СРЕДСТВО ТКАНЕСПЕЦИФИЧЕСКОГО РЕГУЛИРОВАНИЯ МИТОХОНДРИАЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ЗАБОЛЕВАНИЙ (ВАРИАНТЫ) Российский патент 2007 года по МПК A61K38/02 A61P43/00 

Область техники

Изобретение относится к области медицины, а именно к средству (и его вариантам) тканеспецифического регулирования митохондриальных процессов и к применению средства (и его вариантов) при терапии заболеваний, обусловленных нарушением клеточного гомеостаза.

Предшествующий уровень техники

В настоящее время общеизвестно, что различные заболевания обусловлены теми или иными нарушениями клеточного гомеостаза. Последний, в основном, поддерживается функционированием митохондрий. Исходя из этих представлений при патогенетическом лечении различных заболеваний применяются метаболиты цикла трикарбоновых кислот (сукцинат) [1], а также вещества, участвующие в переносе электронов в дыхательной цепи митохондрий, например коэнзим Q10 [2] и цитохром С [3].

Хорошо известно, что эндогенные регуляторы являются более эффективными средствами лечения заболевания по сравнению с синтетическими. Особый интерес в качестве средств, применяемых при лечении заболеваний, представляют эндогенные регуляторы, обладающие тканевой специфичностью действия на митохондриальные процессы в вырабатывающих эти регуляторы клетках.

Известны универсальные регуляторы из различных тканей животных, к которым относятся кейлоны [4], контактины [5], цитомедины [6] и цитамины [7]. Они могут рассматриваться в качестве аналогов, т.к. обладают рядом общих свойств с регулятором, содержащимся в предлагаемом средстве, а именно тканевой специфичностью действия на процессы, протекающие в гомологичной ткани, при отсутствии видовой специфичности действия.

Химические структуры этих регуляторов мало изучены. Поэтому использовать химическую структуру этих веществ в качестве критерия их идентификации не представляется возможным. С другой стороны, исследования механизма действия этих регуляторов показали, что они качественно отличаются друг от друга по своему непосредственному воздействию на субклеточном уровне. Например, ингибиторное действие некоторых кейлонов на пролиферативную активность тканей объясняется их взаимодействием с клеточной поверхностью [8]. Считается общепризнанным, что эффект G2-кейлонов во всех тканях опосредован цАМФ. Подобный механизм может реализоваться только в том случае, если кейлон взаимодействует с поверхностью плазматической мембраны [9]. Регулирование пролиферации контактинами объясняется повышением ими клеточной адгезии [10]. Таким образом установлено, что контактины, как и кейлоны, непосредственно воздействуют на клеточную поверхность.

Имеются данные о том, что тканеспецифические регуляторы могут осуществлять свои функции, воздействуя непосредственно на клеточное ядро. Так, G1-кейлон из молочной железы обладает способностью тормозить синтез ДНК в ядре клетки, организуя в нем блок между пулом тимидинтрифосфата и ДНК [11]. Действие цитомединов, как регуляторов активности генома клетки, также объясняют их непосредственным взаимодействием с ДНК клеточного ядра [6].

Из вышеизложенного можно заключить, что существенным и надежным критерием для различения тканеспецифических регуляторов клеточных процессов в настоящее время является именно место их непосредственного действия на те или иные клеточные органеллы, как, например, в рассмотренных выше случаях - на поверхность плазматической мембраны (кейлоны, контактины) или на клеточное ядро (цитомедины).

Наиболее близким является средство, применяемое при лечении заболеваний, получившее название «цитамины» [7]. Цитамины представляют собой высокомолекулярные интерполимерные комплексы, содержащие тканеспецифические белки, РНК и ДНК. Такие нуклеопротеидные комплексы являются компонентами ядерного хроматина, т.е. локализованы в ядре клетки (см. с.7-8 [7]). В России запатентован способ получения цитаминов [12]. Цитамин из печени, в форме пищевой добавки, используется для лечения и профилактики заболеваний печени человека [7].

Нельзя исключить возможность опосредованного воздействия цитаминами на митохондрии из гомологичной ткани, однако данных, подтверждающих такую возможность, нет в научной литературе. Отсутствует в ней и обсуждение этой возможности.

Раскрытие изобретения

Техническим результатом предлагаемого изобретения является повышение эффективности при патогенетическом лечении различных заболеваний тканей организма человека и животного, восстановление клеточной массы этой ткани (в случае удаления или гибели ее части) и неспецифическое протекторное действие на клетки ткани за счет тканеспецифической оптимизации функций митохондрий по поддержанию энергетического и ионного гомеостазов в клетках тканей, одной со средством тканевой принадлежности.

Поставленный технический результат достигается тем, что предлагается применение средства, содержащего вещество, являющееся слабогидрофобным, водорастворимым, отрицательно заряженным при щелочном рН, с молекулярной массой от 500 Da до 15000 Da, выделенное из тканей, гомологичных тканям, являющимся объектом лечебного воздействия, и обладающее способностью тканеспецифически понижать отношение фосфорилированного аденозиндифосфата к количеству атомарного кислорода, затраченного высокоэнергизованными митохондрями в ходе окислительного фосфорилирования, для тканеспецифического регулирования митохондриальных процессов, при лечении заболеваний, или средства, содержащего упомянутое вещество, и приготовленного по гомеопатической технологии и имеющего гомеопатическое разведение D6, или в составе биологически активной пищевой добавки также для тканеспецифического регулирования митохондриальных процессов при лечении заболеваний.

В течение последней половины 20-го века регуляция энергопродукции и ионного транспорта в митохондриях из тканей животных подверглись интенсивному исследованию. При этом объектом исследований являлись регуляторные механизмы, общие для всех тканей живого организма [13]. Тканеспецифический механизм регуляции энергозависимых процессов в митохондриях тканей животных был обнаружен одним из авторов [14] заявки и никем кроме него не исследовался.

Предложение использовать тканеспецифические регуляторы митохондриальных процессов из тканей животных в качестве средства при патогенетическом лечении болезней впервые предложено авторами в данном изобретении и является неочевидным и полностью оригинальным.

Далее везде по тексту предлагаемые варианты применения средства при патогенетическом лечении будут называться «Применение Средства при лечении», предлагаемые варианты средства будут называться «Средство». Для обозначения биологически активной пищевой добавки будет применено общепринятое сокращение «БАД». Вещество будет называться «Регулятором», т.к. выяснено, что последний регулирует митохондриальные процессы. Величина отношения фосфорилированного аденозиндифосфата к затраченному количеству атомарного кислорода будет далее называться «АДФ/O», а способ оценки деэнергизующего действия Регулятора на митохондрии по понижению отношения фосфорилированного аденозиндифосфата к затраченному количеству атомарного кислорода высокоэнергизованными митохондриями в ходе окислительного фосфорилирования будет далее называться «АДФ/O-тест».

Общеизвестно, что снижение отношения АДФ/O у митохондрии является индикатором деэнергизации (повреждения) митохондрии [15].

Отличием предлагаемого Средства является высокая эффективность его применения при патогенетическом лечении и неспецифической защите от повреждающих воздействий каждой из тканей человека и животного, а также при восстановлении упомянутых тканей путем выявленной нами возможности использования тканеспецифических клеточных механизмов контроля эффективности митохондриальных процессов (при отсутствии их видовой специфичности). При этом выполняется условие, что в каждом отдельном случае имеется тканеспецифический Регулятор, выделенный из ткани животного, гомологичной ткани - объекту лечебного воздействия любого организма позвоночных, т.е. как собственного биологического вида, так и любой другой видовой принадлежности.

Отличием Средства является также то, что Регулятор из ткани любой видовой принадлежности оказывает тканеспецифическое и видонеспецифичное воздействие на эффективность энергозависимых процессов, протекающих в митохондриях клеток человека, путем непосредственного взаимодействия Регулятора с митохондриями из одноименной ткани.

Отличительными характеристиками Регулятора являются молекулярная масса в интервале значений от 500 до 15000 Да, водорастворимость, слабый отрицательный заряд при щелочном рН и слабые гидрофобные свойства в неотъемлемой совокупности со способностью упомянутого вещества тканеспецифически понижать у митохондрии из гомологичной веществу ткани отношение фосфорилированного этими митохондриями аденозиндифосфата к затраченному в ходе этого процесса количеству атомарного кислорода (АДФ/O).

Нами определено, что Регулятор, обнаруженный в различных тканях крысы и в ткани печени из различных животных, оказывает на высокоэнергизованные митохондрии из гомологичной ткани организма позвоночных (человека, животного) тканеспецифическое деэнергизующее действие, а именно он способен понижать эффективность окислительного фосфорилирования этих митохондрии, что выражается в понижении отношения АДФ/O - коэффициента эффективности этого процесса, измеряемого как отношение фосфорилированного этими митохондриями аденозиндифосфата к затраченному в ходе этого процесса количеству атомарного кислорода до значений менее 1,8, вплоть до полного разобщения у этих митохондрий окислительного фосфорилирования.

