СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АКТИВНОСТИ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА ПРИ САРКОИДОЗЕ ЛЕГКИХ Российский патент 2007 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, в частности к пульмонологии, и может быть использовано для диагностики активности воспалительного процесса при саркоидозе легких.

В настоящее время многие исследования посвящены поиску иммунологических маркеров активности саркоидоза легких.

Известны исследования, по результатам которых авторы предлагают для диагностики активности воспалительного процесса при саркоидозе легких использовать положительные корреляции между числом Т-лимфоцитов и их субпопуляций в материалах биопсии и выраженностью изменения показателей функции дыхания у больных саркоидозом легких (Kieszko R., Krawchyk P., Michnar М., Chocholska S., Milanowski J. The Yield of Endobronchial Biopsy in Pulmonary Sarcoidosis: Connection between Spiromeyric Impairment and Lymphocyte Subpopulations in Bronchoalveolar Lavage Fluid. Respiration. 2004. - 71 (1):72-76).

Известны исследования, выявившие положительную корреляцию между общим содержанием лимфоцитов и числом CD 4+ Т-лимфоцитов-хелперов 1 типа в жидкости бронхоальвеолярного лаважа у больных саркоидозом легких (Katchar К., Eklund A., Grunewald J. Expression of Th1 markers by lung accumulated Т cells in pulmonary sarcoidosis. J. of Internal Medicine. 2003. - 254 (6):564).

Известны исследования по определению уровней цитокинов (интерлейкина-12 и интерферона - гамма) в сыворотке крови больных саркоидозом легких с различными рентгенологическими стадиями (Shigenara R., Shijubo N., Ohmichi M., Kamigushi К, Takahashi R., Morita - Ichimura S., Ohchi T., Tatsuno Т., Hiraga Y., Abe S., Sato N. Increased circulating interleukine - 12 (IL-12) p40 in pulmonary sarcoidosis. Clinical and Experimental Immunology, 2002. - 135: 152-157). На основании сопоставления уровней цитокинов с показателями сцинтиграфии легочной ткани больных саркоидозом сделан вывод о том, что сывороточные уровни цитокинов, характеризующие ответ Т-хелперов 1 типа (IL-12 и IFN-γ), могут служить маркерами активности воспалительного процесса при саркоидозе легких.

Данные исследования не позволяют провести комплексную диагностику активности воспалительного процесса при саркоидозе легких, так как не учитывают активность Т-лимфоцитов-хелперов 2 типа.

Задачей изобретения является создание способа диагностики активности воспалительного процесса при саркоидозе легких, позволяющего провести комплексную диагностику активности воспалительного процесса за счет оценки активности Т-хелперов 1 типа (уровень интерферона-гамма) и Т-хелперов 2 типа (уровень интерлейкина-10).

Поставленная задача решается тем, что в известном способе диагностики активности воспалительного процесса при саркоидозе легких, включающем определение уровней цитокинов в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа, согласно изобретению определяют концентрацию интерферона-гамма и интерлейкина-10, рассчитывают их соотношение (К), и при значении 4,7<К<6.8 диагностируют активный воспалительный процесс при II стадии заболевания, а при значении 2.7<К<4.5 диагностируют активный воспалительный процесс при III стадии заболевания.

Исследования показали, что при активном воспалении (вторая и третья стадии заболевания) и прогрессировании заболевания смещается баланс активности двух субпопуляций Т-лимфоцитов-хелперов Тh1 и Th2. Первые (Тh1) из них, являющиеся основным источником интерферона-гамма, осуществляют реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЧЗТ), лежащую в основе иммунопатогенеза саркоидоза. В свою очередь Т-лимфоциты-хелперы 2 типа (Th2) синтезируют противовоспалительный цитокин-интерлейкин-10 и, таким образом, ингибируют иммунное воспаление, опосредованное гиперактивацией Т-хелперов 1 типа.

Для исследования баланса этих двух реципрокно реагирующих субпопуляций Т-лимфоцитов-хелперов был проведен иммуноферментный анализ с использованием коммерческих тест-систем - ТОО «Цитокин», Санкт - Петербург (Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Иммунология для врача. - ТОО издательство «Гиппократ».- С-Пб., 1998. - С.124 - 125), позволяющий оценить уровни интерферона-гамма и интерлейкина-10 в сыворотке крови больных саркоидозом.

Как показала экспериментальная проверка, оптимальным показателем для диагностики активности хронического воспалительного процесса у больных саркоидозом является отношение уровней интерферона-гамма и интерлейкина-10 в сыворотке крови.

Всего было обследовано 57 больных саркоидозом легких, из них: 32 больных - саркоидозом II стадии, 25 больных - саркоидозом III стадии.

Таблица 1Распределение уровней цитокинов ИФН-γ и ИЛ-10 в сыворотке крови больных саркоидозом легких II и III стадии в зависимости от активности воспалительного процессаГруппы больныхII стадия (n=32)III стадия (n=25)ЦитокиныОбострениеРемиссияОбострениеРемиссияИФН-γ (А)398,7±39,621,8±2,476,3±9,922,3±2,5(пг/мл)    ИЛ-10 (В)70,1±15,313,8±0,921,2±2,813,7±1,3(пг/мл)    ИФН-γ/ИЛ-10    (К=А/В)5,7±0,51,58±0,33,6±0,41,62±0,4(условн. ед.)    

