СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ ГЛАДИОЛУСА IN VITRO Российский патент 2006 года по МПК A01H4/00 A01H5/00 

Изобретение относится к области цветоводства и может быть использовано для микроразмножения и оздоровления растений гладиолуса in vitro.

Известен способ микроразмножения гладиолуса, включающий вычленение экспланта, посадку его на питательную среду, культивирование, разделение на сегменты (SU №1695854, МПК 7 А 01 Н 4/00, 07.12.1991 г.).

Недостатком данного способа является невысокий коэффициент размножения на разных этапах культивирования.

Технический результат заключается в повышении выхода размножаемого материала за счет увеличения интенсивности побегообразования, улучшения роста и развития эксплантов при положительном влиянии оптимальной концентрации минерального и органического питания регуляторов роста.

Сущность изобретения заключается в том, что в способе размножения гладиолуса in vitro, включающем вычленение эксплантов, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, культивирование, разделение их на сегменты, после вычленения экспланты высаживают на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга с 1/4 концентрации макро - и микросолей при постоянном освещении люминесцентными лампами с интенсивностью 3000-3500 лк при температуре 22-24°С. Затем размноженные экспланты переносят на агаризованную питательную среду с 1/2 концентрации солей по прописи Мурасиге-Скуга, которую дополняют 30-40 г/л сахарозы и регуляторами роста 0,5-1,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5-1,0 мг/л α-нафтилуксусной кислоты, кроме того, параллельно культивирование проводят также через каллусогенез на агаризованной питательной среде, дополненной 0,5-1,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 1,0-1,5 мг/л 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты, с последующим укоренением на агаризованной питатальной среде с половинной концентрацией солей по прописи Мурасиге-Скуга, дополненной 0,5-1,5 мг/л α-нафтилуксусной кислоты, 30-40 г/л сахарозы и 4-5 г/л активированного угля.

Добавление сахарозы в питательную среду более 40 г/л снижает рост и развитие эксплантов.

При 1/4 концентрации макро- и микросолей и интенсивности освещения 3000-3500 лк при температуре 22-24°С наблюдается наибольшее образование побегов эксплантов гладиолусов (табл.1).

Добавление в питательную среду регуляторов роста с концентрациями 0,5-1,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5-1,0 мг/л α-нафтилуксусной кислоты, 1,0-1,5 мг/л 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты наиболее оптимально для роста эксплантов гладиолусов и не вызывает токсического действия (табл.2, 3).

Способ осуществляют следующим образом.

В качестве эксплантов берут пазушные и апикальные почки гладиолуса, стерилизуют и в стерильных условиях высаживают в колбы на питательную среду Мурасиге-Скуга с рН 5,8-5,9, содержащую 7,0-7,5 г/л агара. Для экспериментальной проверки предлагаемого способа на этапе введения в культуру варьируют концентрацию макро- и микросолей в питательной среде (табл.1).

Таблица 1Концентрация минеральных солей по прописи Мурасиге-Скуга(часть)Побегообразование, штук/эксплант13,7±0,31/23,3±0,31/44,6±0,81/82,5±0,1

Культивирование проводят при постоянном освещении белыми люминесцентными лампами с интенсивностью 3000-3500 лк при температуре 22-24°С. В течение 3-4 недель культивирования на среде с 1/4 концентрации макро- и микросолей по прописи Мурасиге-Скуга образуется максимальное число побегов, которые отделяют от почки и пересаживают на питательную среду Мурасиге-Скуга для последующего микроразмножения. На этапе собственно микроразмножения субкультивирование побегов проводят на среде, содержащей 1/2 концентрации солей по прописи Мурасиге-Скуга, дополненной 30-40 г/л сахарозы и регуляторами роста: 0,5-1,5 мг/л 6-бензиламинопурином и 0,5-1,5 мг/л α-нафтилуксусной кислотой (табл.2).

