимфоциты (Т-киллеры) 2,38⇐0,59⇐1,1418Т-киллеры (В-лимфоциты) 2,37⇐1,26⇐0,4419Антигенреактивные (нейтрофилы) 2,36⇐0,13⇐0,6820Антигенреактивные (лейкоциты) 2,30⇐0,09⇐4,9021Нейтрофилы (В-лимфоциты) 2,24⇐0,80⇐0,44Количество иммунных животных1260%

Таблица 6Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у коров через 9 месяцев после ревакцинации ТБЦ-2, тыс/мкл№ п/пСочетание, вариабельный параметр (базис)nt-критерий по СтьюдентуВариабельныйБазис1Т-лимфоциты (лейкоциты)205,56⇐0 53⇐4,702В-лимфоциты (лейкоциты) 3,48⇐0,46⇐4,703Т - (В-лимфоциты) 3,26⇐0,60⇐0,494Лейкоциты (Т-лимфоциты) 3,25⇐4,82⇐0,515Лейкоциты (В-лимфоциты) 3,15⇐4,83⇐0,496Лейкоциты (Т-киллеры) 2,57⇐4,90⇐0,977В - (Т-лимфоциты) 2,57⇐0,43⇐0,518В-лимфоциты (Т-киллеры) 2,27⇐0,44⇐0,979В-лимфоциты (антигенреактивные) 2,23⇐0, 54⇐0,30Количество иммунных животных945%

Изобретение относится к ветеринарной иммунологии. Способ включает иммунизацию животных в возрасте 10-20 суток вакциной БЦЖ, исследование аллергической туберкулиновой пробой и реиммунизацию в возрасте 14-16 месяцев вакциной БЦЖ. Затем через каждые 12 месяцев животных реиммунизируют противотуберкулезной бесклеточной вакциной ТБЦ-2 подкожно в дозе 5-7 мг белка на одно животное до оздоровления фермы (хозяйства). Исследования на туберкулез проводят через 6 месяцев. Способ позволяет создавать у животных перманентный протективный иммунитет, за счет чего возможно повысить профилактический эффект в 1,5-2 раза. 6 табл.

Способ профилактики туберкулеза, включающий иммунизацию животных в возрасте 10-20 суток вакциной БЦЖ, затем исследование аллергической туберкулиновой пробой и реиммунизацию в возрасте 14-16 месяцев вакциной БЦЖ, отличающийся тем, что затем через 12 месяцев не реагирующих на туберкулин животных реиммунизируют противотуберкулезной бесклеточной вакциной ТБЦ-2 подкожно в дозе 5-7 мг белка на одно животное, после чего реиммунизацию вакциной ТБЦ-2 проводят через каждые 12 месяцев до оздоровления фермы (хозяйства), а исследования на туберкулез проводят через 6 месяцев.