СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ТУБЕРКУЛИНОВЫХ ПРОБ В ДИАГНОСТИРУЕМОЙ ГРУППЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 2009 года по МПК A61K39/04 A61B10/00 

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к методам дополнительного дифференциального распознавания туберкулеза у животных.

Основным методом для прижизненного распознавания туберкулеза является аллергический метод с помощью туберкулиновых проб. Вместе с тем очень часто у животных, положительно реагирующих на туберкулин, не удается подтвердить наличие болезни. Это может быть следствием заражения животных атипичными и паратуберкулезными микобактериями, микобактериями птичьего вида, наличия глистной инвазии и т.д.

Известен способ оценки эффективности туберкулиновых проб у крупного рогатого скота, описанный в способе диагностики туберкулеза крупного рогатого скота (патент №2295356), который заключается в том, что животным внутрикожно вводят ППД-туберкулин в дозе не менее 10 ME в объеме 0,2 мл. Больными признают животных с длительностью проявления аллергической реакции свыше 168 часов.

Недостатком этого метода является его длительность и недостаточная точность, так как метод не исключает ложных аллергических реакций на туберкулин.

Известен способ оценки эффективности туберкулиновых проб у крупного рогатого скота, описанный в способе диагностики туберкулеза крупного рогатого скота (патент № 2274473), который заключается в том, что после постановки внутрикожной пробы туберкулина животным, реагирующим на нее, инъецируют внутривенную пробу туберкулина. Животных, реагирующих повышением температуры тела выше физиологической нормы на 0,5°С в период от 8 до 12 часов после введения внутривенной пробы, считают больными.

Недостатком этого метода является его недостаточная точность и также он не исключает неспецифических аллергических реакций на туберкулин, вызванных атипичными и др. видами микобактерий.

Известен способ оценки эффективности туберкулиновых проб в диагностируемой группе крупного рогатого скота, который выбран за прототип, который описан в способе дифференциации аллергических реакций у животных (Кузин А.И. Туберкулез сельскохозяйственных животных и его профилактика. - М.: Росагропромиздат, 1992. - С.83-84.). Животным проводят аллергическую симультанную пробу, состоящую из введения животным туберкулина и комплекса из атипичных микобактерий (КАМ). Непосредственно перед применением туберкулин (ППД) и КАМ растворяют согласно Наставлению по этим препаратам. Затем, после подготовки поля для инъекции, вводят одновременно оба аллергена соответственно с правой и левой стороны шеи крупного рогатого скота внутрикожно в дозе 0,2 мл. Учет и оценку реакции на туберкулин и КАМ проводят через 72 часа. Путем пальпации места инъекции и измерения кожной складки кутиметром определяют степень выраженности реакций на туберкулин в сравнении с реакцией на КАМ. Результаты исследования записывают в ведомость учета симультанной пробы. При этом более ярко выраженную реакцию на туберкулин по сравнению с КАМ обозначают знаком «+» (плюс), а животных называют «реагирующие на туберкулин (+)», менее выраженную реакцию на туберкулин - знаком «-» (минус), а животных называют «реагирующие на КАМ(-)», а одинаковые реакции на оба аллергена - знаком «=» (равенство), а животных называют «реагирующие на туберкулин и КАМ (=)». Животных, не реагирующих на туберкулин, при оценке результатов симультанной пробы не учитывают, независимо от наличия у них реакции на КАМ, и называют «не реагирующие на туберкулин и на КАМ». Затем производят подсчет знаков «+» и «-» в ведомости данной группы животных и проводят оценку результатов симультанной пробы на основании определения достоверности различия количества знаков «+» и «-» в целом по группе согласно прилагаемой к Наставлению таблице. Статистически достоверно большее количество знаков «+» указывает на заражение животных в группе бычьим видом возбудителя, т.е. больных туберкулезом. Статистически достоверно большее количество знаков «-» указывает на заражение животных в группе атипичными микобактериями или птичьим видом микобактерий, т.е. не больных туберкулезом. При статистически недостоверном различии в интенсивности реакций на туберкулин и КАМ результаты симультанной пробы считают неопределенными, а животных неопределяемыми.

Недостаток данного метода состоит в его недостаточной точности, т.к. результаты симультанной пробы могут считаться неопределенными.

Технической задачей является повышение точности определения наличия туберкулеза в диагностируемой группе крупного рогатого скота.