При воздействии Регулятора как на печень целого животного (Регулятор, выделенный из печени крысы, действовал как гепатопротектор в экспериментах на мышах), так и при лечении заболеваний человека Средством, содержащим Регулятор, выделенный из печени кролика, было показано отсутствие видовой специфичности в действии Регулятора из печени.

Эти данные согласуются с полученными ранее результатами в экспериментах «ин витро», проведенных на суспензии митохондрий, выделенных из печени различных животных, где также было показано отсутствие видовой специфичности деэнергизующего действия Регулятора из печени крысы на митохондрий из гомологичной ткани [16].

Тканеспецифическое понижение отношения АДФ/O под действием фракций из гомологичных тканей регистрировалось и в экспериментах с митохондриями печени [14], почки, сердца, легкого и тимуса крысы [17], а также у митохондрий из печени кролика, голубя, лягушки и рыбы [18]. Установлен механизм деэнергизующего действия этих фракций на митохондрий из гомологичной ткани, который заключается в индукции у внутренней мембраны этих митохондрий проницаемости для катионов [19].

Из приведенных в открытых публикациях данных не вытекает возможность применения упомянутых фракций, равно как и применение Регулятора в качестве Средства, применяемого при лечении заболеваний. На сегодняшний день не известно, чтобы Тканеспецифическое митохондриальное повреждение, сопровождающееся деэнергизацией митохондрий, могло бы привести к лечебному эффекту, обнаруженному нами, впервые излагаемому здесь и являющемуся техническим результатом предлагаемого изобретения (патогенетическое лечение, протекторное действие и восстановление массы тканей).

В данном изобретении предложены варианты Средства, применяемого при лечении заболеваний, либо являющегося Регулятором, либо содержащего Регулятор (гомеопатический препарат, БАД, экстракт ткани, субклеточная фракция) и варианты применения Средства при лечении. При этом Регулятор может быть в разной степени очищенным.

Поставленный технический результат также достигается тем, что предложен способ получения Средства, включающий поэтапное выделение вещества (Регулятора) средства (Средства) при помощи стандартных методов биохимии, причем после каждого этапа контролировали наличие активности вещества (Регулятора) с применением АДФ/O-теста, идентифицируя вещество (Регулятор), выделяемое из ткани или животного, или полученное методами биотехнологии путем его тестирования, во-первых, по его деэнергизующему действию на исходно высокоэнергизованные митохондрии, выделенные из ткани животного, (или полученной методами биотехнологии), гомологичной той ткани, из которой выделяется вещество, во-вторых, по тканевой специфичности его деэнергизующего действия на исходно высокоэнергизованные митохондрии, выделенные из ткани животного (или полученной методами биотехнологии), гетерологичной той ткани, из которой выделяется вещество (т.е. по отсутствию в этом случае деэнергизующего действия), в-третьих, по отсутствию по видовой специфичности его деэнергизующего действия на исходно высокоэнергизованные митохондрии, выделенные из ткани животного другого биологического вида (или полученной методами биотехнологии), гомологичной той ткани, из которой выделяется вещество.

Таким образом, на каждом этапе процесса выделения Регулятора нами впервые предложено устанавливать, что действующим началом Средства действительно является Регулятор.

Далее везде по тексту предлагаемые варианты способа получения средства будут называться «Способ получения Средства».

Для однозначной идентификации Регулятора применяется тест-система, позволяющая в трех отдельных экспериментах, по совокупности сходства и различия их результатов, выявить маркерные свойства Регулятора, а именно его способность тканеспецифически и при отсутствии видовой специфичности деэнергизовать высокоэнергизованные митохондрии из гомологичной ткани.

Степень энергизованности митохондрии во всех трех экспериментах оценивается стандартным методом по величине отношения АДФ/O, отражающим эффективность окислительного фосфорилирования (АДФ/O-тест). Максимальное значение этой величины у высокоэнергизованных митохондрий из любой ткани животного любого биологического вида, окисляющих сукцинат в стандартных условиях эксперимента на суспензии митохондрии, не может превышать величины 2,0. В предложенной тест-системе использовались митохондрии с отношением АДФ/O в интервале значений 2,0-1,8. Достоверным эффектом деэнергизации упомянутых митохондрий испытуемой фракцией (экстрактом из ткани, или субклеточной фракцией, или фракцией различной степени очистки, а именно частично очищенной или очищенной) считали снижение величины АДФ/O до величины этого отношения менее 1,8 в присутствии упомянутой фракции (АДФ/O-тест). Однако возможно и полное разобщение окислительного фосфорилирования митохондрии испытуемой фракцией.

Эксперимент - №1. Проверка деэнергизующего действия испытуемой фракции на препарате исходно высокоэнергизованных митохондрий, выделенных из гомологичной ткани.

Производится измерение величины АДФ/O в суспензии митохондрий в стандартных условиях при окислении сукцината в среде инкубации, не содержащей иных фракций. Затем измерения повторяются в той же среде инкубации в присутствии испытуемой фракции, выделенной из гомологичной ткани животного того же вида, что и испытуемая фракция.

Необходимый результат заключается на этом этапе тестирования в наличии у испытуемой фракции способности деэнергизовать высокоэнергизованные митохондрий, что подтверждается понижением отношения АДФ/O. При этом достигается достоверный эффект деэнергизации упомянутых митохондрий в АДФ/O-тесте, согласно приведенному выше описанию.

Эксперимент - №2. Проверка тканевой специфичности деэнергизующего действия испытуемой фракции на исходно высокоэнергизованных митохондриях из гетерологичной ткани.

С этой целью производится изучение деэнергизующего действия испытуемой фракции по схеме Эксперимента №1, но на митохондриях, выделенных из любой другой ткани животного того же вида. Необходимый результат на этом этапе тестирования заключается в неспособности испытуемой фракцией деэнергизовать митохондрий из гетерологичной ткани, что подтверждается отсутствием эффекта понижения отношения АДФ/O.

Эксперимент - № 3. Проверка видовой специфичности действия испытуемой фракции на высокоэнергизованных митохондриях, выделенных из гомологичной ткани.

Для этого проводится эксперимент по схеме эксперимента №1, но с использованием митохондрий, выделенных из организма животного любого другого биологического вида. Необходимый результат на этом этапе тестирования заключается в способности испытуемой фракции деэнергизовать исходно высокоэнергизованные митохондрии одной с ними тканевой принадлежности, но выделенные из животного другого вида, что подтверждается понижением отношения АДФ/O, т.е. достоверным эффектом деэнергизации упомянутых митохондрий в АДФ/O-тесте, согласно приведенному выше описанию.

В данной тест-системе однозначно идентифицируется наличие Регулятора в испытуемой фракции при получении следующих результатов в их неотъемлемой совокупности: понижение АДФ/O - в эксперименте №1, отсутствие понижения АДФ/O - в эксперименте №2 и понижение АДФ/O - в эксперименте №3.

Таким образом, нами предложено Средство, содержащее Регулятор, выделенный из тканей животного и способный тканеспецифически понижать отношение фосфорилированного аденозиндифосфата к количеству атомарного кислорода, затраченному высокоорганизованными митохондриями в ходе окислительного фосфорилирования, причем Регулятор дополнительно является слабогидрофобным, водорастворимым, отрицательно заряженным при щелочном рН, с молекулярной массой от 500 Da до 15000 Da, а также

- способным тканеспецифически осуществлять патогенетическое лечение гомологичной ткани организма позвоночных, кроме того,

- ткани, из которых выделен Регулятор, гомологичны тем тканям, которые являются объектом лечебного воздействия, и дополнительно могут быть тканями, полученными методами биотехнологии, а

- Средство может быть либо экстрактом упомянутых тканей, либо субклеточной фракцией, либо гомеопатическим препаратом, либо БАД, либо непосредственно Регулятором.

Следует учесть, что тестирование (выявление деэнергизации митохондрий тестируемым экстрактом или любой клеточной фракцией в экспериментах №№1 и 3 и не выявление - в эксперименте №2) можно проводить не только по АДФ/O-тесту, но также

- по снижению трансмембранного потенциала;

- по уменьшению степени восстановленности матриксного пула пириннуклеотидов;

- по уменьшению кальциевой емкости митохондрий;

- по уменьшению времени удержания митохондриями ионов кальция;

- по стимуляции активности АТФ-азы.

При этом Регулятор также будет однозначно идентифицироваться, но уже в вышеперечисленных тест-системах при получении аналогичных результатов в их неотъемлемой совокупности: положительного результата в эксперименте №1, отрицательного - в эксперименте №2 и положительного - в эксперименте №3.

Поставленный технический результат достигается тем, что предлагаемое Средство может быть выполнено как в виде гомеопатического лекарственного средства, в виде БАД, так и в виде аллопатического лекарственного средства, в том числе только в виде вещества - Регулятора, или частично очищенного, или очищенного, а также в виде экстракта или субклеточной фракции, выделенных из ткани, гомологичной той ткани, которая является объектом лечебного воздействия.

