СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАЗВИТИЯ ЖЕЛЧНЫХ КАМНЕЙ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ХОЛЕЦИСТИТОМ С ПОМОЩЬЮ ИССЛЕДОВАНИЯ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ ЖЕЛЧИ Российский патент 2006 года по МПК G01N33/487 G01N21/76 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано для выявления у больных хроническими холециститами предрасполагающих факторов образования камней в желчном пузыре.

Наиболее известные способы исследования желчи: фракционное дуоденальное зондирование, определение плотности желчи, бактериологический посев, микроскопическое и биохимическое исследования (Клиническая лабораторная диагностика. В.И. Ослов, А.Р. Садыкова, Р.А. Абдулханов - 2-е издание. - М.: МЕДпресс-информ, 2002). Прототипом является биохимическое исследование желчи (там же, с.60).

Известно, что в патогенезе камнеобразования основную роль играет одномоментное наличие трех основных патологических процессов:

- пересыщение желчи холестерином,

- усиление пего нуклеации,

- снижение сократительной способности желчного пузыря (Особенности лечения больных с желчно-каменной болезнью, осложненным хроническим панкреатитом. Стрижелецкий В.В., Михайлов А.П., Мехтиев С.Н., Александров А.И., Кравчук Ю.А., С.-Пб. - 2004).

Недостатками вышеперечисленных методов исследования желчи является неполное количество данных для выявления у больных предрасполагающих факторов камнеобразования в желчи. Также в литературе недостаточно данных, которые объясняли причину нуклеации холестерина.

Техническим результатом является повышение точности выявления предрасполагающих факторов камнеобразования, упрощение и сокращение времени исследования.

Технический результат достигается тем, что проводят люминол-зависимую, железо-индуцированную хемилюминесценцию модельной системы на цитрат-фосфатном буфере, определяют светосумму свечения, затем проводят повторную регистрацию хемилюминесценции модельной системы с добавлением исследуемой желчи, взятой у больного с хроническим холециститом в стадии ремиссии, и при увеличении показателя светосуммы на 111-127% в сравнении с модельной системой прогнозируют развитие камней в желчном пузыре.

В основе метода хемилюминесценции лежит обстоятельство, что при взаимодействии свободных радикалов друг с другом выделяется энергия, которая может испускаться в виде фотонов и интенсивность такого свечения прямо пропорциональна скорости реакции, в которой участвуют свободные радикалы, и, следовательно, показывает изменения их концентрации в ходе изучаемого процесса.

Под наблюдением состояла группа больных в количестве 50 человек, из них:

1 группа: 20 человек - с хроническим холециститом (12 женщин, 8 мужчин), при обследовании которых в течение 5 лет признаков камнеобразования в желчном пузыре не выявлено, возраст 38-65 лет;

2 группа: 15 человек - с хроническим калькулезным холециститом (9 женщин, 6 мужчин), возраст 35-66 лет;

3 группа: 15 человек - с хроническим холециститом, у которых в течение последующих 5 лет образовались камни в желчном пузыре (10 женщин, 5 мужчин), возраст 38-57 лет.

Все группы больных были подобраны так, что у них отсутствовали признаки воспаления и холестаза. Лейкоциты крови не превышали 9·10⁹ л. Всем больным проводилось ультразвуковое исследование органов брюшной полости (в частности, гепатобилиарной зоны).

На фигуре 1 изображены графики хемилюминесценции: 1 - модельной системы, 2 - модельной системы с добавлением желчи у больного 1 группы.

На фигуре 2 изображены графики хемилюминесценции: 1 - модельной системы, 2 - модельной системы с добавлением желчи у больного 2 группы.

На фигуре 3 изображены графики хемилюминесценции: 1 - модельной системы, 2 - модельной системы с добавлением желчи у больного 3 группы до образования камней в желчном пузыре (при хроническом холецистите).

На фигуре 4 изображены графики хемилюминесценции: 1 - модельной системы, 2 - модельной системы с добавлением желчи у больного 3 группы после образования камней в желчном пузыре. (при образовании хронического калькулезного холецистита).

