СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 2006 года по МПК A61K39/04 A61B10/00 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способам диагностики туберкулеза с учетом дифференциации парааллергических и специфических туберкулиновых реакций.

Известен способ диагностики туберкулеза крупного рогатого скота посредством внутривенной инъекции туберкулина в дозе 4-5 мл (50% раствор очищенного туберкулина) с оценкой термической реакции через каждые 2 часа. Положительно реагирующих животных (повышение температуры тела на 1,2-1,6°С по сравнению к исходной) считают больными (См. А.И.Кузин "Оздоровление животноводческих хозяйств от туберкулеза", М., Россельхозиздат, 1987, с.74-75). Однако данный способ по точности уступает диагностике по внутрикожной пробе. Так при применении способа из 55 исследованных коров признано положительно реагирующих - 9, в то время как послеубойным осмотром установлен патологоанатомически выраженный туберкулезный процесс у 33 коров, а среди 9-ти положительно реагирующих туберкулезные изменения установлены у 7 животных.

Известен способ диагностики туберкулеза внутрикожной туберкулиновой пробы в дозе 0,2 мл. Животные считаются реагирующими на туберкулин при наличии на месте инъекции воспалительной припухлости с увеличением кожной складки на 3 мм и более. Однако данный способ требует очень высокой квалификации специалистов, как при проведении инъекций, так и при оценке результатов исследования. Так, при введении аллергена под кожу (а не внутрь кожи) или введение внутрь кожи пузырьков воздуха специфической реакции у больных животных может не возникнуть, а при нескольких уколах в одно место может появиться припухлость у здоровых животных. Величина и консистентность припухлости зависит также от того, введен ли аллерген в поверхностный слой кожи или в глубокий ее слой. Оценка результатов исследования, осуществляемая через 72 часа после инъекции, - процесс еще более сложный: определение характера припухлости, температуры и болезненности, измерение кожной складки на месте инъекции, ее консистенции и т.д. (См. "Оздоровление животноводческих хозяйств от туберкулеза", А.И. Кузин, Россельхозиздат, М., 1987, с.60-65 прототип). Кроме этого исследованиями заявителя в области протекания внутрикожных аллергических реакций у животных, вызванных атипичными микобактериями, микобактериями паратуберкулеза и факторами нетуберкулезной этиологии, выявлена высокая схожесть реакций у животных, больных туберкулезом, что при наличии сенсибилизированных различными видами микобактерий животных из стад, при диагностике туберкулеза внутрикожной пробой туберкулина, выбраковывается большой процент здоровых животных.

Необходима разработка способа диагностики туберкулеза крупного рогатого скота, позволяющего с большой точностью дифференцировать при диагностике парааллергические и специфические туберкулиновые реакции, а следовательно, сократить необоснованный убой здорового поголовья скота, т.е. разработать наиболее чувствительные и статистически достоверные критерии.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе диагностики туберкулеза посредством внутрикожной инъекции туберкулина, животных, реагирующих на внутрикожную пробу, инъецируют внутривенной пробой туберкулина, при этом больными признаются животные, реагирующие повышением температуры тела после внутривенной инъекции туберкулина в течение 8-12 часов при наличии величины превышения границы физиологической нормы не менее 0,5°С, при этом диагностическая доза внутрикожной пробы туберкулина составляет 0,2 мл, внутривенная не более 4 мл.

Сущность способа заключается в том, что диагностирование туберкулеза внутрикожной пробой при низком расходе туберкулина (0,2 мл) не учитывает реакции, вызванные факторами туберкулезной этиологии, а диагностирование внутривенной пробой предопределяет высокий расход туберкулина. Однако внутривенной пробой, как показали исследования, возможно дифференцирование парааллергических и специфических туберкулиновых реакций путем выявления животных, реагирующих повышением температуры тела в течение 8-12 часов при наличии величины превышения границы физиологической нормы за этот период не менее 0,5°С. При этом внутривенной пробой диагностируются только те животные, которые прореагировали на внутрикожную пробу.