Безусловно, Регулятор можно получать не только из тканей животного, выделенных из организма, выращенного без применения биологических технологий, но также и выращенных искусственным путем с применением биологических технологий.

Поставленный технический результат достигается тем, что для реализации Способа получения Средства предлагается:

- для получения вещества (Регулятора) в виде экстракта поэтапное выделение вещества (Регулятора) прекращать на этапе экстрагирования;

- для получения вещества (Регулятора) в виде субклеточной фракции поэтапное выделение вещества (Регулятора) прекращать на этапе центрифугирования или ультрацентрифугирования;

- для получения частично очищенного вещества (Регулятора) поэтапное выделение вещества (Регулятора) прекращать на этапе проведения колоночной хроматографии низкого давления;

- для получения очищенного вещества (Регулятора) поэтапное выделение вещества (Регулятора) прекращать на этапе проведения электрофореза.

Поставленный технический результат также достигается тем, что Средство в виде вещества (Регулятора) вводят или перорально, или в виде инъекции.

Поставленный технический результат также достигается тем, что гомеопатическое разведение очищенного вещества - Регулятора составляет D6, а введение препарата в организм проводили перорально при эффективной дозе по 5-6 крупинок путем рассасывания во рту до полного растворения, два раза в день между приемами пищи.

Возможны применения других гомеопатических разведений Регулятора в интервалах D3-С3, С6-С12, а также С30-С100 и выше. Эти разведения также в разной степени проявляют лечебную эффективность, которая может отличаться по времени наступления лечебного эффекта и силе его проявления, но не по характеру действия на симптомы и объективные проявления патологического процесса.

Далее, поставленный технический результат достигается тем, что предложенное применение средства при патогенетическом лечении заболеваний, обусловленных нарушением клеточного гомеостаза, в частности такового в клетках печени,

- при лечении цирроза печени следует вводить упомянутое средство (препарат) не менее двух месяцев;

- при лечении поражений печени, обусловленных противоопухолевой и иной токсической химиотерапией, следует вводить упомянутое средство (препарат) в процессе проведения химиотерапии и между сеансами химиотерапии и, при необходимости, после завершения последней, в зависимости от достигнутых результатов.

Предложенное позволило излечить цирроз печени и повысить эффективность патогенетического лечения побочных последствий химиотерапевтического воздействия.

Кроме того, поставленный технический результат достигается тем, что Средство представляет собой БАД, в состав которой входит частично очищенное вещество в эффективной дозе 10-100 мкг и носитель, которым может быть или сахароза, или сорбит, или пищевой сахар, или любые другие нетоксические ингредиенты.

В процессе применения Средства при лечении поставленный технический результат достигается тем, что БАД вводят между приемами пищи два раза в день. При этом прием пищи одновременно с БАД не влияет на эффективность лечения.

Поставленный технический результат достигается тем, что предложенное применение средства при лечении нарушений структуры и функций печени в результате приема токсических фармакологических препаратов (химиотерапия опухолей и проч.) при помощи БАД ее следует вводить во время проведения химиотерапии, а также в промежутках между курсами химиотерапии и, при необходимости, после ее завершения, в зависимости от достигнутых результатов. Продолжительность введения БАД здесь зависит от способа токсической химиотерапии основного заболевания.

Предложенное позволило повысить эффективность патогенетического лечения упомянутых побочных последствий химиотерапевтического воздействия, что подтверждается отменой противорвотных препаратов, отсутствием диспепсии и ослаблением анорексии.

Существом настоящего изобретения является предложенное новое неочевидное применение (варианты) нового неочевидного Средства (варианты) при патогенетическом лечении заболеваний, обусловленных нарушением клеточного гомеостаза, путем тканеспецифического регулирования митохондриальных процессов, а также новый и неочевидный Способ получения предложенного Средства. Средство в виде вещества (Регулятора), или на его основе (гомеопатические препараты, аллопатические препараты, различные БАД) никогда ранее не предлагаемое и не рассматриваемое как обладающее лечебным эффектом, характеризуемое новой совокупностью ранее не известных свойств, имеет изобретательский уровень. Применение Средства при лечении также имеет изобретательский уровень. Предлагаемое Средство и его применение при лечении позволяют повысить эффективность патогенетического лечения различных заболеваний тканей организма человека и животного, ускорить восстановление клеточной массы гомологичной ткани (в случае удаления или гибели ее части), а также повысить неспецифическую резистентность клеток.

Считаем, что это происходит за счет оптимизации функций митохондрий по поддержанию энергетического и ионного гомеостазов клеток ткани - объекта лечебного воздействия Средством, полученным из гомологичной ткани, как описано нами выше.

Технологическая реализация изобретения не представляет трудностей, так как основана на применении известных базовых биохимических методов для получения вещества (Регулятора) Средства, а также на известных гомеопатических технологиях, или на обычной фармацевтической технологии, или на распространенной технологии приготовления БАД. Все эти технологии к настоящему времени хорошо разработаны и широко применяются и поэтому предложение удовлетворяет критерию «промышленная применимость». Основное отличие при изготовлении Средства состоит в наличии Регулятора, присутствующего в Средстве в виде экстракта ткани животного, или субклеточной фракции ткани животного, или частично очищенного, или очищенного.

Варианты осуществления изобретения

В дальнейшем изобретение поясняется конкретными вариантами лабораторных исследований на животных и рядом примеров лечебных случаев использования Средства, содержащего Регулятор. Приведенные примеры не являются единственными и имеются другие реализации Средства и его лечебных действий. Особенности Средства и его Применения при лечении заболеваний отражены в совокупности признаков формулы изобретения.

Регулятор выделяли для разных приведенных далее примеров конкретного исполнения из различных органов крысы и кролика. Для этого использовали различные сочетания следующих методов, являющихся этапами выделения Регулятора:

1. Механическое размельчение ткани

2. Гомогенизация

3. Дифференциальное центрифугирование

4. Экстрагирование

5. Центрифугирование

6. Ультрацентрифугирование

7. Диализ

8. Термическое фракционирование

9. Ультрафильтрация

10. Колоночные хроматографии низкого давления

11. Колоночные хроматографии высокого давления

12. Электрофорез.

Выделение из многокомпонентной фракции Регулятора (т.е. предлагаемого вещества, характеризуемого совокупностью признаков, данных в «Формуле изобретения»), являющегося основой Средства, производится с применением современных стандартных препаративных биохимических методов в их последовательности, отраженной выше. Каждый из методов выделения Регулятора, приведенный в их перечне, начиная с Метода по пп.3 перечня позволяет разделить многокомпонентную смесь веществ на фракции. Из полученной после разделения смеси методом по пп.3 перечня, совокупности фракций нами при помощи тестирования в описанной тест-системе см. выше отбиралась «активная» фракция, т.е. обладающая специфическим признаком, а именно «способностью тканеспецифически понижать отношение фосфорилированного аденозиндифосфата к количеству атомарного кислорода, затраченного высокоэнергизованными митохондрями в ходе окислительного фосфорилирования». Этот признак однозначно свидетельствовал о том, что в составе упомянутой фракции присутствует Регулятор. После этого «активная» фракция подвергалась разделению с применением метода по пп.4 перечня. Полученные в результате этой препаративной процедуры фракции опять подвергались тестированию на содержание в них Регулятора при помощи тест-системы. Цикл «препаративное разделение веществ - тестирование активности Регулятора» повторялся с применением последующих методов, перечисленных выше, до тех пор, пока в методе по пп.12 перечня мы не получали не разделяемую с помощью примененных препаративных методов фракцию, содержащую Регулятор.

Из вышеизложенного видно, что высокоочищенный Регулятор выделяется из смеси веществ, благодаря разработанной нами оригинальной тест-системе, которая подробно описана выше. Уникальность нашей тест-системы заключается в том, что она не только позволяет выявить в тестируемой фракции вещество, деэнергизующее митохондрии, но и выделить из всех таких веществ Регулятор, обладающий тканевой специфичностью действия на митохондрии из гомологичной ткани, при отсутствии видовой специфичности действия, наряду со всеми другими признаками, упомянутыми в формуле изобретения.

На основании приведенных нами выше разъяснений, мы утверждаем, что разработанная нами тест-система позволяет однозначно выделить обнаруженный нами Регулятор, составляющий основу Средства, из любой смеси других веществ, даже если допустить, что в составе этой смеси присутствуют другие вещества «обладающие тканеспецифичностью и оказывающие лечебное действие при патогенетическом лечении различных отдельных заболеваний». Каждое другое вещество в составе тестируемой смеси не будет обладать всей совокупности указанных признаков Регулятора. Из вышеизложенного также следует, что физико-химические свойства Регулятора являются дополнительными его признаками. Главным же его признаком является тканевая специфичность действия на митохондрии из гомологичной ткани, выявляемая в разработанной нами тест-системе. Для выделения экстрактов, содержащих Регулятор, были использованы методы по пп.1-4 перечня.

