Способ выявления анергичного, больного туберкулёзом крупного рогатого скота Российский патент 2018 года по МПК A61K39/04 A61K39/35 A61D99/00 

Предлагаемое изобретение относится к ветеринарии, в частности к аллергической диагностике туберкулеза крупного рогатого скота внутрикожной туберкулиновой пробой, и может быть использовано при проведении оздоровительных мероприятий в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах.

Уровень техники

Туберкулез и в настоящее время остается одним из широко распространенных инфекционных заболеваний человека и животных, при котором не разработаны высокоэффективные средства иммунной защиты и лечения.

Основой профилактических и оздоровительных мероприятий при туберкулезе животных является диагностика болезни, а основным способом прижизненной диагностики - аллергический метод с применением внутрикожной пробы с ППД туберкулином для млекопитающих.

При этом в благополучных хозяйствах используется однократный метод внутрикожного введения туберкулина, а в неблагополучных хозяйствах - двукратный метод введения.

Сущность однократного метода введения - в область средней трети шеи вводят внутрикожно ППД туберкулин для млекопитающих в дозе 10000 ТЕ (туберкулиновая единица), что соответствует 2000 ME (международная единица) в 0,2 мл растворителя (Козлов В.Е., Букова Н.К., Найманов А.Х. Оценка активности и специфичности коммерческих серий туберкулина (ППД) для млекопитающих отечественного и зарубежного производства. Ветеринарная патология, 2004, №1-2 (9), стр. 51-54), (Козлов В.Е., Безгин В.М., Шумилов К.В., Букова Н.К., Найманов А.Х., Мясоедов Ю.М., Ничвеева Л.Д., Абрамов В.Н., Дубинин B.C. Оценка активности национального стандарта туберкулина (ППД) для млекопитающих относительно первого международного стандарта туберкулина (РРД) bovine. Ветеринарная патология, 2004, №1-2 (9), стр. 86-89).

Учет и оценку реакции проводят через 72 часа после введения туберкулина. Реагирующими считают животных с увеличением кожной складки на 3 мм и выше.

В качестве прототипа мы берем метод двукратного введения - в область средней трети шеи вводят внутрикожно ППД туберкулин для млекопитающих в дозе 10000 ТЕ (2000 ME) в 0,2 мл растворителя. Учет и оценку реакции проводят через 72 часа, реагирующими считают животных с увеличением кожной складки на 3 мм и больше. Нереагирующим животным, в это же место вводят внутрикожно туберкулин, в этой же дозе. Учет и оценку реакции проводят через 24 часа после второго введения туберкулина. («Наставление по диагностике туберкулеза животных», утвержденное Департаментом ветеринарии МСХ РФ, 18 ноября 2002; Санитарные и ветеринарные правила «Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных» утвержденные Госкомсанэпиднадзором и Департаментом ветеринарии МСХ РФ 18 июня, 1996 г.).

Применение внутрикожной туберкулиновой пробы в широкой ветеринарной практике создает две главные и противоположные проблемы: первая - перевыявление реагирующих животных с неспецифическими реакциями на туберкулин в благополучных хозяйствах; вторая проблема - недовыявление больных туберкулезом животных в неблагополучных хозяйствах, поэтому, при проведении прижизненных диагностических исследований в благополучных хозяйствах необходимо повысить специфичность, а в неблагополучных - чувствительность диагностических исследований.

Технической проблемой, которую решает предлагаемое изобретение, является недовыявление больных туберкулезом, анергичных животных в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах.

Раскрытие сущности изобретения

В связи с выявлением значительного количества реагирующих животных с неспецифическими реакциями целесообразность применения двукратного введения туберкулина с учетом аллергических реакций на повторное введение через 24 часа весьма проблематично. Так, многими авторами установлено, что при учете аллергических реакций через 24 часа после введения туберкулина, воспалительные явления в месте внутрикожного введения туберкулина не успевают исчезнуть, в результате чего до 15% (а при сенсибилизации атипичными микобактериями до 80%) здоровых коров могут давать увеличение кожной складки 3-5 мм в месте введения туберкулина (Миловзоров В.П., Рягузов B.C. Туберкулез и паратуберкулез сельскохозяйственных животных, 1934, стр.47), (Овдиенко Н.П., Найманов А.Х. «Изучение динамики аллергических реакций на внутрикожное введение туберкулина для млекопитающих». Бюл. ВИЭВ, 1983, т. 51, стр. 42-46) А в соответствии с «Наставлением по диагностике туберкулеза животных» утвержденными Департаментом ветеринарии МСХ РФ, 18 ноября 2002. реагирующие животные с увеличением кожной складки на 3 мм и выше считаются зараженными туберкулезом и подлежат убою.