Таблица 2ПобегообразованиеКонцентрация, мг/л6-бензиламинопурин0,51,01,5α-нафтилуксусная кислота0,51,01,50,51,01,50,51,01,5Количество, штук14,2±0,512,5±0,58,3±0,25,5±0,14,3±0,43,5±0,32,1±0,22,0±0,21,5±0,3

Наряду с прямой регенерацией растений из первичного экспланта на данном этапе процесса клонального микроразмножения регенерацию растений проводят также через каллусогенез, для чего в питательную среду добавляют 0,5-1,5 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5-1,5 мг/л 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты (табл.3).

Таблица 3ПобегообразованиеКонцентрация, мг/л6-бензиламинопурин0,51,01,52,4-дихлорфеноксиуксусная кислота0,51,01,50,51,01,50,51,01,5Количество, штук15,3±0,317,5±0,415,6±0,612,4±0,512,6±0,69,4±0,2---

Укоренение проводят на питательной среде Мурасиге-Скуга с 1/2 концентрации минеральных солей, дополненной 30-40 г/л сахарозы, 0,5-1,5 мг/л α-нафтилуксусной кислоты, 4-5 г/л активированного угля. После укоренения размноженные растения переносят в почву и выращивают обычным способом.

В результате использования данного способа клонального микроразмножения гладиолуса величина побегообразования на этапе введения в культуру in vitro составила 4,6 побега/эксплант, на этапе собственно микроразмножения - от 14,2 (через пассирование пазушных побегов) до 17,5 побегов/эксплант (через каллусогенез). Процент укоренения составил 100%, что приводит к высокой жизнеспособности растений-регенерантов при последующей высадке в почву.

Изобретение относится к области садоводства и может быть использовано для микроразмножения и оздоровления растений гладиолуса in vitro. Способ включает вычленение эксплантов, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, культивирование, разделение их на сегменты. После вычленения экспланты высаживают на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, с 1/4 концентрации макро- и микросолей при постоянном освещении люминесцентными лампами с интенсивностью 3000-3500 лк при температуре 22-24°С. Затем размноженные экспланты переносят на агаризованную питательную среду с 1/2 концентрации солей по прописи Мурасиге-Скуга, которую дополняют 30-40 г/л сахарозы и регуляторами роста 0,5-1,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5-1,0 мг/л α-нафтилуксусной кислоты. Кроме того, параллельно культивирование проводят также через каллусогенез на агаризованной питательной среде, дополненной 0,5-1,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 1,0-1,5 мг/л 2,4-дихлорфеноксиуксуной кислоты, с последующим укоренением на агаризованной питательной среде с половинной концентрацией солей по прописи Мурасиге-Скуга, дополненной 0,5-1,5 мг/л α-нафтилуксусной кислоты, 30-40 г/л сахарозы и 4-5 г/л активированного угля. Изобретение позволяет повысить выход размножаемого материала за счет увеличения интенсивности побегообразования, улучшения роста и развития эксплантов. 3 табл.

Способ размножения гладиолуса in vitro, включающий вычленение эксплантов, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, культивирование, разделение их на сегменты, отличающийся тем, что после вычленения экспланты высаживают на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, с 1/4 концентрации макро- и микросолей при постоянном освещении люминесцентными лампами с интенсивностью 3000-3500 лк при температуре 22-24°С, затем размноженные экспланты переносят на агаризованную питательную среду с 1/2 концентрации солей по прописи Мурасиге-Скуга, которую дополняют 30-40 г/л сахарозы и регуляторами роста 0,5-1,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5-1,0 мг/л α-нафтилуксусной кислоты, кроме того, параллельно культивирование проводят также через каллусогенез на агаризованной питательной среде, дополненной 0,5-1,0 мг/л 6-бензиламинопурина и 1,0-1,5 мг/л 2,4-дихлорфеноксиуксуной кислоты, с последующим укоренением на агаризованной питательной среде с половинной концентрацией солей по прописи Мурасиге-Скуга, дополненной 0,5-1,5 мг/л α-нафтилуксусной кислоты, 30-40 г/л сахарозы и 4-5 г/л активированного угля.