Техническая задача достигается способом оценки эффективности туберкулиновых проб в диагностируемой группе крупного рогатого скота, включающим внутрикожное введение животным в правую часть шеи ППД-туберкулина в дозе 0,2 мл с одновременным введением в левую часть шеи комплекса атипичных микобактерий (КАМ), учет и оценку реакции на туберкулин и КАМ через 72 часа путем измерения кожной складки места инъекции, разделение животных на группы «не реагирующих на туберкулин и на КАМ», «реагирующих на КАМ(-)», «реагирующих на туберкулин (+)», и «реагирующих на туберкулин и КАМ (=)» и определение статистической достоверности различий реакций на туберкулин и КАМ, на основании которой делают вывод о заражении животных микобактериями туберкулеза или атипичными микобактериями, в котором согласно предлагаемому техническому решению дополнительно каждому животному диагностируемой группы независимо от его диагностического показателя «не реагирующий на туберкулин и на КАМ», «реагирующий на КАМ (-)», «реагирующий на туберкулин (+)» и «реагирующий на туберкулин и КАМ (=)» натощак проводят забор венозной крови с немедленным введением раствора гидрокортизона-ацетата в дозе 5 мл внутримышечно с последующим забором венозной крови через 3 и 6 часов для возможности определения показателей активности фермента сыворотки крови лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в динамике, определяют показатели активности ЛДГ в динамике, сопоставляют в динамике средние показатели ферментативной активности ЛДГ, определенные в группе животных, «не реагирующих на туберкулин и на КАМ», с показателями ферментативной активности каждого животного всех остальных групп, и при показателях увеличения активности ЛДГ через 3 часа ниже чем 8%, а через 6 часов ниже чем 17%, по сравнению со средними показателями ферментативной активности ЛДГ «не реагирующих на туберкулин и на КАМ» животных, животных, «реагирующих на КАМ (-)», «реагирующих на туберкулин (+)» и «реагирующих на туберкулин и КАМ (=)», относят к группе достоверно больных туберкулезом животных диагностируемой группы.

Заявленное изобретение отличается от прототипа тем, что дополнительно каждому животному диагностируемой группы независимо от его диагностического показателя «не реагирующий на туберкулин и на КАМ», «реагирующий на КАМ (-)», «реагирующий на туберкулин (+)» и «реагирующий на туберкулин и КАМ (=)» натощак проводят забор венозной крови с немедленным введением раствора гидрокортизона-ацетата в дозе 5 мл внутримышечно с последующим забором венозной крови через 3 и 6 часов для возможности определения показателей активности фермента сыворотки крови лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в динамике, определяют показатели активности ЛДГ в динамике, сопоставляют в динамике средние показатели ферментативной активности ЛДГ, определенные в группе животных «не реагирующих на туберкулин и на КАМ», с показателями ферментативной активности каждого животного всех остальных групп, и при показателях увеличения активности ЛДГ через 3 часа ниже чем 8%, а через 6 часов ниже чем 17%, по сравнению со средними показателями ферментативной активности ЛДГ «не реагирующих на туберкулин и на КАМ» животных, животных, «реагирующих на КАМ (-)», «реагирующих на туберкулин (+)», и «реагирующих на туберкулин и КАМ (=)», относят к группе достоверно больных туберкулезом животных диагностируемой группы.

На чертеже изображен график средних показателей в динамике активности ЛДГ в группе животных, «не реагирующих на туберкулин и на КАМ», и показателей активности ЛДГ в динамике животного, «реагирующего на КАМ (-)», животного, «реагирующего на туберкулин (+)», и животного, «реагирующего на туберкулин и КАМ (=)», диагностируемой группы в процентах (%).

Способ осуществляется следующим образом. Для дифференциальной диагностики туберкулеза животным проводят аллергическую симультанную пробу, состоящую из введения животным ППД-туберкулина (протеинпурифиеддериват) для млекопитающих и комплекса из атипичных микобактерий (КАМ). Непосредственно перед применением туберкулин (ППД) и КАМ растворяют согласно Наставлению по этим препаратам. Затем, после подготовки поля для инъекции, вводят одновременно оба аллергена соответственно с правой и левой стороны шеи крупного рогатого скота внутрикожно в дозе 0,2 мл. Учет и оценку реакции на туберкулин и КАМ проводят через 72 часа путем пальпации места инъекции и измерения кожной складки кутиметром определяют степень выраженности реакций на туберкулин в сравнении с реакцией на КАМ. Результаты исследования записывают в ведомость учета симультанной пробы. При этом более ярко выраженную реакцию на туберкулин по сравнению с КАМ обозначают знаком «+» (плюс), а животных называют «реагирующие на туберкулин (+)», менее выраженную реакцию на туберкулин - знаком «-» (минус), а животных называют «реагирующие на КАМ(-)», а одинаковые реакции на оба аллергена - знаком «=» (равенство), а животных называют «реагирующие на туберкулин и КАМ (=)». Животных, не реагирующих на туберкулин, при оценке результатов симультанной пробы не учитывают, независимо от наличия у них реакции на КАМ, и называют «не реагирующие на туберкулин и КАМ».

