СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОСТРОЙ ИНТОКСИКАЦИИ Российский патент 2007 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторным методам исследования, и может быть использовано для диагностики острой токсимии различной этиологии.

Известен способ диагностики эндогенной интоксикации, который по морфологической картине сыворотки крови позволяет определить маркер эндогенной интоксикации, представленный в виде «токсических бляшек», размещенных на поле высушенной капли сыворотки крови. (Шабалин В.Н., Шатохина С.Н. Морфология биологических жидкостей человека. - М., Изд. Хризостон, 2001, - с.93, 118, 122).

В данном способе использован метод клиновидной дегидратации, обеспечивающий переведение сыворотки крови в твердую фазу, что позволяет в ранние сроки определить системную организацию сыворотки крови и выявить маркер, специфический для хронической интоксикации. Однако выявить острую эндогенную интоксикацию данным способом не представляется возможным.

Клинические проявления эндогенной токсемии, особенно в острый период, хорошо известны и характеризуются выраженным нарушением жизненных функций организма. Однако маркера острой токсемии различной этиологии до сих пор не выявлено.

Установлено, что при экстремальных и патологических состояниях характер взаимодействия различных компонентов биологических жидкостей на молекулярном уровне значительно изменяется. Эндотоксины, поступающие в кровь, способны вступать в легкообратимые связи со встроенными в мембраны молекулами, изменяя их проницаемость, структуру, так, в частности, известно, что мембраны эритроцитов связывают эндотоксины плазмы крови.

В соответствии с этим в качестве биологической жидкости для исследования был выбран эритроцитарный гемолизат (ЭГ), состоящий из внутриклеточной жидкости эритроцитов и их лизированных мембран.

Известен способ диагностики острой эндогенной интоксикации, включающий приготовление гемолизата эритроцитов путем разведения отмытых эритроцитов в дистиллированной воде и его исследование (пат. РФ №2217753, кл. G 01 N 33/49, 2002 г.).

Недостатками данного способа являются:

- ограниченные функциональные возможности способа, обусловленные тем, что с его помощью определяют эндогенную интоксикацию только при ожогах;

- необходимость использования дорогостоящих технических средств, сложных химических реактивов и математических расчетов для определения эндогенной интоксикации при ожогах.

Кроме того, данный способ предполагает введение животного в наркоз перед нанесением травмы (ожога), поэтому может быть использован только в эксперименте.

В соответствии с этим поставлена задача, направленная на расширение функциональных возможностей способа за счет определения в ранние сроки маркера острой интоксикации различной этиологии, что позволит совместно с необходимым комплексом интенсивной терапии дополнительно включить необходимый комплекс детоксикации, что часто является определяющим для больных острой токсемией различной этиологии (шоковом состоянии, коматозном состоянии, обусловленном острой наркотической интоксикацией).

Для решения этой задачи в способе диагностики острой эндогенной интоксикации, включающем приготовление гемолизата эритроцитов путем разведения отмытых эритроцитов в дистиллированной воде и его исследование, предложено разведение осуществлять в соотношении 1:1, выдерживать в течение 1-2 часа при температуре 20-25°С, после чего наносить на поверхность предметного стекла в количестве 0,01-0,03 мл, высушивать в течение 24-27 часов при температуре 18-30°С и относительной влажности окружающей среды 55-60%, проводить микроскопическое исследование и при обнаружении в пространстве трещин центральной и периферической зон высушенной капли аморфных субстанций диагностировать острую интоксикацию.

На фиг.1 изображена фация эритроцитарного гемолизата больного без проявления шока.

На фиг 2 - увеличенный фрагмент фиг.1

На фиг.3 изображена фация эритроцитарного гемолизата больного с травматическим шоком.

На фиг.4 - увеличенный фрагмент фиг.3 с указанием стрелкой аморфной субстанции в пространстве трещины высушенной капли.

На фиг.5 - увеличенный фрагмент фации наркологического больного с указанием стрелкой аморфной субстанции в пространстве трещины высущенной капли.

На фиг.6 - увеличенный фрагмент фации наркологического больного с указанием стрелкой аморфной субстанции в пространстве трещины высушенной капли.

Способ осуществляют следующим образом.

Отмытые эритроциты, полученные из нестабилизированной венозной и артериальной крови периферических отделов сосудистого русла, подвергают заданной осмотической дилюции дистиллированной водой в соотношении 1:1, полученный раствор выдерживают в течение 1-2 часа при температуре 20-25°С, что необходимо для деструкции мембран эритроцитов. Готовый стандартный эритроцитарный гемолизат (абсолютно однородный, ярко-рубиново-красного цвета, не образующий никаких взвешенных частиц и включений при интенсивном встряхивании) исследуют методом клиновидной дегидратации. При этом эритроцитарный гемолизат в количестве 0,01-0,03 мл, в виде капли, наносят на поверхность предметного стекла, высушивают в течение 24-27 часов при температуре 18-30°С и относительной влажности окружающей среды 55-60%, затем проводят микроскопическое исследование с помощью стереомикроскопа MZ-12 «Leica» (Германия) и при обнаружении в пространстве трещин центральной и периферической зон высушенной капли аморфных субстанций диагностируют острую интоксикацию.

