СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ КОМБИНАЦИЕЙ ИНДАПАМИДА И L-АРГИНИНА ПРИ L-NAME-ИНДУЦИРОВАННОМ ДЕФИЦИТЕ ОКСИДА АЗОТА Российский патент 2007 года по МПК A61K31/4045 A61K31/198 A61P9/12 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции эндотелиальной дисфункции с помощью индапамида, относящегося к тиазидоподобным диуретикам с умеренно выраженным продолжительным действием, производным бензамидов, описанный В.С.Зодионченко, Т.В.Адашевой, А.П.Сандомирской в статье «Дисфункция эндотелия и артериальная гипертензия: терапевтические возможности», Русский медицинский журнал, том 10, 2002, с.11-16, который заключается в пероральном приеме препаратов этой группы у больных для коррекции эндотелиальной дисфункции.

Основным недостатком способа является опосредованный механизм действия индапамида при эндотелиальной дисфункции, связанный с его антиоксидантными свойствами и, как следствие, повышением биодоступности оксида азота (NO) вследствие уменьшения его разрушения, а также повышением синтеза простагландина Е₂ и простациклина I₂ в то время как одним из главных факторов развития данного патофизиологического состояния, особенно при эссенциальной артериальной гипертензии, является повреждение в системе L-аргининNO, приводящее к нарушению базального освобождения оксида азота (NO), которое не корригируется при применении только одного индапамида. Поэтому результаты коррекции эндотелиальной дисфункции при повреждении в системе L-аргининNO, которое связано в основном с недостаточностью эндотелиальной NO-синтазы, с помощью индапамида неудовлетворительны.

Техническим результатом изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий использование индапамида, относящегося к тиазидоподобным диуретикам с умеренно выраженным продолжительным действием, производным бензамидов и донатора NO-L-аргинина.

Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO L-нитро-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг проводится ее коррекция внутрижелудочным введением индапамида в дозе 2 мг/кг однократно в сутки и внутрибрюшинным введением донатора NO L-аргинина в дозе 200 мг/кг также однократно в сутки, которая приводит к активизации коррекции эндотелиальной дисфункции, так как L-аргинин является основным субстратом для синтеза NO и одновременно активатором его ферментативного пути образования в сосудистом эндотелии.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Bioshell. Функциональные пробы: эндотелийзависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелийнезависимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ.

Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 с приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных, для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 с развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 с после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 с. Блокада NO-синтазы с помощью длительного, ежедневного, в течение 7 суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.

Одновременное введение L-NAME и индапамида (2 мг/кг внутрижелудочно) не приводило к снижению показателей исходных значений АД (САД - 191,4±10,0, ДАД - 140,4±2,4 мм рт.ст.) в экспериментах, где еще дополнительно вводился L-аргинин (200 мг/кг внутрибрюшинно) отмечалось потенциирование гипотензивного действия: САД - 183,9±6,8, ДАД - 137,7±6,6 мм рт.ст. (таблица 1.).

Таблица 1
Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции индапамидом с использованием L-аргининаГруппы животныхФункциональные пробыСАД, мм рт.ст.ДАД, мм рт.ст.ЧСС, уд. в мин.ИнтактныеИсходные137,7±3,7101,9±4,3420,0±9,0ЭЗВ с АХ84,3±4,538,7±2,8416,0±14,0ЭНЗВ с НП83,0±3,742,1±4,4415,0±10,0Получавшие L-NAME (25 мг/кг)Исходные190,3±6,7*145,0±3,9*428,0±11ЭЗВ с АХ110,6±5,2*82,8±6,6*426,0±14,0ЭНЗВ с НП88,7±4,750,8±4,2426,0±13,0L-NAME(25 мг/кг) + Индапамид (2 мг/кг)Исходные191,4±10,0140,4±2,4405,0±10,0ЭЗВ с АХ94,9±5,4*60,6±4,5*380,0±7,7ЭНЗВ с НП85,2±3,343,8±4,9420,0±11,0L-NAME(25 мг/кг) + Индапамид(2 мг/кг) + L-аргинин (200 мг/кг)Исходные183,9±6,8**137,7±6,6**390,5±9,7ЭЗВ с АХ87,0±4,5**57,1±1,4**379,7±5,7ЭНЗВ с НП80,4±5,240,8±5,2393,0±6,7* - р<0,05 в сравнении с группой интактных
** - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME + лозартан

Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привело нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.

Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз, соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.

Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции. Так, в группе, где на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME вводился только индапамид, это отношение соответствовало значению 3,3±0,4, а в группе с дополнительным введением к индапамиду донатора NO L-аргинина - 2,3±0,2 (таблица 2).

Таблица 2
Показатели, отражающие коррекцию эндотелиальной дисфункции на фоне введения L-NAME индапамидом и индапамидом в сочетании с L-аргининомГруппы животныхФункциональные пробыПрирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.)Время сосудистой реакции (сек.)Площадь сосудистой реакции (усл. ед)Отношение площадей сосудистой реакции АХ к НПL-NAME + индапамидАХ77,7±7,134,2±4,51442,7±94,13,3±0,4НП100,2±7,075,7±3,44360,0±316,5L-NAME + индапамид + L-аргининАХ91,6±6,935,1±1,91702,7±147,62,3±0,2*НП99,0±7,075,3±2,73796,4±379,0* - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME + индапамид

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать активизацию коррекции эндотелиальной дисфункции индапамида при сочетанием его применении с L-аргинином.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и касается и коррекции эндотелиальной дисфункции комбинацией индапамида и L-аргинина при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота. Для этого у крыс линии Wistar моделируют эндотелиальную дисфункцию путем ежедневного внутрибрюшинного введения в течение 7 суток L-нитро-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг. При этом степень развития дисфункции оценивают по соотношению эндотелийнезависимой и эндотелийзависимой вазодилатации. Коррекцию дисфункции осуществляют сочетанным введением индапамида и L-аргинина 1 раз в сутки. Индапамид вводят внутрижелудочно в дозе 2 мг/кг. L-аргинин вводят внутрибрюшинно в дозе 200 мг/кг. Способ позволяет оценить динамику коррекции эндотелиальной дисфункции на данной модели при сочетанием введении индапамида и L-аргинина. 2 табл.

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий введение индапамида, отличающийся тем, что в эксперименте моделируют дисфункцию ежедневным, в течение 7 суток внутрибрюшинным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира крысам линии Wistar в дозе 25 мг/кг, оценивая степень развития дисфункции по соотношению эндотелийнезависимой и эндотелийзависимой вазодилатации, и на фоне этого вводят индапамид внутрижелудочно в дозе 2 мг/кг и L-аргинин внутрибрюшинно в дозе 200 мг/кг однократно в сутки.