Для выделения субклеточной фракции, содержащей Регулятор, были использованы методы по пп.1-5 или по пп.1-6 перечня.

Для выделения частично очищенных препаратов Регулятора были использованы методы по пп.1-10 перечня.

Для выделения очищенных препаратов Регулятора были использованы методы по пп.1-12 перечня.

Ниже приводятся примеры выделения Регулятора различной степени очистки с применением перечисленны выше известных и широко применяемых препаративных биохимических методов (см., например, [20]).

Пример получения «клеточного экстракта».

Животных (5 шт. крыс «Вистар») забивали декапитацией, извлеченную печень промывали и охлаждали в холодном физиологическом растворе. Затем охлажденную и отмытую от крови печень измельчали путем продавливания через мелкие отверстия продавливателя ([20], сс.35-38). Полученную кашицу из кусочков ткани суспендировали в физиологическом растворе и проводили экстрагирование в течение 24 ч. Затем кусочки ткани осаждали центрифугированием ([20], сс.42-45).

Полученный экстракт (супернатант после центрифугирования) тестировали на содержание в нем Регулятора в трех экспериментах следующим образом.

Эксперимент - №1. Проверка деэнергизующего действия испытуемой фракции - экстракта печени крысы на препарате исходно высокоэнергизованных митохондрий, выделенных из печени крысы.

Произведено измерение величины АДФ/O в суспензии митохондрии, выделенных из печени крысы, в стандартных условиях, при окислении сукцината в среде инкубации, не содержащей иных фракций. Отношение АДФ/O в контроле равно 1,9. Затем измерения повторены в той же среде инкубации в присутствии испытуемой фракции - экстракта печени крысы. Получено, что отношение АДФ/O снижено до 0,4. Следовательно, полученный нами экстракт печени крысы (испытуемая фракция) обнаружил способность деэнергизовать высокоэнергизованные митохондрии.

Достигнут достоверный эффект деэнергизации упомянутых митохондрий в АДФ/O-тесте, согласно приведенному выше описанию.

Эксперимент - №2. Проверка тканевой специфичности деэнергизующего действия испытуемой фракции - экстракта печени крысы на исходно высокоэнергизованных митохондриях из почки крысы.

С этой целью изучено деэнергизующее действие испытуемой фракции - экстракта печени крысы по схеме Эксперимента №1, но на митохондриях, выделенных из почки крысы, т.е. другой ткани животного того же вида: произведено измерение величины АДФ/O в суспензии митохондрий, выделенных из почки крысы, в стандартных условиях, при окислении сукцината в среде инкубации, не содержащей иных фракций. Отношение АДФ/O в контроле равно 1,85. Затем измерения повторены в той же среде инкубации в присутствии испытуемой фракции - экстракта печени крысы. Получено, что отношение АДФ/O не изменилось.

Следовательно, полученный нами экстракт печени крысы (испытуемая фракция) не обнаружил способности деэнергизовать высокоэнергизованные митохондрии, выделенные из гетерологичной ткани животного того же вида, что подтверждается отсутствием эффекта понижения отношения АДФ/O.

Эксперимент - № 3. Проверка видовой специфичности действия испытуемой фракции - экстракта печени крысы на высокоэнергизованные митохондрии, выделенные из печени кролика.

Для этого проводится эксперимент по схеме Эксперимента №1, но с использованием митохондрий, выделенных из печени кролика, т.е. гомологичной ткани организма животного другого биологического вида.

Произведено измерение величины АДФ/O в суспензии митохондрий, выделенных из печени кролика, в стандартных условиях, при окислении сукцината в среде инкубации, не содержащей иных фракций. Отношение АДФ/O в контроле равно 1,95. Затем измерения повторены в той же среде инкубации в присутствии испытуемой фракции - экстракта печени крысы. Получено, что отношение АДФ/O равно 0,3.

Следовательно, полученный нами экстракт печени крысы (испытуемая фракция) обнаружил способность деэнергизовать исходно высокоэнергизованные митохондрии одной с ним тканевой принадлежности, но выделенных из животного другого вида, что подтверждается понижением отношения АДФ/O, т.е. достоверным эффектом деэнергизации упомянутых митохондрий в АДФ/O-тесте, согласно приведенному выше описанию.

В данной тест-системе однозначно идентифицируется наличие Регулятора в полученном нами экстракте печени крысы - испытуемой фракции при получении следующих результатов в их неотъемлемой совокупности: понижение АДФ/O - в эксперименте №1, отсутствие понижения АДФ/O - в эксперименте №2 и понижение АДФ/O - в эксперименте №3.

Далее содержащий Регулятор экстракт лиофилизировали. Затем полученный из лиофилизата концентрированный экстракт вновь подвергали тестированию вышеописанным способом, включающим три эксперимента на содержание в нем Регулятора и применяли для лечебного воздействия на организм животного (см. Пример №2 лечебного воздействия).

Пример получения «субклеточной фракции».

Процедура забоя, обработки печени и ее измельчения осуществлена, как в «Примере получения клеточного экстракта». Измельченную печень гомогенизировали в гомогенизаторе Поттера. Методом дифференциального центрифугирования ([20], сс.45-47) из гомогената осаждали суммарную фракцию ядер, митохондрий, лизосом и пероксисом. Полученный супернатант тестировали на содержание в нем Регулятора вышеописанным способом (см. пример получения «клеточного экстракта»). Затем супернатант подвергали ультрацентрифугированию ([20], сс.59-61) для полного осаждения оставшихся в нем органелл. Супернатант после ультрацентрифугирования, уже не содержащий клеточных органелл, («субклеточную фракцию»), снова тестировали на содержание в нем Регулятора (см. пример получения «клеточного экстракта»). Затем субклеточную фракцию подвергали термическому фракционированию путем прогрева при 100°С, денатурированный белок отделяли центрифугированием. Полученную термостабильную субклеточную фракцию вновь тестировали на содержание в ней Регулятора (см. пример получения «клеточного экстракта») и диализовали ([20], с.111). После диализа наружный объем концентрировали, тестировали на содержание в нем Регулятора (см. пример получения «клеточного экстракта»). Полученный концентрат, содержащий Регулятор, применяли для получения лечебного эффекта (см. Пример №3 лечебного воздействия).

Пример получения «частично очищенного» Регулятора.

Для получения «частично очищенного» Регулятора из печени крысы. Начальный этап выделения «частично очищенного» Регулятора из печени крысы заключался в получении концентрированной «субклеточной» фракции, которую выделяли с применением процедур, описанных в «Примере получения субклеточной фракции» из печени крысы. Особенность состояла в том, что вместо диализа применяли метод ультрафильтрации ([20], cc.111, 112). Полученную концентрированную термостабильную фракцию из печени кролика, содержащую Регулятор, что было установлено путем тестирования (см. пример получения «клеточного экстракта»), подвергали фракционированию методом гель-фильтрации (колоночная хроматография низкого давления) [21]. Полученные в результате этой процедуры элюаты тестировали на содержание в них Регулятора (см. пример получения «клеточного экстракта»). Отбирали элюат, содержащий Регулятор («частично очищенный» Регулятор), который затем использовали для получения лечебного эффекта (см. Пример №1 лечебного действия).

Аналогично получали «частично очищенный» Регулятор из почки кролика и легкого крысы.

Пример получения очищенного Регулятора.

Было взято 20 кроликов породы «Шиншилла». Для получения «очищенного» Регулятора из печени кролика проводили процедуры, применяемые при выделении «частично очищенного» Регулятора из печени крысы, описанные выше. Полученную в результате гель-фильтрации концентрированную фракцию подвергали дальнейшему фракционированию с применением методов жидкостной колоночной хроматографии высокого давления (ВЭЖХ) [22]. Полученные в результате этой процедуры элюаты тестировали на содержание в них Регулятора (см. пример получения «клеточного экстракта»). Отбирали элюат, содержащий Регулятор, который затем подвергали доочистке с применением метода препаративного диск-электрофореза [23]. Полученную после диск-электрофореза фракцию («очищенный» Регулятор) применяли для получения лечебного эффекта (см. Примеры №№7, 9-12 лечебного действия и примеры №№8«А», 8«Б», 8«В» использования БАД, содержащую Регулятор).

На основании поведения Регулятора в вышеупомянутых препаративных процедурах (этапах выделения Регулятора) было сделано заключение о существовании у него суммарного отрицательного заряда в щелочной среде, о его слабой гидрофобности, водорастворимости и определен диапазон молекулярной массы от 500 до 15000 Да.

Необходимо отдельно отметить, что вышеприведенные характеристики Регулятора являются общими для Регуляторов, выделенных из любых тканей позвоночных животных любых биологических видов. Их молекулярная масса также попадает в интервал значений от 500 до 15000 Да.