В целях довыявления больных туберкулезом животных и сохранения значительного количества неспецифических реакций в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах нами предлагается способ увеличения чувствительности кожи в месте введения туберкулина.

Сущность предлагаемого способа выявления анергичного больного туберкулезом КРС заключается в следующем, в неблагополучном по туберкулезу стаде коров каждому животному внутрикожно, в область средней трети шеи, вводят ППД-туберкулин для млекопитающих в дозе 10000 ТЕ (2000 ME) и проводят учет аллергических реакций. Через 7 дней проводят повторное введение (в этом же месте) туберкулина и учет аллергических реакций. Через 7 дней после второго введения туберкулин вводят в это же место третий раз. Учет реакции проводят через 72 часа после 1, 2 и 3 введения. Реагирующими считаются животные с увеличением толщины кожной складки на 3 мм и выше.

Зараженными туберкулезом считаются животные, реагирующие на первое, второе или третье внутрикожное введение туберкулина, то есть все реагирующие на туберкулин животные считаются зараженными туберкулезом и подлежат убою.

Заявленное техническое решение отличается от прототипа тем, что повторное введение туберкулина проводится через 7 дней, а учет аллергических реакций - через 72 часа после каждого внутрикожного введения туберкулина.

Этот способ выявления анергичного, больного туберкулезом КРС по сравнению с используемыми способами является более чувствительным и специфичным, что позволяет применять его в неблагополучных стадах для дополнительного выявления зараженных туберкулезом животных и ускорения оздоровления неблагополучных по туберкулезу стад крупного рогатого скота.

Осуществление изобретения

Примеры осуществления заявленного способа выявления анергичного, больного туберкулезом крупного рогатого скота:

Исследования провели на 160 коровах благополучного по туберкулезу хозяйства (им. Циолковского); на 968 коровах четырех благополучных хозяйств, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями («Калужский», «Прогресс», «Родина», «Еланский»); на 2018 коровах четырех неблагополучных по туберкулезу хозяйств («Дружба», «40 лет Казахстана», «Заря», «Ильиновский»).

Аллергические исследования проводили методом внутрикожной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих. Туберкулин вводили безыгольным иньектором БИ-7 в среднюю часть шеи каждому животному трехкратно в одно и то же место с интервалом между введениями 7 дней. Учет реакции проводили через 72 часа после первого, второго и третьего введений туберкулина. Реагирующими считали животных с увеличением толщины кожной складки на 3 мм и выше на каждое из введений туберкулина.

В неблагополучных по туберкулезу хозяйствах убили 71 корову, реагирующую на первое, второе и третье введения туберкулина. После убоя животных проводили патологоанатомические исследования на туберкулез туш, внутренних органов и лимфатических узлов. От животных, у которых не обнаружили характерных для туберкулеза изменений, патологический материал исследовали бактериологическим методом.

Результаты изучения диагностических исследований в благополучных и неблагополучных по туберкулезу хозяйствах представлены в таблице.

Представленные в таблице данные показывают, что в благополучном по туберкулезу хозяйстве им. Циолковского, при трехкратном введении туберкулина 163 коровам, реагирующих животных не выявили на первое, второе и третье введения туберкулина.

В хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, у отдельных животных выявляли реакции на туберкулин. Так, в хозяйстве «Калужский» при исследовании 346 голов крупного рогатого скота на первое введение туберкулина животные не реагировали, на второе реагировало 3, на третье - реагирующих животных не выявили. Утолщение кожной складки у реагирующих коров не превышало 3-5 мм, реагирующие на второе введение коровы не реагировали на третье введение туберкулина.

В хозяйстве «Прогресс» при исследовании 273 коров на первое введение реагировало 2, на второе - 0, на третье - 1 корова. На все три введения туберкулина не реагировала ни одна корова.

В хозяйстве «Родина» при исследовании 165 коров на первое введение реагировало 8 (4,8%) животных, на второе - 2 (1,2%), на третье - 1 (0,6%) корова. Из шести реагировавших на первое введение туберкулина животных только одна реагировала на первое, второе и третье введение туберкулина.

В хозяйстве «Еланский» при исследовании 184 коров на первое введение реагировало 5 (2,7%) животных, на второе - 3 (1,6%), на третье - 1 (0,5%) корова. Из пяти животных, реагировавших на первое введение туберкулина, ни одно - не реагировало на все три введения туберкулина.

