СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ ПРЕПАРАТОМ ФОСФОГЛИВ ЛИОФИЛИЗАТ ПРИ L-NAME ИНДУЦИРОВАННОМ ДЕФИЦИТЕ ОКСИДА АЗОТА Российский патент 2009 года по МПК A61K31/198 A61K31/683 A61P9/10 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ восстановления эндотелий зависимой холинергический релаксации грудной аорты спонтанно гипертензивных крыс с помощью фосфолипидных везикул (липосом), описанный A.I.Soloviev, A.V.Stefanov, O.V.Bazilyuk, V.F.Sagach в статье «Phospholipid vesicles (liposomes) restore endothelium-dependent cholinergic relaxation in thoracic aorta from spontaneously hypertensive rats» в J Hypertens. 1993, Jun; 11(6): 623-7, который заключается в том, что фосфолипидные липосомы в концентрации 100-125 мкг/мл восстанавливают эндотелийзависимую холинергическую релаксацию грудной аорты спонтанно гипертензивных крыс, нормализуют синтез и секрецию эндотелиального релаксирующего фактора, способствуют коррекции эндотелиальной функции поврежденных клеток эндотелия.

Основным недостатком способа является недостаточная биодоступность суспензии фосфолипидных липосом и риск их поглощения клетками ретикулоэндотелиальной системы, снижающие способность липосом достигать определенных тканей-мишеней. Поэтому с целью активации коррекции эндотелиальной дисфункции целесообразно применение препарата фосфоглив лиофилизат на основе фосфолипида и глицирата, восстанавливающего целостность и функцию поврежденных эндотелиальных клеток. Оптимальным решением для получения препарата фосфоглив лиофилизат было использование глицирата не только в качестве фармацевтической субстанции, но и как детергента, способствующего получению стабильных наночастиц, способных встраиваться в мембраны эндотелиальных клеток и эффективно восстанавливать активность мембранных ферментных систем и эндотелиальную функцию.

Техническим результатом изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий использование препарата фосфоглив лиофилизат. Перед введением животным содержимое одного флакона (2,5 г лиофилизата, в том числе фосфолипид в количестве 0,5 г и глицират в количестве 0,2 г) растворяли в 10 мл воды для инъекций. При расчете доз использовался коэффициент межвидового пересчета доз с человека на экспериментальное животное с учетом массы тела (Уланова И.П. и др., 1968 год).

Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте путем внутрибрюшинного введения лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO N-нитро-аргинин-метолового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг, проводится ее коррекция внутрибрюшинным введением препарата фосфоглив лиофилизат в дозе 5,0 мл/кг и 0,5 мл/кг (для приготовления раствора содержимое одного флакона, т.е. 2,5 г лиофилизата, растворяют в 10 мл воды для инъекций) однократно в сутки.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 200-250 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Bioshell". Функциональные пробы: эндотелийзависимая вазодилатация (ЭЗВ)- внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелийнезависимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при р<0,05.

Пример конкретного выполнения.

Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 сек приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт. ст., при этом в течение первых 2-3 сек развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 сек после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 сек. Блокада NO-синтазы с помощью длительного ежедневного в течение 7-суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывала артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.

Одновременное введение L-NAME и препарата фосфоглив лиофилизат в дозе 5,0 мл/кг и 0,5 мл/кг (для приготовления раствора 2,5 г лиофилизата растворяли в 10 мл воды для инъекций) внутрибрюшинно не приводило к снижению показателей исходных значений АД и составляло соответственно (САД - 181,0±10,5 и 203,2±11,3, ДАД - 138,3±7,8 и 157,4±8,4 мм рт.ст.) по сравнению с группой нелеченых животных (таблица 1.).