Было проведено измерение поглощения очищенного термостабильного Регулятора из печени в ультрафиолетовой области спектра. При проведении измерений в водном растворе было установлено, что в области от 220 нм до 290 нм могут наблюдаться от одного до двух пиков поглощения. Количество пиков и положение их максимумов зависят от рН раствора, в котором производятся описываемые измерения.

На каждом этапе выделения Регулятора производилось тестирование его активности в разработанной тест-системе на суспензиях митохондрий по п.п.1-3 экспериментов выше. Критериями наличия такой активности являлось неотъемлемое сочетание трех эффектов у тестируемого Регулятора, а именно

- деэнергизация им митохондрий из гомологичной ткани животного по критерию снижения отношения АДФ/O до величин менее 1,8, вплоть до полного разобщения окислительного фосфорилирования.

- тканевая специфичность эффекта деэнергизации этим биологическим материалом митохондрий из гомологичной ткани животного, оцениваемая по тому же критерию;

- отсутствие у него видовой специфичности деэнергизующего эффекта в отношении гомологичной ткани животного, оцениваемая по тому же критерию.

Необходимо отметить, что во всех исследованных случаях (на всех использованных тканях животного) прослеживается единообразная тенденция в действии Регулятора на окислительное фосфорилирование высокоэнергизованных митохондрий из гомологичной ткани, а именно понижение им отношения АДФ/O. Однако величина падения этого соотношения может быть различной от измерения к измерению, что определяется условиями проводимого опыта. Поэтому при статистической обработке эмпирически полученных значений понижения АДФ/O у митохондрий, окисляющих сукцинат, от 2,0-1,8 в контроле, достоверными величинами деэнергизующего эффекта будут значения ниже 1,8, но чаще повторяются значения не более 1,7, вплоть до полного разобщения окислительного фосфорилирования. Нами были получены конкретные значения отношений АДФ/O, достигнутые с использованием Регулятора из печени (в среднем равно 0,5-0,2); Регулятора из почки (в среднем равно 0,6-0,1) и Регулятора из легкого (в среднем равно 1,0-0,5).

В предлагаемом изобретении впервые предложено применение Средства на основе Регулятора при лечении человека и животного. Также впервые показаны результаты лечебного действия Средства на основе Регуляторов из печени, почки и легкого на животных (Примеры №№1-6), и Средства на основе Регулятора из печени на человеке (в виде гомеопатического препарата (примеры №№7, 9), или в виде БАД (примеры №№8«А», 8«Б», 8«В»).

Выполнение конкретных примеров лечебного действия Регулятора из тканей печени на экспериментальных моделях болезней этих органов у животных.

Гепатопротекторное действие Средства с Регулятором, выделенным на различных этапах процесса получения (Примеры №№1 - 3).

Пример №1.

Частично очищенный Регулятор из печени крысы (0,5 мг/кг), вводимый интраперитонеально мышам за 20 мин до внутрибрюшинной инъекции гексенала, уменьшает продолжительность «гексеналового сна» у этих животных вдвое (с 40 мин в контроле, без введения Регулятора, до 20 мин - при введении Регулятора), что свидетельствует о его гепатопротекторном действии.

Пример №2.

Регулятор из печени крысы (лиофилизат водного экстракта) растворяли в физиологическом растворе из расчета 5 мг сухого вещества/мл и 1 мл полученного раствора вводили интраперитонеально мышам за 40 мин. до внутрибрюшинной инъекции гексенала. Введение Регулятора уменьшало продолжительность гексеналового сна с 40 мин в контроле (введение физиологического раствора вместо Регулятора) до 30 мин., что указывало на его гепатопротекторное действие.

Пример №3

Регулятор из печени крысы в составе термостабильной фракции растворимой Фазы клеток (иначе, субклеточная фракция) вводили интраперитонеально мышам из расчета 3 мл субклеточной фракции на 1 животное за 40 мин до внутрибрюшинной инъекции гексенала. Введение Регулятора в составе этой субклеточной фракции уменьшало продолжительность гексеналового сна с 30 мин в контроле (введение изотонической сахарозы с трис-буфером, рН 7,4 вместо Регулятора) до 20 мин, что указывало на его гепатопротекторное действие.

Пример №4. Стимуляция Средством на основе Регулятора восстановительного роста печени.

На экспериментальной модели регенерирующей печени крысы (частичная гепатэктомия по Хиггинсу и Андерсону) было показано, что двукратная внутрибрюшинная инъекция (0,5 мг/кг) частично очищенного Регулятора из печени крысы (через 4 и 12 ч после частичной гепатэктомии) ускоряет стимуляцию восстановительного роста этого органа в 1,3 раза по сравнению с вариантом опыта без введения Регулятора.

Выполнение конкретных примеров лечебного действия Регулятора из тканей почки и легкого на экспериментальных моделях болезней этих органов у животных.

Пример №5. Лечебное действие Средства на основе Регулятора из почки на лечение нефропатии у крыс.

Крысам-самцам массой 200-250 г вводили подкожно раствор пуромицин-аминонуклеозида (ПАН), (10 мг/мл) в дозе 20 мг/кг массы в течение 6-ти дней. За это время содержание белка в моче возрастало примерно в 5-6 раз. Затем животным ежедневно в течение 4-х дней вводили внутрибрюшинно раствор частично очищенного Регулятора из почки кролика (0,6 мг/кг массы). На 3-4 день после первого введения Регулятора количество мочи в белке обработанных Регулятором животных снижалось в 2,0-2,5 раза в сравнении с необработанными, но получавшими ПАН. На содержание белка в моче необработанных ПАН животных Регулятор влияния не оказывал.

Пример №6. Лечебное действие Средства на основе Регулятора из легкого крысы на лечение воспаления легкого у морских свинок

Действие Средства на воспалительный процесс в легких исследовалось на модели повреждения этого органа липополисахаридом (ЛПС). Морским свинкам внутрибрюшинно вводили ЛПС, выделенный из E.coli, в дозе 0,7 мг/кг. Уже через 3-4 ч после воздействия в альвеолах легких у животных наблюдались выражение признаки повреждения - отек, инфильтрация лейкоцитами, геморрагии. Через 24 ч погибало 50% морских свинок.

Частично очищенный Регулятор из легкого крысы вводили морским свинкам внутрибрюшинно в виде раствора в дозе 0,5 мг/кг веса через 1 ч и через 12 ч после воздействия ЛПС. Действие препарата оценивали по проценту выживших животных, а также по гистологическим изменениям в легких через 4-5 ч после введения Регулятора.

Было установлено, что введение Регулятора через 1 ч после воздействия ЛПС приводит к увеличению процента выживших животных с 50% (контроль без Регулятора) до 80%. Гистологическое исследование показало почти полное отсутствие геморрагии. Отек и инфильтрация лейкоцитов в альвеолах были слабо выражены.

Полученные результаты указывают на высокую эффективность Регулятора как средства лечения воспаления легкого.

Лечебные результаты (см. Примеры №№7 и 9), полученные с применением гомеопатического Средства (нано- и пикомоли), созданного на основе Регулятора из печени, находятся в полном согласии с результатами вышеописанных экспериментов (Пример №№1-3), в которых было показано гепатопротекторное действие Регулятора в терапевтических концентрациях (милли- и микромолярные).

Конкретные примеры лечебного действия Средства, содержащего Регулятор, на человека.

Пример №7. Патогенетическое лечение осложнений со стороны печени, возникших вследствие применения цитостатика, Средством на основе Регулятора из печени кролика в виде гомеопатического препарата.

Больная Л. 45 лет, лимфома 2-ой стадии, получает химиотерапию винкристином. Средство - (гомеопатический препарат), приготовленный на основе Регулятора из печени кролика (D6), назначали по 5-6 крупинок, которые рассасывались во рту до полного растворения, два раза в день - утром и вечером между приемами пищи. Лечение Средством начали во время первого курса противоопухолевой химиотерапии (2 недели), продолжали между курсами этой терапии, а также во время второго курса химиотерапии, всего в течение 2-х месяцев. Отмечено улучшение переносимости цитостатика, начиная со второго курса химиотерапии. Полностью отсутствовал диспептический синдром. Синдром анорексии был слабо выражен. Отсутствовали показания к применению противорвотных препаратов, без которых больные, как правило, не могут продолжать противоопухолевое лечение. Активность трансаминаз печени в крови, по сравнению с их повышенным уровнем до начала применения Средства, в результате проведенного лечения понизилась.

Пример № 8. Патогенетическое лечение осложнений со стороны печени, возникших вследствие применения цитостатика, Средством на основе Регулятора из печени кролика в виде БАД.