Следует отметить, что во всех хозяйствах реакции у реагирующих коров были незначительными, т.е. утолщение кожной складки было в пределах 3-5 мм.

Полученные результаты в благополучных хозяйствах показывают, что специфичность туберкулиновой пробы не снижается при трехкратном ее применении при условии выдержки интервала между введениями 7 дней и учете реакции через 72 часа после каждого введения туберкулина.

В благополучных хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, на второе и третье введение туберкулина выявляются реагирующие на туберкулин животные в незначительном количестве. Так, при исследовании 968 коров на первое введение реагировало 15 (1,5%), на второе - 8 (0,8%), на третье - 3 (0,3%).

Интересным является факт, что в благополучных хозяйствах реагирующие на первое введение туберкулина животные практически не реагируют на второе и третье введения туберкулина. Так, в четырех благополучных хозяйствах из 26 реагировавших на туберкулин животных только одна корова реагировала на все три введения туберкулина. Из полученных результатов следует, что реакции у здоровых сенсибилизированных коров, как правило, выпадают на второе и третье введения туберкулина, т.е. реакции не стабильны.

Исследования в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах.

Работу провели в хозяйствах с различной эпизоотической ситуацией по туберкулезу.

Так, в хозяйстве I оздоровительные мероприятия проводили методом систематических исследований поголовья скота двукратной внутрикожной туберкулиновой пробой. При каждом аллергическом исследовании выявляли реагирующих на туберкулин коров, при убое которых туберкулезные изменения обнаруживали у единичных животных.

В этом хозяйстве в начале исследований мы провели исследование одного стада из 105 коров разными методами в целях дополнительного выявления больных туберкулезом животных. Так, указанное поголовье скота мы исследовали двукратной внутрикожной, двукратной глазной и пальпебральной туберкулиновой пробами. Из числа исследованных коров убили 100 животных, сыворотки убитых коров исследовали в РНГА.

При учете реакций на аллергические пробы выявили реагирующих: на внутрикожную пробу: первое введение - 2, второе введение - 9; на двукратную глазную пробу - 0; на пальпебральную пробу - 0; в РНГА получены положительные результаты в 31 случае.

При патологоанатомическом осмотре 100 убитых коров характерные для туберкулеза изменения обнаружены в 6 (6,0%) случаях. Из них на первое внутрикожное введение туберкулина реагировало 1 животное, на второе - 0, на глазное и пальпебральное введение - 0, РНГА была положительной в разведении 1:32 в 4-х случаях. Одна корова с характерными для туберкулеза изменениями не дала положительных показаний ни на одну пробу.

Полученные результаты исследований показывают, что ни один из примененных методов прижизненной диагностики туберкулеза не выявил всех больных туберкулезом животных. Наибольшее количество положительных показаний и выявление больных туберкулезом коров получены при серологическом исследовании сывороток крови методом РНГА, тем не менее, специфичность РНГА остается низкой. Так, в нашем опыте из 31 коровы, давших положительные результаты в РНГА, туберкулезные изменения обнаружены только в 4-х случаях (12,9%).

В хозяйстве I исследования провели на 393 коровах. При учете реакции реагировало на первое введение 2 головы (0,5%), на второе - 4 (1,01%), на третье введение туберкулина реагировало 3 коровы (0,74%). Следует указать, что реагировавшие на первое введение коровы не реагировали на второе и третье введения туберкулина, а из 4-х голов, реагировавших на второе введение, 3 коровы реагировали и на третье введение туберкулина.

При диагностическом убое всех 9 реагирующих коров туберкулез подтвержден у трех животных, реагировавших на второе и третье введения туберкулина. Проведенными лабораторными исследованиями патматериала от убитых коров туберкулез подтвержден еще у одной коровы, т.е. туберкулез подтвержден у 4-х (44,4%) реагирующих коров.

У реагирующих на первое введение туберкулина коров туберкулез не подтвердили патологоанатомическими и лабораторными исследованиями. При исследовании сывороток крови методом РСК от 9 убитых коров получены отрицательные результаты.

В хозяйстве II оздоровительные мероприятия проводили методом систематических исследований поголовья скота двукратной внутрикожной туберкулиновой пробой. При каждом аллергическом исследовании выявляли реагирующих на туберкулин коров, туберкулезные изменения не находили. В этом хозяйстве было исследовано 340 коров. При учете реакции выявили всего 50 (14,7%) реагирующих коров. Из них на первое введение туберкулина реагировало 39 (11,47%), на второе - 6 (1,76%), на третье - 5 (1,47%) животных.