Исследования проводились на 20 здоровых животных, а также 247 животных, часть из которых сенсибилизирована микобактериями птичьего вида, вторая часть атипичными и сопрофитными микобактериями, третья - микобактериями туберкулеза, четвертая - факторами немикобактериальной этиологии, кроме этого внутривенную пробу испытывали на 197 животных, инфицированных возбудителем туберкулеза бычьего вида. У животных, сенсибилизированных факторами нетуберкулезной этиологии, через 2, 4, 6, 8, 10 часов температура тела соответственно повышалась на 0,2±0,1; 0,4±0,1; 0,4±0,1; 0,3±0,1 и 0,2±0,1°С. У больных туберкулезом животных через 2; 4; 6; 8; 10; 12; 24 и 36 часов температура тела повышалась соответственно на 0,3±0,2; 0,8±0,2; 0,5±0,3; 0,9±0,1; 0,8±0,2; 0,5±0,1; 0,4±0,1 и 0,3±0,1°С. Эти данные, отраженные на графике (см. чертеж) наглядно отражают суть исследований. На графике (см. чертеж) видно, что у животных с неспецифическим фоном сенсибилизации при воздействии внутривенной пробой туберкулина повышение температуры тела выше границ физиологической нормы не превышает 0,4±0,1°С, в то время как у больных туберкулезом животных этот показатель в течение от 3 до 24 часов был выше этой границы, что позволило дифференцировать парааллергические и специфические туберкулиновые реакции. Согласно графику, если у животного в течение от 2 до 6 часов температура тела не превышала границу физиологической нормы на 0,4±0,1°С, то животное следует считать здоровым, а повышение температуры является следствием сенсибилизации факторами нетуберкулезной этиологии. Животных при наличии превышения температуры за этот период выше 0,5°С следует считать больными. Однако, для более точной диагностики проводили замеры температур через 8, 12, 24, 36 часов после внутривенной инъекции туберкулина. Оказалось, что единичные (в данном опыте 3 животных из 197 исследуемых) особи, по непонятным пока причинам, будучи здоровыми реагировали на постановку внутривенной пробы повышением температуры выше физиологической нормы на 0,6-0,7°С, однако по истечении, как правило, 8 часов температура приходила в норму. Проведенные исследования показывают, что с целью дифференциации аллергических реакций у крупного рогатого скота целесообразно использовать ППД-туберкулин для млекопитающих. При этом крупный рогатый скот, инфицированный возбудителем туберкулеза бычьего вида, реагирует на внутрикожное введение диагностической дозы (10 тыс.ME). Внутривенная проба менее 4 мл, как показали исследования, нецелесообразна, ввиду того, что при большом весе животного доза менее 4 мл может обеспечивать недостоверный результат.

Пример: На ферме, имеющей 115 голов крупного рогатого скота, была проведена диагностика туберкулеза заявленным способом. Все животные после обработки 70-градусным спиртом поля, предварительно выстриженного на средней трети шеи, инъектором БИ.1.М.01-01.000ТО была проведена диагностическая внутрикожная проба туберкулина в дозе 0,2 мл. Через 72 часа, после считывания реакции установлено, что у 21 животного величина кожной складки превышала норму на 3 мм. Сразу после считывания реакции на внутрикожную пробу после предварительного замера температуры тела 21 животному, реагирующему положительно на внутрикожную пробу, была проведена внутривенная проба туберкулина в дозе 4 мл без разведения. Замер температуры в течение времени диагностирования проводился в области прямой кишки ртутным термометром. На 12 часу после постановки внутривенной пробы у 7 животных наблюдалось повышение температуры тела на 0,5; 0,7; на 0,7; 0,6; 0,5; 0,8; 0,6°С выше физиологической нормы. При диагностическом убое у всех 7 животных констатировали туберкулез лимфатических узлов (заглоточных, подчелюстных, бронхиальных и т.д.) и органов (легкие, печень, костальная плевра). Данные патологоанатомического метода были подтверждены бактериологическими и культурально-биологическими исследованиями.

В данном случае, применение заявленного способа позволило сохранить от необоснованного убоя 14 животных.

Исследование возможности диагностирования туберкулеза заявленным способом путем замера температур через 8-12 часов после внутривенной инъекции туберкулина обеспечивало 97; 99; 98% выявления больных туберкулезом животных с подтверждением туберкулеза на вскрытии.

Таким образом, в отличие от диагностики туберкулеза внутрикожной туберкулиновой пробой, которая при первичном и повторном (через 30-45 дней) в течение 6 месяцев заявленный способ (при сочетании диагностики внутрикожной и внутривенной пробой туберкулина) позволяет в течение 5 дней выявить и изолировать почти 100% контингент больных туберкулезом животных. Следует отметить, что расход туберкулина на внутривенные пробы в данном случае сокращен от 1,3 до 25 раз.

Изобретение относится к биотехнологии. После постановки внутрикожной пробы туберкулина, животным, реагирующим на нее, инъецируют внутривенную пробу туберкулина. Животных, реагирующих повышением температуры тела выше физиологической нормы на 0,5°С в период от 8 до 12 часов после введения внутривенной пробы, считают больными. Способ позволяет с высокой точностью диагностировать туберкулез крупного рогатого скота путем исключения влияния на конечный результат парааллергических реакций на туберкулин и исключить необоснованную выбраковку здоровых животных. 2 з.п. ф-лы, 1 ил.

1. Способ диагностики туберкулеза крупного рогатого скота посредством внутрикожной инъекции туберкулина, отличающийся тем, что животным, реагирующим на внутрикожную аллергическую пробу, после читки реакций инъецируют внутривенную пробу туберкулина, при этом больными признаются животные, реагирующие повышением температуры тела выше границы физиологической нормы не менее 0,5°С в период от 8 до 12 ч от начала постановки внутривенной пробы.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что внутривенную пробу вводят в дозе не менее 4 мл.3. Способ по п.1, отличающийся тем, что внутрикожную пробу инъецируют в дозе не менее 10 ME в объеме 0,2 мл.