Пример «А». Больной Н., 56 лет, лимфома 2-й стадии, получает химиотерапию циклофосфаном, курс - 2 месяца, 1 инъекция в 5 дней. Средство - БАД, на основе частично очищенного Регулятора из печени кролика (20 мкг в 1 таблетке с носителем из пищевого сахара), назначали по 1 таблетке два раза в день между приемами пищи, утром и днем. Таблетки рассасывались во рту до полного растворения. Средство применялось ежедневно в течение всего курса химиотерапии. Для терапии циклофосфаном характерны побочные действия - анорексия, тошнота, рвота, желтуха и диспепсический синдром. Кроме того, как правило, развивается гепатит с повышением уровня трансаминаз. На фоне приема Средства в форме БАД у больного Н. полностью отсутствовали такие симптомы как тошнота, рвота, желтуха. Это позволило проводить противоопухолевое лечение без применения противорвотных препаратов. Анорексия и диспепсический синдром были слабо выражены. Через 1 месяц после начала лечения уровень трансаминаз был в норме. К концу курса лечения отмечено незначительное повышение уровня трансаминаз в крови. Билирубин, общий белок и альбумин крови оставались в пределах нормы в течение всего курса противоопухолевого лечения.

Пример «Б». Больная П., 52 лет, лимфома 2-й стадии, получает химиотерапию циклофосфаном, курс - 2 месяца, 1 инъекция в 5 дней. После первых двух инъекций циклофосфана у больной возникли осложнения - тошнота, сильная рвота и диспепсический синдром. Было обнаружено повышение уровня печеночных трансаминаз в крови в 2,2 раза.

Средство - БАД, на основе частично очищенного Регулятора из печени кролика (100 мкг в 1 таблетке с носителем из пищевого сахара), назначали по 1 таблетке два раза в день между приемами пищи, утром и днем, ежедневно. Таблетки рассасывались во рту до полного растворения. Средство начали применять на 9-й день после начала курса химиотерапии и до ее завершения. Отпала необходимость в применении противорвотных препаратов, т.к. вышеупомянутые осложнения отсутствовали в течение всего противоопухолевого лечения. Диспепсический синдром был выражен слабо. Через 1,5 мес. после начала химиотерапии уровень трансаминаз в крови был близок к норме и сохранялся в этих пределах до ее окончания. Общий белок, альбумин крови и билирубин также не отклонялись от нормальных величин.

Пример «В». Больной X., 60 лет, лимфома 2-й стадии, получает химиотерапию циклофосфаном, курс - 2 месяца, 1 инъекция в 5 дней. После первых трех инъекций циклофосфана у больной возникли осложнения - тошнота, диспепсический синдром. Было обнаружено повышение уровня печеночных трансаминаз в крови в 1,9 раза.

Средство - БАД, на основе частично очищенного Регулятора из печени кролика (10 мкГ в 1 таблетке с носителем из пищевого сахара), назначали по 1 таблетке два раза в день между приемами пищи, утром и днем, ежедневно. Таблетки рассасывались во рту до полного растворения. Средство начали применять на 17-й день после начала курса химиотерапии и до ее завершения. Диспепсический синдром полностью прекратился через 5 дней после начала применения БАД. Через 25 дней после начала химиотерапии уровень трансаминаз в крови был близок к норме и сохранялся в этих пределах до ее окончания. Общий белок, альбумин крови и билирубин также не отклонялись от нормальных величин.

Как известно, к диффузным заболеваниям печени относятся хронические гепатиты, гепатозы и циррозы различной этиологии. Для их патогенетического лечения применяются различные гепатопротекторы, созданные на основе природных физиологически активных соединений. К ним относятся «силимарин» [24] и «сибектан» [25, 26], основным действующим компонентом которых являются флаволигнаны, содержащиеся в «расторопше пятнистой». Для терапии циррозов используется также урсодезоксихолиевая кислота (УДКХ), вещество, относящееся к группе гидрофильных желчных кислот. Применение УДКХ позволяет несколько отдалить трансплантацию печени [27]. Еще одним патогенетическим средством, используемым для лечения диффузных заболеваний печени, является адеметионин - природное соединение, образующееся из метионина и аденозина, обладающее антиоксидантным и детоксицирующим действием. В случае алкогольного цирроза применение этого гепатопротектора позволяет повысить выживаемость больных [28].

О недостаточно высокой эффективности имеющихся в настоящее время патогенетических фармакологических средствах для лечения диффузных заболеваний печени и, в частности, цирроза, свидетельствует высокая смертность от этих заболеваний. Так, смертность только от гепатита В в мире занимает 9-е место, следуя непосредственно за заболеваниями легких и заметно опережая СПИД [29]. В экономически развитых странах цирроз печени входит в число шести основных причин смерти в возрасте 35-60 лет. Имеющиеся в распоряжении терапевтов патогенетические средства позволяют лишь замедлить развитие хронических заболеваний печени, но не излечить их [30].

Предлагаемое Средство показало эффективность при патогенетическом лечении различных диффузных заболеваний печени. Ниже приводим один из примеров такого его лечебного действия.

Пример № 9. Лечебное действие Средства на больных алкогольным циррозом.

Больной Д., 61 г. Страдает алкогольным циррозом в течение 5-ти лет. Сопутствующее заболевание - желчекаменная болезнь. Объективные данные: состояние средней тяжести, кожные покровы желтушные, склеры субиктеричные. Живот увеличен в размерах (асцит). Печень увеличена преимущественно за счет правой доли. Трансаминазы (АсТ, АлТ) в крови повышены, функциональные пробы печени снижены, билирубин выше нормы в 2 раза.

Средство в виде гомеопатического препарата, приготовленного на основе Регулятора из печени кролика (D6), назначали по 5-6 крупинок, которые рассасывались во рту до полного растворения, два раза в день - утром и днем между приемами пищи.

Через 1 месяц после начала приема полностью исчезли субъективные признаки заболевания - диспептическое расстройство, ощущение тяжести в правом подреберье. По данным биохимических анализов крови наблюдалось улучшение функций печени (снижение уровня билирубина, повышение уровня общего белка и альбуминов, улучшение коагулологических параметров, снижение цитолиза по данным АлТ и АсТ, стимуляции гемопоэза, снижение холестерина и креатинина). Размеры печени, селезенки, а также диаметр воротной и селезеночной вен оставался увеличенным. Через 2 месяца после начала приема препарата по данным ультразвукового обследования произошло уменьшение размеров печени и селезенки, уменьшение диаметра воротной и селезеночной вен. Биохимические анализы крови в пределах нормы. Цитолиз отсутствует.

Пример № 10. Патогенетическое лечебное действие Средства на основе Регулятора из печени кролика на больных хроническим гепатитом В.

Пример «А». Больной Ш., 23-х лет, два года назад перенес острый гепатит В. В настоящее время общее состояние ниже удовлетворительного. Трансаминазы (АсТ и АлТ) в крови умеренно повышены, функциональные пробы печени умеренно снижены. Печень значительно увеличена в размерах и выступает из подреберного края на 4-5 см. Диагноз - хронический гепатит В. Несмотря на получаемое лечение в течение двух лет (гепатопротекторы, диета, витаминотерапия) размеры печени не уменьшились.

Средство в виде аллопатического препарата с дозой вещества 10^-10 г/кг массы тела было назначено сублингвально, два раза в день через 1 ч после приема пищи - утром и вечером. Прием ежедневный.

Через 3 недели после начала лечения больной отметил улучшение общего самочувствия, улучшение аппетита, понижение утомляемости при физических нагрузках. Через 2 месяца лечения препаратом было установлено, что уровень печеночных трансаминаз в крови, а также функциональные пробы печени - в пределах нормы. При УЗИ размеры печени в пределах нормы.

Пример «Б». Больной У., 35 лет, 4,5 года назад перенес гепатит В. В течение 4-х лет на печень жалоб не было. 3 месяца назад перенес тяжелый грипп, после которого появились жалобы на тяжесть в правом подреберье, усиливающуюся при ходьбе, слабость и быструю утомляемость, отсутствие аппетита. Обследование показало, что уровень печеночных трансаминаз в крови повышен в 1,4 раза. Печеночные пробы близки к норме. Размеры печени увеличены (выступает из-под реберного края на 2-3 см). Диагноз: хронический гепатит в стадии обострения.

Средство в виде аллопатического препарата с дозой вещества 10^-6 г/кг массы тела было назначено сублингвально, два раза в день через 1 ч после приема пищи - утром и вечером.

Через 10 после начала лечения больной отметил улучшение общего самочувствия. Через три недели полностью исчезла тяжесть в правом подреберье, в том числе и при ходьбе и физических нагрузках, наблюдалось улучшение аппетита. Через 2 месяца лечения препаратом нормализовался уровень АсТ и АлТ в крови. По данным УЗИ размеры печени в норме, эхогенность однородная.

Пример № 11. Лечебное действие Средства на основе Регулятора из почки кролика на больных хроническим пиелонефритом.

Больная 3-ва Н., 43 г. В течение 12-ти лет страдает хроническим двусторонним пиелонефритом. Обострения 2-3 раза в течение года.

На момент начала лечения жалобы на боли в области почек, умеренное повышение артериального давления, головные боли, слабость, субфибрильную температуру. В последние 2-3 года отмечает потерю в весе.