Из 39 реагировавших на первое введение туберкулина коров реакции сохранили на второе введение 23, на третье - 16 голов, т.е. на все три введения туберкулина реагировало 16 животных (41,02%). Из 6 реагировавших на второе введение коров 4 реагировали и на третье введение туберкулина. При убое 22 коров (12 реагировало на первое введение: из них 11 реагировало на второе, 9 - на третье введение туберкулина, т.е. на все три введения туберкулина реагировало 9 животных) характерных для туберкулеза изменений не обнаружили ни в одном случае.

При серологическом исследовании сывороток крови убитых коров методом РСК положительный результат получен в одном случае (корова реагировала на все три введения туберкулина).

При лабораторном исследовании патматериала от 22 убитых коров туберкулез подтвержден в 6 случаях (3 - реагировавшие коровы на все три введения туберкулина, 3 - реагировавшие на второе и третье введения туберкулина).

В хозяйстве III оздоровительные мероприятия проводили методом систематических аллергических исследований поголовья скота двукратной внутрикожной туберкулиновой пробой с использованием ППД-туберкулина для млекопитающих. В этом хозяйстве нами было исследовано стадо коров 531 голов, выявлено реагирующих - 52. Из них на первое введение туберкулина реагировало 31 (5,8%), на второе - 12 (2,2%), только на третье введение туберкулина реагировало 9 (1,7%) коров. Из 31 реагировавшей на первое введение коровы, на второе введение реагировало 12, на третье - 7 голов, т.е. на все три введения туберкулина реагировало 7 (22,6%) коров. Из 12 животных, реагировавших на второе введение, 5 коров реагировало и на третье введение туберкулина.

При диагностическом убое 20 коров, реагировавших только на второе и третье введения туберкулина (10 реагировало на второе и третье введения, 10 только на третье введение туберкулина) характерные для туберкулеза изменения не обнаружены ни в одном случае.

При исследовании сывороток крови от 20 убитых коров методом ИФА положительные результаты получены в 7 случаях.

При лабораторном исследовании патологического материала от 20 убитых коров туберкулез подтвержден в двух случаях (первый у реагирующей коровы на второе и третье введения туберкулина, второй - у реагирующей только на третье введение туберкулина и давшей положительный результат в ИФА).

В хозяйстве IV оздоровительные мероприятия проводили методом систематических аллергических исследований поголовья скота двукратной внутрикожной туберкулиновой пробой. При каждом аллергическом исследовании в хозяйстве выявляли реагирующих на туберкулин коров, при убое которых в единичных случаях обнаруживали характерные для туберкулеза изменения.

Нами исследовано стадо 754 коров, выявлено реагирующих 98 животных. Из них на первое введение туберкулина реагировало 74 (9,8%), на второе - 18 (2,4%), только на третье введение реагировало 6 (0,8%) коров. Из 74 реагировавших на первое введение туберкулина коров на второе введение реагировало 48, на третье введение - 46, т.е. на все три введения туберкулина реагировало 46 (62,5%) животных.

При убое 20 коров, реагировавших только на второе и третье введения туберкулина (11 реагировало на второе и третье введения, 9 - только на третье введение), характерные для туберкулеза изменения обнаружили в двух случаях (первый у реагировавшей на второе и третье введения, второй - у реагировавшей только на третье введение туберкулина).

При исследовании сывороток крови от 20 убитых коров методом ИФА положительные результаты получены в двух случаях.

При лабораторном исследовании патологического материала от 20 убитых коров туберкулез подтвержден еще у 6 животных (5 реагирующих на второе и третье введение туберкулина, в т.ч. одна корова с положительным результатом в ИФА, и одна корова, реагировавшая только на третье введение туберкулина).

Результаты проведенных исследований показывают, что при трехразовом введении туберкулина динамика проявления аллергических реакций у крупного рогатого скота в благополучных хозяйствах (где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями) отличается от динамики проявления аллергических реакций в неблагополучных хозяйствах.

В благополучных хозяйствах у коров реакции нестабильные. У реагировавших на первое введение туберкулина коров большей частью реакции выпадают на второе и третье введения туберкулина. Так, в нашем опыте из 26 реагировавших коров только одна (3,7%) корова реагировала на все три введения туберкулина.

В неблагополучных по туберкулезу хозяйствах реакции на трехразовое введение туберкулина более стабильны. Так, в четырех хозяйствах из всех 209 реагировавших коров 69 (33,0%) реагировали на все три введения туберкулина.