У больных I стадии саркоидоза легких патологический процесс ограничен бронхопульмональными лимфатическими узлами и не требует лечения кортикостероидными препаратами. При переходе I стадии заболевания во II стадию патологический процесс распространяется на легочную ткань Как видно из табл.1, средний уровень интерферона-гамма у таких больных составляет 398,7±39,6 пг/мл. Одновременно с активацией Т-лимфоцитов-хелперов 1 типа на этом этапе развития заболевания начинают активироваться Т-хелперы 2 типа, синтезирующие противовоспалительный цитокин-интерлейкин-10 (ИЛ-10), сдерживающий развитие гиперчувствительности замедленного типа (адаптационный механизм ограничения воспаления). Соотношение интерферона-гамма и интерлейкина-10 у таких больных составляет 5,7±0,5. III стадия саркоидоза характеризуется отсутствием изменений в легочных лимфатических узлах, воспалительный процесс распространяется на легочную ткань, на этой стадии активность Т-лимфоцитов-хелперов 1 и 2 типов несколько снижается (по сравнению с больными II стадии), начинают активироваться, пролиферировать и синтезировать коллаген фибробласты, что в дальнейшем приведет к развитию пневмофиброза. Значения диагностического коэффициента К у больных III стадии саркоидоза (3,6±0,4) ниже, чем у больных II стадии (табл.1).

Кортикостероиды снижают активность Т-лимфоцитов-хелперов 1 и 2 типа, снижаются уровни синтеза цитокинов-интерферона-гамма и интерлейкина-10, что приводит к снижению значения коэффициента К в стадии ремиссии (табл.1).

Таблица 2Интервалы пороговых значений коэффициента К у больных саркоидозом легкихЗначения диагностического коэффициента КХарактеристика групп больных4.7<К<6.8II стадия саркоидоза легких, обострение2.7<К<4.5III стадия саркоидоза легких, обострение05<К<2.6II-III стадии саркоидоза легких, ремиссия на фоне кортикостероидной терапии 

По значениям коэффициента К, указанным в табл.1, вычислив сумму квадратичных отклонений от средних величин коэффициента в каждой группе обследованных больных, можно рассчитать пороговые значения коэффициента К и определить интервалы его значений для каждой группы больных (табл.2).

Способ может быть проиллюстрирован следующими примерами.

Пример 1. Больной Ш., 36 лет Диагноз: саркоидоз легких, II стадия, обострение. Болен 1 год. Функции внешнего дыхания: ЖЕЛ - 88%, OFV1 - 96%, циркулирующие иммунные комплексы - 320%. При обследовании по предлагаемому способу: уровень ИФН-γ-91 пг/мл, уровень ИЛ-10-18 пг/мл. Диагностический коэффициент К=5,05 - активный воспалительный процесс при II стадии саркоидоза.

Пример 2. Больной Г., 43 года. Диагноз: саркоидоз легких, III стадия, обострение. Болен 1 год. Функции внешнего дыхания: ЖЕЛ - 73%, OFV1 - 61%, циркулирующие иммунные комплексы - 490%. При обследовании по предлагаемому способу: уровень ИФН-γ-209 пг/мл, уровень ИЛ-10-59 пг/мл. Диагностический коэффициент К=3,5 - активный воспалительный процесс, III стадия саркоидоза.

Пример 3. Больная С., 39 лет. Диагноз: саркоидоз легких, II стадия, стабилизация состояния на фоне кортикостероидной терапии. Больна 3 года. Функции внешнего дыхания: ЖЕЛ - 75%, OFV1 - 73%, циркулирующие иммунные комплексы - 140%, При обследовании по предлагаемому способу: уровень ИФН-γ-12 пг/мл, уровень ИЛ-10-16 пг/мл. Диагностический коэффициент К=0,75-II стадия саркоидоза легких, ремиссия.

Пример 4. Больной Ф., 33 лет. Диагноз: саркоидоз легких, III стадия, стабилизация состояния на фоне кортикостероидной терапии. Болен 5 лет. Функции внешнего дыхания: ЖЕЛ - 44%, OFV1 - 42%, циркулирующие иммунные комплексы - 170%. При обследовании по предлагаемому способу: уровень ИФН-γ-17 пг/мл, уровень ИЛ-10-14 пг/мл. Диагностический коэффициент К=1,2 - III стадия саркоидоза легких, ремиссия.

Предлагаемый способ надежен, воспроизводим и достоверен в постановке и интерпретации результатов, достаточно прост в исполнении, практически не требует дорогостоящей аппаратуры и реактивов. Время анализа занимает 12-16 часов.

Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использовано для диагностики активности воспалительного процесса при саркоидозе легких. Сущность изобретения состоит в том, что в сыворотке крови определяют уровень интерферона-гамма и интерлейкина-10, рассчитывают их соотношение, и при значении 4,7<К<6,8 диагностируют обострение при II стадии заболевания, при значении 2,7<К<4,5 - обострение при III стадии заболевания. Техническим результатом является разработка способа, позволяющего провести комплексную диагностику активности воспалительного процесса при саркоидозе легких. 2 табл.

Способ диагностики активности воспалительного процесса при саркоидозе легких, включающий определение уровней цитокинов в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа, отличающийся тем, что определяют концентрацию интерферона-гамма и интерлейкина-10, рассчитывают их соотношение (К) и при значении 4,7<К<6,8 диагностируют активный воспалительный процесс при II стадии заболевания, а при значении 2,7<К<4,5 диагностируют активный воспалительный процесс при III стадии заболевания.