СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ КОМБИНАЦИЕЙ ТРИМЕТАЗИДИНА И L-АРГИНИНА ПРИ L-NAME-ИНДУЦИРОВАННОМ ДЕФИЦИТЕ ОКСИДА АЗОТА Российский патент 2011 года по МПК G09B23/28 A61K31/197 A61K31/495 A61P9/08 A61P9/14 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ восстановления эндотелиальной функции с помощью триметазидина, относящегося к препаратам, улучшающим метаболизм миокарда, описанный Di Napoli Р, Chierchia S, Taccardi AA, Grilli A, Felaco M, De Caterina R, Barsotti А в статье «Trimetazidine improves post-ischemic recovery by preserving endothelial nitric oxide synthase expression in isolated working rat hearts», Nitric oxide: biology and chemistry / official journal of the Nitric Oxide Society 2007 Mar; 16(2):228-36, который заключается в кардиопротективном эффекте при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота на модели экспериментальной ишемии-реперфузии у крыс.

Основным недостатком способа является опосредованный механизм действия триметазидина при эндотелиальной дисфункции, связанный с предотвращением снижения внутриклеточного содержания АТФ путем сохранения энергетического метаболизма клеток в состоянии гипоксии, обеспечением нормального функционирования мембранных ионных каналов, трансмембранным переносом ионов калия и натрия и сохранением клеточного гомеостаза, в то время как одним из главных факторов развития данного патофизиологического состояния, особенно при эссенциальной артериальной гипертензии, является повреждение в системе L-аргинин-NO, приводящее к нарушению базального освобождения оксида азота (NO), которое не корригируется при применении только одного триметазидина. Поэтому результаты коррекции эндотелиальной дисфункции при повреждении в системе L-аргинин-NO, которое связано в основном с недостаточностью эндотелиальной NO-синтазы, с помощью триметазидина неудовлетворительны.

Техническим результатом изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий использование триметазидина, относящегося к препаратам, улучшающим метаболизм миокарда, и донатора NO - L-аргинина.

Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте путем внутрибрюшинного введения лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг проводится коррекция дисфункции эндотелия за счет внутрижелудочного введения триметазидина в дозе 6 мг/кг однократно в сутки и внутрибрюшинного введения донатора NO L-аргинина в дозе 200 мг/кг однократно в сутки, что приводит к активизации коррекции эндотелиальной дисфункции, так как L-аргинин является основным субстратом для синтеза NO и одновременно активатором его ферментативного пути образования в сосудистом эндотелии.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы «Biopac Systems, Inc.». Функциональные пробы: эндотелийзависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелийнезависимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при р<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 с приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 с развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 с после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 с. Блокада NO-синтазы с помощью длительного, ежедневного, в течение 7 суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 169,4±6,3, ДАД - 131,4±5,0, СрАД - 144,1±4,4 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 100,6±8,1, ДАД до 68,8±8,0, СрАД до 79,4±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 90,7±4,7, ДАД до 61,4±4,2 и СрАД до 71,2±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.

Одновременное введение L-NAME и триметазидина (6 мг/кг внутрижелудочно) не приводило к снижению показателей исходных значений АД (САД - 162,6±4,5, ДАД - 132,3±4,1 мм рт.ст.), а в экспериментах, где еще дополнительно вводился L-аргинин (200 мг/кг внутрибрюшинно), отмечалось потенциирование гипотензивного действия: САД - 152,7±1,4 ДАД -123,3±1,4 мм рт.ст. (таблица 1).