Способ осуществляется следующим образом.

Желчь берут в количестве 2 мл в пластиковую колбу. У больных 1 группы при дуоденальном зондировании - пузырная желчь. У больных 2 группы во время плановой операции из желчного пузыря. У больного 3 группы желчь берут при дуоденальном зондировании (пузырная желчь) до образования камней в желчном пузыре и у них же после образования камней в желчном пузыре.

Вначале исследуют приготовленную модельную систему в количестве 20 мл на аппарате «ХЕМИЛЮМИНОМЕР 003». Затем исследуют модельную систему (20 мл) на том же аппарате с добавлением к ней 0.05 мл исследуемой желчи. Образование активных форм кислорода инициируют добавлением 2 мл подкисленного раствора сернокислого железа (FeSO₄·7Н₂O) в обоих случаях. Каждое исследование проводят в режиме 5 минут с включенной мешалкой. Результаты в обоих случаях фиксируются в виде графика. Затем вышеперечисленные полученные графики сравниваются. Показатель исследования - светосумма, оценивают в условных единицах·мин.

Результаты исследования оценивают по снижению либо увеличению светосуммы в сравнении с показателями первоначальной модельной системы.

Состав модельной системы: на 1 литр дистиллированной воды 2,72 г КН₂PO₄+7,82 г KCl, затем проводят титрование насыщенным раствором КОН до РН 7,5 ед. Затем добавляют 1,5 г цитрата натрия (C₆H₈O₇Na₃·5.5 Н₂O) и добавляют 2 мл рабочего раствора люминола. (Рабочий раствор люминола готовят следующим образом: 0.5 мл маточного раствора люминола растворяют в 500 мл физиологического раствора.)

Образование активных форм кислорода инициируется введением 2 мл 50 мМ раствора сернокислого железа. (Раствор готовится следующим образом: 1.4 г сернокислого железа растворить в 100 мл дистиллированной воды, подкисленной 0.1 мл 0.1 н. HCl.)

Выявлено следующее: у больных 1-й группы, при добавлении 0,05 мл желчи к модельной системе показатели светосуммы уменьшаются на 37%±5% в сравнении с показателями первоначальной модельной системы. У больных с такими показателями в течение последующих 5 лет признаков образования камней в желчном пузыре не обнаружено.

У больных 2-й и 3-й группы, при добавлении 0.05 мл желчи к модельной системе показатели светосуммы увеличивались на 119%±8% в сравнении с первоначальными модельными системами.

У больных 3-й группы с такими показателями в течение 5 лет образовывались камни в желчном пузыре.

Таким образом, при увеличении показателя светосуммы в исследуемой модельной системе с добавлением желчи на 111-127% в сравнении с первоначальной модельной системой прогнозируют камнеобразование в желчном пузыре у больных с хроническим холециститом.

У больных 1-й группы желчь обладает антиоксидантными свойствами. У больных 2-й и 3-й групп в желчи находится избыточное кличество свободных радикалов как один из факторов камнеобразования в желчном пузыре.

Клинический пример 1: больная Нуриманова Люция Габдулловна 1950 г.р. В 2000 г. выставлен диагноз: Хронический холецистит. В 2000 г. - в стадии ремиссии данного заболевания берут желчь из желчного пузыря с помощью дуоденального зондирования. Желчь в количестве 2 мл доставляют в пластмассовой колбе в термоконтейнере в лабораторию через 45 мин.

Вначале на аппарате «ХЕМИЛЮМИНОМЕР 003» исследуют модельную систему в количестве 20 мл. Аппарат работает в режиме 5 минут с включенной мешалкой. Для инициации свободных форм кислорода добавляют раствор подкисленного железа в количестве 2 мл. Полученный результат: Светосумма - 18.63 У.е.·мин.

При добавлении в 20 мл первоначальной модельной системы исследуемую желчь из желчного пузыря в количестве 0.05 мл и добавлении 2 мл раствора подкисленного железа для инициации активных форм кислорода получен результат: светосумма - 40.96 У.е.·мин.