В анализе мочи умеренная альбуминурия (белок 0,099 промилле), количество лейкоцитов - 25-32 в п/зр., единичные выщелоченные эритроциты. Относительная плотность мочи - 1018-1014. Креатинин крови 134 мкмоль/л, электролиты крови в пределах нормы.

При УЗИ почки несколько уменьшены в размерах, наблюдается затухание сигнала в области паренхимы почек. Чашечно-лоханочная система умеренно расширена, конкременты не обнаружены.

Был назначен препарат частично очищенного Регулятора из легкого кролика в виде лиофилизированного порошка, растворенного в воде перед употреблением (внутрь, 70 мг/сутки, в два приема, ежедневно до еды ). Через месяц больная отметила улучшение общего самочувствия, артериальное давление нормализовалось на уровне 140/85, появился аппетит, температура тела нормальная. После двух месяцев приема препарата белок в моче 0,033 промилле, лейкоциты 18-20 в п/зр. Относительная плотность мочи 1020-1022. Креатинин крови 118 мкмоль/л. При УЗИ отмечается нормализация размеров чашечно-лоханочная системы. Почки несколько уменьшены в размерах, наблюдается затухание сигнала в области паренхимы.

Пример №12. Лечебное действие Средства на основе Регулятора из легкого кролика на больных диффузным пневмосклерозом.

Б-ной Г., 49 лет. Три года назад перенес нижнедолевую пневмонию справа, лечился стационарно. При выписке: на контрольной рентгенографии легких диффузный пневмосклероз в области нижней доли. В течение 20 лет работает плотником. Жалобы на периодическое повышение температуры, кашель с гнойной мокротой, слабость с временной утратой трудоспособности. Лечился бронхолитиками, муколитиками и антибиотиками.

На момент начала лечения: питание умеренно снижено, умеренная отдышка в покое, ч.д. 20-22 в мин, температура 37,2. Кашель сухой, непродуктивный. В легких справа в заднее-базальных отделах единичные влажные хрипы. Показатели функции внешнего дыхания умеренно снижены.

Анализ крови: лейкоциты - 9,2 г/л, эритроциты - 3,9 т/л, гемоглобин - 112 г/л, СОЭ - 18 мм/час. Рентгенография: диффузный пневмосклероз в области нижней доли справа.

Частично очищенный и лиофилизированный Регулятор из легкого кролика растворяли перед приемом в воде. Назначали внутрь, в два приема по 3 мг, перед едой ежедневно, курсом в течение 3-х месяцев. После окончания курса отмечено улучшение общего самочувствия и работоспособности, прибавление в весе на 3 кг. Со слов больного температура нормализовалась через две недели после начала курса. Через два месяца уменьшились кашель и отдышка при физической нагрузке. Анализ крови: лейкоциты - 7,8 г/л, эритроциты - 4,2 т/л, гемоглобин - 132 г/л, СОЭ - 14 мм/час. Рентгенологические данные грудной клетки: без выраженной динамики.

На основании приведенных примеров могут быть сделаны нижеследующие выводы:

1. Достигнут поставленный технический результат, а именно - Средство, приготовленное на основе Регулятора из различных тканей животных и обладающее способностью тканеспецифически и при отсутствии видовой специфичности деэнергизовать митохондрии из гомологичной ткани в экспериментах «ин витро» оказывает эффективное лечебное, восстановительное и защитное действие на животное и человека.

В Примерах №№5, 6, 9, 11 и 12 показано, что Средство оказывает эффективное лечебное воздействие на патологию в одноименной с применяемым при лечении Регулятором ткани. Средство на основе Регулятора из почки эффективно предотвращает развитие экспериментальной нефропатии у животных (см. Пример №5), а также оказывает лечебный эффект на больных хроническим пиелонефритом (см. Пример №11). Средство на основе Регулятора из легкого эффективно предотвращает развитие экспериментальной пневмонии у животных (см. Пример №6) и обладает лечебным действием на диффузный пневмоскпероз у человека (см. Пример №12). Гомеопатическое Средство на основе Регулятора из печени излечивает алкогольный цирроз у человека (см. Пример №9). Аллопатический препарат на основе Регулятора из печени оказывает нормализующий эффект на печень у больных хроническим гепатитом В как по субъективным, так и по объективным показателям (см. Пример №10). Ускоряется восстановление клеточной массы ткани в случае удаления или гибели ее части - показана стимуляция Средством восстановительного роста печени как у животного (см. Пример №4 - частичная гепатэктомия печени), так и у человека (см. Пример №9 - гибель части печени при алкогольном циррозе).

Показано повышение неспецифической резистентности клеток ткани, подвергаемой какому-либо токсическому воздействию. Так Средство на основе Регулятора, выделенного из печени, является эффективным гепатопротектором (см. для животных Примеры №№1-3 и для человека Примеры №№7, 8«А», 8«Б» и 8«В»).

2. Данные о применении гомеопатического Средства на основе Регулятора из печени кролика при лечении патологии человека (защита печени при проведении противоопухолевой терапии - см. Примеры №№7 и 8«А», 8«Б» и 8«В», при лечении алкогольного цирроза - см. Пример №9) согласуются с гепатопротекторным действием Регулятора, обнаруженным на модели «гексеналового сна» в экспериментах, проведенных на мышах (см. Пример №1).

Кроме того, показана высокая эффективность применения Средства на основе Регулятора (частично очищенного, полученного из почки кролика) при лечении больных хроническим пиелонефритом (см. Пример №11) и Средства на основе Регулятора (частично очищенного, полученного из легкого кролика) при лечении больных диффузным пневмосклерозом (см. Пример №12).

3. Регуляторы из различных тканей животных разных биологических видов обладают тканеспецифичностью, отсутствием видовой специфичности, слабой гидрофобностью, водорастворимостью, они отрицательно заряжены при щелочном рН. Молекулярная масса каждого из них попадает в интервал значений от 500 до 15000 Да. Они способны тканеспецифически понижать отношение АДФ/O до значения менее 1,8, вплоть до полного разобщения окислительного фосфорилирования.

4. Положительное действие Средства проявляется у животных в аллопатических дозах (см. Примеры №№5 и 6). У человека положительное действие Средства наблюдается не только в аллопатических дозах (см. Пример №8 и 10), но и в гомеопатических дозах (см. Примеры №№7 и 9).

5. Гепатопротекторное действие Средства на основе Регулятора из печени является одинаковым по своему проявлению вне зависимости от вида вводимой фракции (экстракт (см. Пример №2), субклеточная фракция (см. Пример №3), частично очищенный Регулятор (см. Примеры №№1 и 8), а также очищенный Регулятор в гомеопатическом препарате (Пример №7).

6. Данные о нормализации структуры и функции печени при циррозе под действием средства на основе Регулятора из одноименной ткани (2-х месячный курс) свидетельствуют о его выраженных лечебных свойствах (см. Пример № 9).

7. Приводимые примеры не исчерпывают все возможности применения Средства на основе Регулятора для лечения болезней человека. Так, Средство на основе регулятора из почки кролика обладает способностью лечить хронические воспалительные процессы почки человека, а Средство на основе Регулятора из легкого кролика обладает способностью сокращать продолжительность лечения воспаления легкого человека.

Промышленная применимость

Предложенное Средство (варианты) и предложенное применение Средства при лечении заболеваний (варианты) могут быть использованы для лечения любых заболеваний, сопровождающихся патологическими изменениями функций и структуры клеток вне зависимости от причины, вызвавшей это заболевание. При этом лечению могут поддаваться трудноизлечимые хронические воспалительные и иные деструктивные процессы и даже неизлечимые в настоящее время заболевания, сопровождающиеся глубокими системными нарушениями структуры и функций органов, например цирроз печени. Кроме того, Средство может быть с успехом применено в комплексной терапии (химиотерапии) онкозаболеваний, а также в терапии других заболеваний для снижения нежелательных побочных эффектов применяемых известных способов лечения, включая лекарственные отравления.

Источники информации

1. Терапевтическое применение янтарной кислоты. Под ред. М.Н.Кондрашовой. Пущино, изд. АН СССР, 1976, с.234.

2. Чайковская Е.А., Гришо О.П. Сравнительное изучение биодоступности коэнзима Q10 в различных лекарственных формах. Вестник РУДН, серия Медицина, 2000, №2, с.71-73.

3. Школьник М.А., Буторов И.В. Показатели окислительного метаболизма и антиоксидантной защиты у больных хроническим обструктивным бронхитом, осложненным хроническим легочным сердцем, и их изменения в процессе лечения. Пульмонология, 2002, т.12, №4, с.45-49.

4. Bullough W.S., 1973. The Chalones: A Review Natl. Cancer Inst. Monogr., v.38, p.5-15.

5. Ямскова В.П., Модянова Е.А. Резникова М.М., Маленков А.Г. Высокоактивные тканевоспецифические адгезионные факторы печени и легкого крыс. Мол. биология, 1977, т.11, вып.5, с.1147-1154.