Полученные результаты исследований и анализ этих результатов позволяют нам сделать следующие выводы:

- в благополучных по туберкулезу хозяйствах здоровые животные не реагируют на трехразовое внутрикожное введение туберкулина при условии введения туберкулина с интервалом 7 суток и учете реакции через 72 часа после каждого введения;

- в благополучных хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, специфичность туберкулиновой пробы также снижается;

- в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах применение метода усиления чувствительности кожи к введению туберкулина довыявляет больных туберкулезом животных.

Полученные результаты исследований показывают, что способ «повышения чувствительности к туберкулину» можно использовать в оздоравливаемых от туберкулеза хозяйствах, как дополнительный метод выявления зараженных туберкулезом животных.

Источники информации

1. Гулюкин М.И., Найманов А.Х., Ведерников В.А., Толстенко Н.Г., Букова Н.К., Яременко Н.А. «Оздоровительные мероприятия при туберкулезе крупного рогатого скота». Ветеринария, 2012, №1, стр. 3-8.

2. Козлов В.Е., Букова Н.К., Найманов А.Х. Оценка активности и специфичности коммерческих серий туберкулина (ППД) для млекопитающих отечественного и зарубежного производства. Ветеринарная патология, 2004, №1-2 (9), стр. 51-54.

3. Козлов В.Е., Безгин В.М., Шумилов К.В., Букова Н.К., Найманов А.Х., Мясоедов Ю.М., Ничвеева Л.Д., Абрамов В.Н., Дубинин B.C. Оценка активности национального стандарта туберкулина (ППД) для млекопитающих относительно первого международного стандарта туберкулина (РРД) bovine. Ветеринарная патология, 2004, №1-2 (9), стр. 86-89.

4. Миловзоров В.П., Рягузов B.C. Туберкулез и паратуберкулез сельскохозяйственных животных, 1934, стр. 47.

5. Овдиенко Н.П., Найманов А.Х. «Изучение динамики аллергических реакций на внутрикожное введение туберкулина для млекопитающих». Бюл. ВИЭВ, 1983, т. 51, стр. 42-46.

6. Найманов А.Х., Овдиенко Н.П. «О кратности внутрикожного введения туберкулина». Материалы международной конференции к 110-летию Курской биофабрики. Курск, 2006, стр. 178-185.

7. Найманов А.Х. «Аллергическая диагностика туберкулеза КРС внутрикожной туберкулиновой пробой». Ветеринарный консультант, 2008, №13-14, стр. 6-10.

8. Найманов А.Х., Овдиенко Н.П., Канеев Н.Х. Значение кратности введения аллергена и динамика проявления аллергических реакций на однократное и двукратное введение туберкулина. Материалы Международной научно-практической конференции, 2008, стр. 186-195.

Современное состояние и перспективы исследования инфекционных и протозойных патологий животных, рыб и пчел, 9-10 октября 2008.

9. «Наставление по диагностике туберкулеза животных», утвержденное Департаментом ветеринарии МСХ РФ, 18 ноября 2002.

10. Санитарные и ветеринарные правила «Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных», утвержденные Госкомсанэпиднадзором и Департаментом ветеринарии МСХ РФ, 18 июня 1996.

11. Шаров А.Н., Плотников Э.С. О кратности введения туберкулина крупному рогатому скоту. Ветеринария, 1987, №8, стр. 20-23.

12. Шаров А.Н., Ауштрова К.Н. Чувствительность кожи при туберкулинизации. Ветеринария, 1990, №12, стр. 24-25.

13. Щуревский В.Е., Овдиенко Н.П., Найманов А.Х., Якушева О.В., Шаров А.Н., Плотников Э.С. «О кратности введения туберкулина крупному рогатому скоту». Ветеринария, 1987, №8, стр. 29.

Изобретение относится к области ветеринарии и представляет собой способ выявления анергичного, больного туберкулезом крупного рогатого скота. Изобретение обеспечивает возможность выявления недовыявленных больных туберкулезом, анергичных животных в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах. 2 пр., 1 табл.

Способ выявления анергичного, больного туберкулезом крупного рогатого скота, включающий внутрикожное введение ППД туберкулина в дозе 10000 ТЕ в среднюю треть шеи, в одно и то же место, проведение учета реакции на первое введение туберкулина через 72 часа, реагирующими считаются животные с увеличением толщины кожной складки на 3 мм и больше, отличающийся тем, что туберкулин вводят трехкратно с интервалом в 7 дней, после каждого введения туберкулина, а учет аллергических реакций проводят через 72 часа после каждого введения туберкулина.