Вывод: Светосумма исследуемой желчи увеличилась на 119% по сравнению с модельной системой (см. фигура 3).

У данной больной в 2005 году при обследовании выявлен диагноз: Хронический калькулезный холецистит. Данная патология снижает работоспособность и качество жизни больной. В этом же году больная прооперирована. Проведена лапароскопическая холецистэктомия в плановом порядке. В желчном пузыре обнаружены при ревизии камни округлой и полигональной формы в диаметре до 0.8 см в количестве 3. Интраоперационно берут пузырную желчь в количестве 2 мл и доставляют в пластмассовой колбе в термоконтейнере в лабораторию через 45 мин.

В начале на аппарате «ХЕМИЛЮМИНОМЕР 003» исследуют модельную систему в количестве 20 мл. Аппарат работает в режиме 5 минут с включенной мешалкой. Для инициации свободных форм кислорода добавляют раствор подкисленного железа в количестве 2 мл. Полученный результат: Светосумма - 18.63 У.е.·мин.

При добавлении в 20 мл первоначальной модельной системы исследуемую желчь из желчного пузыря в количестве 0.05 мл и добавлении 2 мл раствора подкисленного железа для инициации активных форм кислорода получен результат: светосумма - 41.50 У.е.·мин.

Вывод: Светосумма исследуемой желчи увеличилась на 122% (см. фигура 4). Т.е. светосумма желчи у данной больной до и после образования камней в желчном пузыре выше модельной системы и свободные радикалы находятся в избытке как предрасполагающий фактор инициации камнеобразования.

Больная выписана из хирургического стационара через 10 дней в удовлетворительном состоянии.

Клинический пример 2: Больная Розова Татьяна Николаевна 1954 г.р. В 1999 г. Выставлен диагноз: Хронический холецистит. В 1999 г. - в стадии ремиссии данного заболевания берут желчь из желчного пузыря с помощью дуоденального зондирования. Желчь в количестве 2 мл доставляется в пластмассовой колбе в термоконтейнере в лабораторию через 45 мин.

Вначале на аппарате «ХЕМИЛЮМИНОМЕР 003» исследуют модельную систему в количестве 20 мл. Аппарат работает в режиме 5 минут с включенной мешалкой. Для инициации свободных форм кислорода добавляют раствор подкисленного железа в количестве 2 мл. Полученный результат: светосумма - 27.6 У.е.·мин.

При добавлении в 20 мл первоначальной модельной системы исследуемую желчь из желчного пузыря в количестве 0.05 мл и добавлении 2 мл раствора подкисленного железа для инициации активных форм кислорода получен результат: светосумма - 17.46 У.е.·мин.

Вывод: Светосумма исследуемой желчи уменьшается на 37% по сравнению с модельной системой (см. фигура 1). Т.е. желчь обладает антиоксидантными свойствами.

При обследовании данной больной в последующие 5 лет камнеобразования в желчном пузыре не выявлено.

Предлагаемое изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления у больных хроническими холециститами предрасполагающих факторов образования камней в желчном пузыре. Сущность способа: исследуют люминол-зависимую железо-индуцированную хемилюминесценцию модельной системы на цитрат-фосфатном буфере, определяют светосумму свечения, затем проводят повторную регистрацию хемилюминесценции модельной системы с добавлением желчи обследуемого больного хроническим холециститом в стадии ремиссии. При увеличении показателя светосуммы на 111-127% по сравнению с модельной системой прогнозируют развитие камней в желчном пузыре. Использование способа позволяет повысить точность прогнозирования, упрощает и сокращает время исследования. 4 ил.

Способ прогнозирования развития желчных камней у больных с хроническим холециститом путем исследования желчи, отличающийся тем, что проводят люминолзависимую железо-индуцированную хемилюминесценцию модельной системы на цитрат-фосфатном буфере, определяют светосумму свечения, затем проводят повторную регистрацию хемилюминесценции модельной системы с добавлением исследуемой желчи у больных с хроническим холециститом в стадии ремиссии и при увеличении показателя светосуммы на 111%-127% по сравнению с модельной системой прогнозируют развитие камней в желчном пузыре.