Таблица 1.Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции препаратом фосфоглив (лиофилизат) на основе фосфолипида и глицирата. Группы животных Функциональные пробы САД, мм рт.ст. ДАД, мм рт.ст. ЧСС, уд. в мин Интактные Исходные 137,7±3,7^у 101,9±4,3^у 420,0±9,0 ЭЗВ с АХ 84,3±4,5^у 38,7±2,8^у 416,0±14,0 ЭНЗВ с НП 83,0±3,7 42,1±4,4 415,0±10,0 Получавшие L-NAME (25 мг/кг) Исходные 190,3±6,7^* 145,0±3,9^* 428,0±11,0 ЭЗВ с АХ 110,6±5,2^* 82,8±6,6^* 426,0±14,0 ЭНЗВ с НП 88,7±4,7 50,8±4,2 426,0±13,0 L-NAME (25 мг/кг)+ фосфоглив лиофилизат (5,0 мл/кг) Исходные 181,0±10,5^* 138,3±7,8* 364,6±9,6^*у ЭЗВ с АХ 95,0±3,2 58,9±4,0^*у 360,0±9,3^*У ЭНЗВ с НП 94,6±4,9 47,8±4,0 375,1±10,2^у L-NAME (25 мг/кг)+ фосфоглив лиофилизат (0,5 мл/кг) Исходные 203,2±11,3^* 157,4±8,4* 391,3±4,9^у ЭЗВ с АХ 108,0±5,1 65,1±3,8* 378,1±4,2У ЭНЗВ с НП 120,7±4,2^*У 67,8±7,8 392,5±8,4 * - р<0,05 в сравнении с группой интактных ^у - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME

Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных, получавших внутрибрюшинно ингибитор NO-синтазы, L-NAME закономерно привела к необходимости введения специального показателя, коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД), характеризующего степень эндотелиальной дисфункции и являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.

Рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и животных после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.

Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ было использовано это отношение как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции. Так, в группах, которые на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME получали препарат фосфоглив лиофилизат в дозе 5,0 мл/кг и 0,5 мл/кг (для приготовления раствора содержимое одного флакона, т.е. 2,5 г лиофилизата, растворяли в 10 мл воды для инъекций), КЭД был равен соответственно 3,1±0,4 и 2,9±0,5, т.е. ниже, чем этот показатель в группе нелеченых животных (таблица 2).

Таблица 2.
Показатели, отражающие коррекцию эндотелиальной дисфункции на фоне введения L-NAME, препаратом фосфоглив лиофилизат на основе фосфолипида и глицирата. Группы животных Функциональные пробы Прирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.) Время сосудистой реакции (сек) Площадь сосудистой реакции (усл. ед) Отношение площадей сосудистой реакции НП к АХ Интактные АХ 59,9±2,9 42,2±0,8^у 1268,0±74,8^у 1,1±0,1^у НП 61,0±3,0^у 45,1±1,0^у 1375,3±93,7^у L-NAME АХ 68,0±4,1 20,0±1,4^* 695,3±87,6^* 5,4±0,6^* НП 98,0±2,0^* 67,4±1,4^* 3322,7±116,7^* L-NAME + фосфоглив лиофилизат (5,0 мл/кг) АХ 81,6±6,1^* 42,0±4,1^у 1710,8±231,7^У 3,1±0,4^*У НП 97,0±7,0^* 101,8±6,8^*У 4975,5±578,8^*у L-NAME + фосфоглив лиофилизат (0,5 мл/кг) АХ 93,3±7,2^*у 49,0±5.7^у 2347,0±352,7^*у 2,9±0,5^*у НП 86,0±6,0^* 136,6±12,3^*у 5783,7±560,0^*у * - р<0,05 в сравнении с группой интактных ^у - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME

Таким образом, препарат фосфоглив лиофилизат в дозе 5,0 мл/кг и 0,5 мл/кг (для приготовления раствора содержимое одного флакона, т.е. 2,5 г лиофилизата, растворяют в 10 мл воды для инъекций) при введении внутрибрюшинно однократно в сутки предотвращает развитие эндотелиальной дисфункции при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота в эксперименте.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции. Для этого в эксперименте моделируют эндотелиальную дисфункцию ежедневным внутрибрюшинным введением крысам линии Wistar в течение 7 дней N-нитро-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг. При этом степень развития дисфункции оценивают по соотношению эндотелийнезависимой и эндотелийзависимой вазодилатации. Коррекцию дисфункции осуществляют внутрибрюшинным введением препарата фосфоглив лиофилизат в дозе 5,0 мл/кг и 0,5 мл/кг. Способ обеспечивает эффективную коррекцию эндотелиальной дисфункции в специфических условиях эксперимента. 2 табл.

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции, отличающейся тем, что в эксперименте крысам линии Wistar с эндотелиальной дисфункцией, на фоне ее моделирования внутрибрюшинным введением N-нитро-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг ежедневно в течение 7 сут, оценивая степень развития дисфункции по отношению показателей эндотелийнезависимой и эндотелийзависимой вазодилятации, ежедневно вводят внутрибрюшинно препарат фосфоглив лиофилизат в дозе 5,0 мл/кг и 0,5 мл/кг.