Затем дополнительно каждому животному диагностируемой группы независимо от его диагностического показателя «не реагирующий на туберкулин и на КАМ», «реагирующий на КАМ (-)», «реагирующий на туберкулин (+)» или «реагирующий на туберкулин и КАМ (=)» натощак проводят забор венозной крови. После этого каждому животному диагностируемой группы, после подготовки поля инъекции, вводят раствор гидрокортизона-ацетата в дозе 5 мл внутримышечно в предлопаточную область. Через 3 и 6 часов после введения гидрокортизона производят забор венозной крови. Из проб крови готовят сыворотку крови. Во всех трех пробах сыворотки крови каждого животного диагностируемой группы производят определение активности фермента сыворотки крови лактатдегидрогеназы (ЛДГ) общедоступным методом.

Из полученных результатов активности ЛДГ в группе животных, «не реагирующих на туберкулин и на КАМ», определяют три средних показателя: «натощак», «через 3 часа» и «через 6 часов» после введения раствора гидрокортизона-ацетата. Сопоставляют эти средние показатели активности ЛДГ, полученные в группе животных «не реагирующих на туберкулин и КАМ», с показателями активности ЛДГ «натощак», «через 3 часа», «через 6 часов» после введения раствора гидрокортизона-ацетата у каждого из всех остальных животных диагностируемой группы крупного рогатого скота.

При показателях увеличения активности ЛДГ через 3 часа ниже чем 8%, а через 6 часов ниже чем 17%, по сравнению со средними показателями ферментативной активности ЛДГ «не реагирующих на туберкулин и на КАМ» животных, животных, «реагирующих на КАМ (-)», «реагирующих на туберкулин (+)» или «реагирующих на туберкулин и КАМ (=)», относят к группе достоверно больных туберкулезом животных диагностируемой группы.

Пример выполнения предлагаемого способа.

В диагностируемой группе крупного рогатого скота проводят плановое аллергическое исследование с помощью симультанной пробы. После учета и оценки аллергических реакций животных разделили на четыре группы - «не реагирующих на туберкулин и на КАМ», «реагирующих на КАМ (-)», «реагирующих на туберкулин (+)» или «реагирующих на туберкулин и КАМ (=)». У всех животных диагностируемой группы после подготовки поля инъекции произвели забор венозной крови. Каждому животному диагностируемой группы ввели внутримышечно в предлопаточную область раствор гидрокортизона-ацетата в дозе 5 мл. Через 3 и 6 часов произвели забор венозной крови у каждого животного группы. Произвели определение активности ЛДГ у каждого животного группы в динамике: средние показатели активности ЛДГ у животных, «не реагирующих на туберкулин и на КАМ», составили натощак - 3,40 мккат/л, через 3 часа 3,68 мккат/л, через 6 часов 4,0 мккат/л. Следовательно, увеличение активности ЛДГ в динамике составило через 3 часа 8,2%, а через 6 часов 17,6%. Затем эти средние показатели сопоставляют с показателями активности ЛДГ каждого животного диагностируемой группы крупного рогатого скота. В качестве примеров сопоставления приведены показатели активности ЛДГ у четырех коров под номерами 321, 72, 58, 126.

Корова № 321, черно-пестрой породы, 3 лактации, при аллергическом исследовании выявлено: на месте введения туберкулина небольшая припухлость и увеличение кожной складки составило 4 мм, а на месте введения комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ) объемная воспалительная припухлость и увеличение кожной складки составило 6 мм. Т.о., корова № 321 относится к группе «реагирующих на КАМ (-)». Активность ЛДГ у коровы № 321 натощак составила 3,43 мккат/л, через 3 часа 3,60 мккат/л, а через 6 часов 3,77 мккат/л. Т.о., увеличение активности ЛДГ в динамике составило через 3 часа 5%, а через 6 часов 10%. Таким образом, согласно предлагаемому способу корова № 321, черно-пестрой породы, 3 лактации относится к достоверно больному туберкулезом животному диагностируемой группы.