Таблица 1 Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции комбинацией триметазидина и L-аргинина Группы животных Функциональные пробы САД, мм рт.ст. ДАД, мм рт.ст. ЧСС, уд. в мин. Интактные Исходные 137,7±3,7 101,9±4,3 420,0±9,0 ЭЗВ с АХ 84,3±4,5 38,7±2,8 416,0±14,0 ЭНЗВ с НП 83,0±3,7 42,1±4,4 415,0±10,0 Получавшие L-NAME (25 мг/кг) Исходные 169,4±6,3* 131,4±5,0* 432,0±9,0 ЭЗВ с АХ 100,6±8,1 68,8±8,0* 426,0±13,0 ЭНЗВ с НП 90,7±4,7 61,4±4,2* 423,0±14,0 L-NAME (25 мг/кг)+триметазидин (6 мг/кг) Исходные 162,6±4,5* 132,3±4,1* 346,5±14,3 ЭЗВ с АХ 99,8±3,6* 58,1±2,0* 319,6±16,8 ЭНЗВ с НП 95,4±6,6 50,5±2,4 367,9±12,5 L-NAME (25 мг/кг)+триметазидин (6 мг/кг)+L-аргинин (200 мг/кг) Исходные 152,7±1,4*^у 123,3±1,4*^у 375,6±19,1 ЭЗВ с АХ 94,0±5,1 57,6±5,9* 361,7±18,9 ЭНЗВ с НП 89,1±9,3 57,0±4,7* 376,9±15,0 ∗ - р<0,05 в сравнении с группой интактных ^у - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME+триметазидин

Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привела нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП (эндотелийнезависимая вазодилатация) к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ (эндотелийзависимая вазодилатация).

Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 4,5 раза - соответственно 1,1±0,1 у интактных и 4,9±0,6 у животных, получавших L-NAME.

Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции. Так, в группе, где на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME вводился только триметазидин, это отношение соответствовало значению 4,2±0,6, а в группе с дополнительным введением к триметазидину донатора NO L-аргинина - 2,5±0,2 (таблица 2).

Таблица 2 Показатели, отражающие коррекцию эндотелиальной дисфункции на фоне введения L-NAME триметазидином и комбинацией триметазидина и L-аргинина Группы животных Функциональные пробы Прирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.) Время сосудистой реакции (с) Площадь сосудистой реакции (усл. ед) Отношение площадей сосудистой реакции АХ к НП L-NAME (25 мг/кг)+триметазидин (6 мг/кг) АХ 70,4±4,6 33,3±5,3 1163,1±176,7 4,2±0,6 НП 90,0±5,0 98,4±8,2 4462,8±444,9 L-NAME (25 мг/кг)+триметазидин (6 мг/кг)+L-аргинин (200 мг/кг) АХ 72,3±5,5 54,4±4,8^у 2000,5±276,6^у 2,5±0,2^у НП 97,0±8,0 99,4±7,4 4870,0±643,1 ^у - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME+триметазидин

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать активизацию коррекции эндотелиальной дисфункции на фоне введения L-NAME комбинацией триметазидина и L-аргинина.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции. Для этого моделируют эндотелиальную дисфункцию путем внутрибрюшинного введения лабораторным крысам самцам линии Wistar N-нитро-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг ежедневно в течение 7 суток. Оценивают степень развития эндотелиальной дисфункции по отношению показателей эндотелийнезависимой и эндотелийзависимой вазодилятации. Коррекцию эндотелиальной дисфункции осуществляют введением триметазидина внутрижелудочно в дозе 6 мг/кг и L-аргинина внутрибрюшинно в дозе 200 мг/кг. Способ обеспечивает активизацию коррекции L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции за счет введения конкретной комбинации фармакологических препаратов, способствующей улучшению вазорелаксирующих свойств эндотелия. 2 табл.

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции, отличающийся тем, что в эксперименте лабораторным крысам самцам линии Wistar с эндотелиальной дисфункцией, на фоне ее моделирования внутрибрюшинным введением N-нитро-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг ежедневно, в течение 7 суток, оценивая степень развития дисфункции по отношению показателей эндотелийнезависимой и эндотелийзависимой вазодилатации вводят комбинацию триметазидина внутрижелудочно в дозе 6мг/кг и L-аргинина внутрибрюшинно в дозе 200 мг/кг.