СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ КОМБИНАЦИЕЙ АМЛОДИПИНА И L-АРГИНИНА ПРИ L-NAME-ИНДУЦИРОВАННОМ ДЕФИЦИТЕ ОКСИДА АЗОТА Российский патент 2007 года по МПК A61K31/4422 A61K31/197 A61P9/12 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции эндотелиальной дисфункции с помощью амлодипина, относящегося к антагонистам кальция дигидропиридинового ряда. Согласно описанию В.С.Зодионченко, Т.В.Адашевой, А.П.Сандомирской в статье «Дисфункция эндотелия и артериальная гипертензия: терапевтические возможности», Русский медицинский журнал, том 10, 2002, с.11-16, который заключается в пероральном приеме препаратов этой группы у больных для коррекции эндотелиальной дисфункции.

Основным недостатком способа является опосредованный механизм действия амлодипина при эндотелиальной дисфункции, связанный с его антиоксидантными свойствами, увеличением активности супероксиддисмутазы и за счет уменьшения разрушения NO в стенке сосуда, как следствие, повышением биодоступности оксида азота (NO). Однако одним из главных факторов развития данного патофизиологического состояния, особенно при эссенциальной артериальной гипертензии, является повреждение в системе L-аргинин-NO, приводящее к нарушению базального освобождения оксида азота (NO), которое не корригируется при применении только одного амлодипина, так как при наличии ингибитора NO-синтазы он не оказывает достаточного эффекта. Поэтому результаты коррекции эндотелиальной дисфункции при повреждении в системе L-аргинин-NO, которое связано в основном с недостаточностью эндотелиальной NO-синтазы, с помощью амлодипина неудовлетворительны.

Техническим результатом изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий использование амлодипина, относящегося к антагонистам кальция дигидропиридинового ряда и донатора NO - L-аргинина.

Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO L-нитро-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг проводится ее коррекция внутрижелудочным введением амлодипина в дозе 0,5 мг/кг однократно в сутки и внутрибрюшинным введением донатора NO L-аргинина в дозе 200 мг/кг также однократно в сутки, которая приводит к активизации коррекции эндотелиальной дисфункции, так как L-аргинин является основным субстратом для синтеза NO и одновременно активатором его ферментативного пути образования в сосудистом эндотелии.

Способ осуществляется следующим образом

Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Bioshell". Функциональные пробы: эндотелий зависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелий независимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.

Пример конкретного выполнения.

Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 сек приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 сек развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 сек после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 сек. Блокада NO-синтазы с помощью длительного, ежедневного, в течение 7-суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.

Одновременное введение L-NAME и амлодипина (0,5 мг/кг внутрижелудочно) не приводило к снижению показателей исходных значений АД (САД - 186,3±15,2, ДАД - 131,1±7,0 мм рт.ст.), в экспериментах, где еще дополнительно вводился L-аргинин (200 мг/кг внутрибрюшинно) отмечалось потенциирование гипотензивного действия: САД - 144,8±7,6 ДАД - 71,6±9,0 мм рт.ст. (таблица 1.).

Таблица 1Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции амлодипином с использованием L-аргининаГруппы животныхФункциональные пробыСАД, мм рт.ст.ДАД, мм рт.ст.ЧСС, уд. в мин.ИнтактныеИсходные137,7±3,7101,9±4,3420,0±9,0ЭЗВ с АХ84,3±4,538,7±2,8416,0±14,0ЭНЗВ с НП83,0±3,742,1±4,4415,0±10,0Получавшие L-NAME (25 мг/кг)Исходные190,3±6,7^*145,0±3,9^*428,0±11ЭЗВ с АХ110,6±5,2^*82,8±6,6^*426,0±14,0ЭНЗВ с НП88,7±4,750,8±4,2426,0±13,0L-NAME (25 мг/кг)+Амлодипин (0,5 мг/кг)Исходные186,3±15,2131,1±7,0410,0±10,0ЭЗВ с АХ93,1±6,0^*71,6±9,0^*390,0±7,7ЭНЗВ с НП80,2±7,744,1±6,6420,0±11,0L-NAME (25 мг/кг)+амлодипин (0,5 мг/кг)+L-аргинин (200 мг/кг)Исходные144,8±7,6^**111,8±7,6^**390,0±9,7ЭЗВ с АХ77,0±5,3^**47,1±5,7^**379,0±5,7ЭНЗВ с НП74,4±8,042,8±5,1393,0±6,7* - р<0,05 в сравнении с группой интактных** - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME+амлодипин

Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привело нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.

Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.

Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции. Так, в группе, где на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME вводился только амлодипин, это отношение соответствовало значению 2,1±0,3, а в группе с дополнительным введением к амлодипину донатора NO L-аргинина - 1,5±0,1 (таблица 2).

Таблица 2Показатели, отражающие коррекцию эндотелиальной дисфункции на фоне введения L-NAME амлодипином и амлодипином в сочетании с L-аргинином.Группы животныхФункциональные пробыПрирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.)Время сосудистой реакции (сек)Площадь сосудистой реакции (усл. ед)Отношение площадей сосудистой реакции АХ к НПL-NAME+амлодипинАХ81,7±5,639,3±2,31350,4±216,92,1±0,3НП87,0±6,068,1±4,62771,0±174,3L-NAME+амлодипин+L-аргининАХ82,3±3,535,4±1,91525,2±218,41,5±0,1*НП73,0±6,059,0±9,52274,1±105,1* - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME+амлодипин

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать активизацию коррекции эндотелиальной дисфункции амлодипина при сочетанием его применении с L-аргинином.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции. Для этого в эксперименте моделируют дисфункцию ежедневным в течение 7 суток внутрибрюшинным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира крысам в дозе 25 мг/кг и на фоне этого вводят амлодипин внутрижелудочно в дозе 0,5 мг/кг и L-аргинин внутрибрюшинно в дозе 200 мг/кг однократно в сутки. Способ обеспечивает эффективную коррекцию в определенных условиях моделирования. 2 табл.

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий введение амлодипина, отличающийся тем, что в эксперименте моделируют дисфункцию ежедневным в течение 7 сут внутрибрюшинным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира крысам в дозе 25 мг/кг и на фоне этого вводят амлодипин внутрижелудочно в дозе 0,5 мг/кг и L-аргинин внутрибрюшинно в дозе 200 мг/кг однократно в сутки.