Корова № 72, черно-пестрой породы, 4 лактации, при аллергическом исследовании выявлено: на месте введения туберкулина небольшая припухлость и увеличение кожной складки составило 3 мм, а на месте введения комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ) объемная воспалительная припухлость и увеличение кожной складки составило 7 мм. Т.о., корова № 72 относится к группе животных «реагирующих на КАМ (-)». Активность ЛДГ у коровы № 72 натощак составила 3,36 мккат/л, через 3 часа 3,78 мккат/л, а через 6 часов 4,03 мккат/л. Т.о., увеличение активности ЛДГ в динамике составило через 3 часа 12,5%, а через 6 часов 19,9%. Таким образом, согласно предлагаемому способу корова № 72, черно-пестрой породы, 4 лактации относится к не больному туберкулезом животному диагностируемой группы.

Корова № 58, симментальской породы, 4 лактации, при аллергическом исследовании выявлено: на месте введения туберкулина разлитая воспалительная припухлость и увеличение кожной складки составило 7 мм, а на месте введения комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ) увеличение кожной складки составило 3 мм. Т.о. корова № 58 относится к группе «реагирующих на туберкулин (+)». Активность ЛДГ у коровы №58 натощак составила 4,03 мккат/л, через 3 часа 3,70 мккат/л, а через 6 часов 3,64 мккат/л. Т.о. активность ЛДГ у данного животного в динамике снизилась через 3 часа на 8,2%, а через 6 часов на 9,7%. Таким образом, согласно предлагаемому способу корова № 58, симментальской породы, 4 лактации относится к достоверно больному туберкулезом животному диагностируемой группы.

Корова, № 126, черно-пестрой породы, 5 лактаций, при аллергическом исследовании выявлено: на месте введения туберкулина разлитая воспалительная припухлость и увеличение кожной складки составило 7 мм, а на месте введения комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ) разлитая воспалительная припухлость и увеличение кожной складки составило также 7 мм. Т.о. корова № 126 относится к группе «реагирующих на туберкулин и КАМ (=)». Активность ЛДГ у коровы № 126 натощак составила 4,01 мккат/л, через 3 часа 3,73 мккат/л, а через 6 часов 3,39 мккат/л. Следовательно, активность ЛДГ у данного животного в динамике снизилась через 3 часа на 7%, а через 6 часов на 15,5%. Таким образом, согласно предлагаемому способу корова № 126, черно-пестрой породы, 5 лактаций относится к достоверно больному туберкулезом животному диагностируемой группы.

В таблице 1 приведены сравнительные данные предлагаемого способа и прототипа по результатам диагностического убоя.

Таблица 1 Сравнительные данные предлагаемого способа и прототипа по результатам диагностического убоя Показатель Прототип Предлагаемый метод Точность определения наличия туберкулеза (%) 60-70% 75-85%

Как видно из таблицы, предлагаемый способ повышает точность определения наличия туберкулеза в диагностируемой группе крупного рогатого скота.

В таблице 2 «Сравнительная оценка диагностических и клинических показателей у животных» показано, почему именно при показателях увеличения активности ЛДГ ниже чем 8%, а через 6 часов ниже чем 17% животных относят к «достоверно больным животным».

Таблица 2
Сравнительная оценка диагностических и клинических показателей у животных Животные диагностируемой группы Изменение активности ЛДГ, % Патолого-анатомические показатели Через 3 часа Через 6 часов Средние показатели группы животных «не реагирующие на туберкулин и КАМ» Увеличение на 8% Увеличение на 17% Не обнаружены патолого-анатомические изменения характерные для туберкулеза Показатели коровы № 66, черно-пестрая порода, 3 лактация, по диагностическому показателю отнесена к «реагирующим на КАМ (-)» Увеличение на 8% Увеличение на 17% Не обнаружены патолого-анатомические изменения, характерные для туберкулеза Показатели коровы №53, симментальская порода, 3 лактация, по диагностическому показателю отнесена к «реагирующим на туберкулин (+)» Увеличение на 6,9% Увеличение на 15,9% Обнаружены увеличенные заглоточные лимфатические узлы, на разрезе они с участками казеозного некроза, что характерно для туберкулеза Показатели коровы №12, черно-пестрая порода, 4 лактация, по диагностическому показателю отнесена к «реагирующим на туберкулин и КАМ (=)» Увеличение на 6,3% Увеличение на 15,1% Обнаружены увеличенные бронхиальные лимфатические узлы с участками казеозного некроза, что характерно для туберкулеза

Изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает внутрикожное введение животным в правую часть шеи ППД-туберкулина в дозе 0,2 мл с одновременным введением в левую часть шеи комплекса атипичных микобактерий (КАМ), учет и оценку реакции на туберкулин и КАМ через 72 часа путем измерения кожной складки места инъекции, разделение животных на группы «не реагирующих на туберкулин и на КАМ», «реагирующих на КАМ(-)», «реагирующих на туберкулин (+)» и «реагирующих на туберкулин и КАМ (=)» и определение статистической достоверности различий реакций на туберкулин и КАМ, на основании которой делают вывод о заражении животных микобактериями туберкулеза или атипичными микобактериями. Дополнительно каждому животному диагностируемой группы независимо от его диагностического показателя «не реагирующий на туберкулин и на КАМ», «реагирующий на КАМ (-)», «реагирующий на туберкулин (+)» и «реагирующий на туберкулин и КАМ (=)» натощак проводят забор венозной крови с немедленным введением раствора гидрокортизона-ацетата в дозе 5 мл внутримышечно с последующим забором венозной крови через 3 и 6 часов для возможности определения показателей активности фермента сыворотки крови лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в динамике. После чего определяют показатели активности ЛДГ в динамике, сопоставляют в динамике средние показатели ферментативной активности ЛДГ, определенные в группе животных «не реагирующих на туберкулин и на КАМ», с показателями ферментативной активности каждого животного всех остальных групп. При показателях увеличения активности ЛДГ через 3 часа ниже чем 8%, а через 6 часов ниже чем 17%, по сравнению со средними показателями ферментативной активности ЛДГ «не реагирующих на туберкулин и на КАМ» животных, животных, «реагирующих на КАМ (-)», «реагирующих на туберкулин (+)» и «реагирующих на туберкулин и КАМ (=)», относят к группе достоверно больных туберкулезом животных диагностируемой группы. Способ позволяет повысить точность диагностики туберкулеза. 2 табл., 1 ил.

Способ оценки эффективности туберкулиновых проб в диагностируемой группе крупного рогатого скота, включающий внутрикожное введение животным в правую часть шеи ППД-туберкулина в дозе 0,2 мл с одновременным введением в левую часть шеи комплекса атипичных микобактерий (КАМ), учет и оценку реакции на туберкулин и КАМ через 72 ч путем измерения кожной складки места инъекции, разделение животных на группы «не реагирующих на туберкулин и на КАМ», «реагирующих на КАМ(-)», «реагирующих на туберкулин (+)», и «реагирующих на туберкулин и КАМ (=)» и определение статистической достоверности различий реакций на туберкулин и КАМ, на основании которой делают вывод о заражении животных микобактериями туберкулеза или атипичными микобактериями, отличающийся тем, что дополнительно каждому животному диагностируемой группы независимо от его диагностического показателя «не реагирующий на туберкулин и на КАМ», «реагирующий на КАМ (-)», «реагирующий на туберкулин (+)», и «реагирующий на туберкулин и КАМ (=)» натощак проводят забор венозной крови с немедленным введением раствора гидрокортизона-ацетата в дозе 5 мл внутримышечно с последующим забором венозной крови через 3 и 6 ч для возможности определения показателей активности фермента сыворотки крови лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в динамике, определяют показатели активности ЛДГ в динамике, сопоставляют в динамике средние показатели ферментативной активности ЛДГ, определенные в группе животных «не реагирующих на туберкулин и на КАМ», с показателями ферментативной активности каждого животного всех остальных групп, и при показателях увеличения активности ЛДГ через 3 ч ниже чем 8%, а через 6 ч ниже чем 17%, по сравнению со средними показателями ферментативной активности ЛДГ «не реагирующих на туберкулин и на КАМ» животных, животных «реагирующих на КАМ (-)», «реагирующих на туберкулин (+)», и «реагирующих на туберкулин и КАМ (=)» относят к группе достоверно больных туберкулезом животных диагностируемой группы.