Конкретный пример реализации способа.

Больной О. 53 года, ист. болезни Х-8295, поступил в реанимационное отделение с диагнозом: закрытые переломы 4, 5, 6. 7, 8 ребер слева. Закрытый перелом правой ключицы. Открытый перелом левой плечевой кости, костей левого голени. Закрытый осколочный перелом костей правого голени в нижней трети со смещением. Травматический шок.

В анализах крови отмечается: стрессоная глюкозурия, повышение СОЭ и креатина. Уровень гемоглобина, эритроцитов, лимфоцитов и содержание общего белка определены на уровне нижней границы нормы. Проведено исследование предложенным способом. При микроскопии установлено: фация эритроцитарного гемолизата представлена неустойчивым белковосолевым типом системной организации и характеризуется наличием широких радиальных, аркадных или трехлучевых трещин. Во внутреннем пространстве почти всех трещин центральной зоны определена аморфная субстанция. Проведен рентгеноспектральный микроанализ данной субстанции. Установлено, что она имеет органическое происхождение. В реанимационном отделении начата активная противошоковая терапия и проведение лечебных мероприятий, направленных на нормализацию гомеостаза. В результате проведенных лечебных мероприятий общее состояние больного стабилизировалось. При микроскопической оценке фации эритроцитарного гемолизата отмечено, что тип системной организации приобретает устойчивый характер, а количество аморфной субстанции в трещинах значительно уменьшается. Данное обстоятельство является объективным свидетельством снижения эндогенной интоксикации.

Нами обследовано 129 больных, госпитализированных в состоянии шока различной этиологии. Из них 49 больных (37,98%) были госпитализированы в состоянии травматического шока; 9 больных (6,97%) были госпитализированы в коматозном состоянии, обусловленном острой наркотической интоксикацией; 19 больных (14,72%) госпитализированы в состоянии алкогольной комы (острая алкогольная интоксикация). Во всех исследуемых образцах у больных данной категории, независимо от генеза шока, в пространстве трещин центральной и периферической зон высушенной капли обнаружена аморфная субстанция (фиг.3, 4, 5, 6).

При исследовании морфологической картины фаций ЭГ больных с травматической болезнью без проявлений шока и здоровых лиц установлено отсутствие каких-либо включений в трещинах зон высушенной капли (фиг.1, 2).

Следовательно, аморфная субстанция внутри трещин центральной и периферической зон высушенной капли может служить маркером острой интоксикации различной этиологии.

Выявлен органический характер данной субстанции методом рентгеноспектрального микроанализа (РСМА). Морфологию изучаемого объекта исследовали в обратнорассеяных электронах. Среднее содержание и соотношение химических элементов в патологическом образовании внутри трещин, измеряемое в масс-процентах С(49,2), N(2,76), О(13,04), Cl(0,82), Na(0,27), S(0,23), K(0,91), Fe(0,76), свидетельствовало о том, что эта субстанция образована в основном органическим веществом с включениями минеральных компонентов.

Установлено, что патологическая субстанция в пространстве трещин фаций ЭГ сохраняется в течение длительного времени, но по мере проведения противошоковой дезинтоксикационной терапии и лечебных мероприятий, направленных на нормализацию гомеостаза, количество трещин с патологической субстанцией значительно уменьшается.

Таким образом, при изучении морфологической картины внутриклеточной жидкости - эритроцитарного гемолизата - у больных с острой токсемией различной этиологии впервые обнаружен маркер острой интоксикации, представленный патологической субстанцией органического происхождения, локализованной в трещинах фаций.

Использование данного способа позволит в ранние сроки установить наличие маркера острой токсемии различной этиологии и определить лечение, обеспечивающее ускорение выздоровления.

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторным методам исследования. Способ диагностики острой эндогенной интоксикации включает приготовление гемолизата эритроцитов путем разведения отмытых эритроцитов в дистиллированной воде в соотношении 1:1, который выдерживают в течение 1-2 часа при температуре 20-25°С, после чего наносят на поверхность предметного стекла в количестве 0,01-0,03 мл, высушивают в течение 24-27 часов при температуре 18-30°С и относительной влажности окружающей среды 55-60%. Проводят микроскопическое исследование и при обнаружении в пространстве трещин центральной и периферической зон высушенной капли аморфных субстанций диагностируют острую интоксикацию. Использование данного способа позволяет в ранние сроки установить наличие маркера острой токсемии различной этиологии и определить лечение, обеспечивающее ускорение выздоровления. 6 ил.

Способ диагностики острой эндогенной интоксикации, включающий приготовление гемолизата эритроцитов путем разведения отмытых эритроцитов в дистиллированной воде и его исследование, отличающийся тем, что разведение осуществляют в соотношении 1:1, выдерживают в течении 1-2 ч при температуре 20-25°С, после чего наносят на поверхность предметного стекла в количестве 0,01-0,03 мл, высушивают в течение 24-27 ч при температуре 18-30°С и относительной влажности окружающей среды 55-60%, проводят микроскопическое исследование и при обнаружении в пространстве трещин центральной и периферической зон высушенной капли аморфных субстанций диагностируют острую интоксикацию.