6. Морозов В.Г. Хавинсон В.Х. Новый класс биологических регуляторов многоклеточных систем - цитомедины. Успехи совр. Биол., т.96, 1983, вып.3[6], с.339-352.

7. Морозов В.Г., Рыжак Г.А., Малинин В.В., в кн. «Цитамины - биорегуляторы клеточного метаболизма», СПб, 2001, с.102.

8. Aardal N.Р., Laerum О, D., Paukowits W.R., Maurer H.R. Inhibition of agar colony formation by partially purified Granulocyte extracts [Chalone]. Virchows Arch. Abt. B. Cell Path., 1977, Bd 24, § 27-39.

9. Неустроев Г.В. Влияние эритроцитарного кейлона на постсинтетический период митотического цикла клеток эритробластического ряда костного мозга мышей. Арх. Анат., 1980, №7, с.69-73.

10. Маленков А.Г, Модянова Е.А., Ямскова В.П. Тканеспецифические адгезионные факторы - G₁-кейлоны. Биофизика, 1977, Т.22, N1, с.156-157.

11. Gonzalez R., Verly W. G. Purification of an inhibitor of DNA synthesis in mammary cells.

Europ. J. Cancer., 1978, vol. 14, N 6, p. 689-697.

12. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Способ получения белковой пищевой добавки. Пат. 2075944 РФ от 27.03.1997, №9.

13. Lehninger. Principles of biochemistry. Worth Pullisher Inc. N.Y. - London, 1982, p.546.

14. Элбакидзе Г.М., Ливанова Л.М. О тканеспецифическом разобщителе окислительного фосфорилирования митохондрий. Бюлл. Эксперим. Биол. Мед., 1977, №7, с.32-35.

15. Скулачев В. П.Трансформация энергии в биомембранах. М.: Наука, 1972, с.5, с.31-32, с.45-53.

16. Элбакидзе Г.М., Ливанова Л.М. Изучение видовой специфичности действия тканеспецифического разобщителя окислительного фосфорилирования митохондрий из печени крысы. Изв. АН СССР, Сер. Биол., 1981, №1, с.151-153.

17. Элбакидзе Г.М. Тканеспецифические разобщители окислительного фосфорилирования митохондрий из сердца, почки, тимуса и печени крысы. Бюлл. Эксперим. Биол. Мед., 1979, т.87, №2, с.149-151.

18. Ливанова Л.М., Элбакидзе Г.М. Тканеспецифические разобщители окислительного фосфорилирования митохондрий из клеток печени млекопитающего, птицы, земноводного и рыбы. - Изв. АН СССР, Сер. биол., 1980, №2, с.285-289.

19. Элбакидзе Г.М., Федоров В.П., Элбакидзе И.М. Индукция β- и γ-состояний комутонной регуляции дыхания и окислительного фосфорилирования митохондрий из печени и почки крысы ионами кальция. - Изв. АН СССР, Сер. биол., 1986, №3, с.400-409.

20. Методы практической биохимии, ред. Б.Уильяме, К.Уилсон. М.: Мир, 1978 г., 268 с.

21. Детерман Г. Гель хроматография. М.: Мир, 1979, 252 с.

22. Стыскин Е.Л., Ициксон Л.Б., Брауде Е.В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография, 1986, Элсико, 203 с.

23. Маурер Г. Диск-электрофорез. М.: Мир, 1971, 247 с.

24. Ferenci P., Dracosics В., Dittrich H. et al. Randomized controlled trial of silimarin treatment in patients wih currhosis of the liver. J. Hepatol, 1989, 9, p.105-113.

25. Saba P., Galeone F., Salvadonni F. et al. Therapeutische Wirkung von Silimarin bei duroh Psyhopharmaka vezursachten chornischen Hepalopatien Gazz med. Ital. 1976, 135(4), p.236-251.

26. Visemann R. Physical interaction of silymarin components with synthetic monolayeis In Aktuelle Hepatologie Int. Symp., 1978, Koln, Hans Verl-Kantor, Lubeck, 1979.

27. Heathcote E.J., Lindor K.D., Poupon R., et.al. Combined analysis of French, American and Canadian randomized controlled trials of ursodeoxycholic acid therapy.

Gastroenterology 1995, v.108, A108.

28. Буеверов А.О. Место гепатопротекторов в лечении заболеваний печени. Болезни Органов Пищеварения, Том 3, №1, 2001, с.16-18.

29. «Диагностика и лечение диффузных заболеваний печени» Методическое пособие М., 2003, МЗ РФ.

30. Ивашкин В.Т., Буеверов А.О. Настоящее и будущее клинической гепатологии. Болезни Органов Пищеварения, т.4, №1, 2002. с.13-15.

Изобретение относится к области медицины, а именно к терапии заболеваний, обусловленных нарушением клеточного гомеостаза. Для этого из тканей, гомологичных тканям, являющимся объектом лечебного воздействия, выделяют средство, содержащее вещество, являющееся слабогидрофобным, водорастворимым, отрицательно заряженным при щелочном рН, с молекулярной массой от 500 Da до 15000 Da, обладающее способностью тканеспецифически понижать отношение фосфорилированного аденозиндифосфата к количеству атомарного кислорода, затраченного высокоэнергизованными митохондриями в ходе окислительного фосфорилирования. Введение этого вещества обеспечивает эффективное лечение различных заболеваний за счет тканеспецифической оптимизации функций митохондрий. 6 н. и 12 з.п. ф-лы.

1. Применение средства, содержащего вещество, являющееся слабогидрофобным, водорастворимым, отрицательно заряженным при щелочном рН, с молекулярной массой от 500 до 15000 Da, выделенное из тканей, гомологичных тканям, являющимся объектом лечебного воздействия, и обладающее способностью тканеспецифически понижать отношение фосфорилированного аденозиндифосфата к количеству атомарного кислорода, затраченного высокоэнергизованными митохондрями в ходе окислительного фосфорилирования, для тканеспецифического регулирования митохондриальных процессов при лечении заболеваний.2. Применение по п.1, отличающееся тем, что в качестве средства используют экстракт или субклеточную фракцию гомологичной ткани.3. Применение по пп.1 и 2, отличающееся тем, что средство вводят перорально или в виде инъекции.4. Применение средства, содержащего вещество, являющееся слабогидрофобным, водорастворимым, отрицательно заряженным при щелочном рН, с молекулярной массой от 500 до 15000 Da, выделенным из тканей, гомологичных тканям, являющимся объектом лечебного воздействия, и обладающее способностью тканеспецифически понижать отношение фосфорилированного аденозиндифосфата к количеству атомарного кислорода, затраченного высокоэнергизованными митохондрями в ходе окислительного фосфорилирования, приготовленного по гомеопатической технологии и имеющего гомеопатическое разведение D6, для тканеспецифического регулирования митохондриальных процессов при лечении заболеваний.5. Применение по п.4, отличающееся тем, что средство вводят перорально или сублингвально.6. Применение по пп.4 и 5, отличающееся тем, что при лечении цирроза печени упомянутое средство вводят не менее двух месяцев.7. Применение по пп.4 и 5, отличающееся тем, что при лечении поражений печени, обусловленных противоопухолевой и иной токсической химиотерапией, вводят упомянутое средство во время проведения химиотерапии, между сеансами химиотерапии и при необходимости после ее завершения в зависимости от достигнутых результатов.8. Применение средства, содержащего вещество, являющееся слабогидрофобным, водорастворимым, отрицательно заряженным при щелочном рН, с молекулярной массой от 500 до 15000 Da, выделенным из тканей, гомологичных тканям, являющимся объектом лечебного воздействия, и обладающее способностью тканеспецифически понижать отношение фосфорилированного аденозиндифосфата к количеству атомарного кислорода, затраченного высокоэнергизованными митохондрями в ходе окислительного фосфорилирования, в составе биологически активной пищевой добавки для тканеспецифического регулирования митохондриальных процессов при лечении заболеваний.9. Применение по п.8, отличающееся тем, что в состав биологически активной добавки входит вещество в эффективной дозе 10-100 мкг и носитель.10. Применение по п.9, отличающееся тем, что носителем биологически активной добавки является или сахароза, или сорбит, или пищевой сахар, или любые другие нетоксичные ингредиенты.11. Применение по п.10, отличающееся тем, что биологически активную добавку вводят перорально между приемами пищи два раза в день.12. Применение по п.10, отличающееся тем, что при лечении поражений печени, обусловленных противоопухолевой и иной токсической химиотерапией, упомянутую биологическую пищевую добавку вводят во время проведения химиотерапии, между сеансами химиотерапии и при необходимости после ее завершения в зависимости от достигнутых результатов.13. Средство тканеспецифического регулирования митохондриальных процессов, которое характеризуется тем, что содержит вещество, являющееся слабогидрофобным, водорастворимым, отрицательно заряженным при щелочном рН, с молекулярной массой от 500 до 15000 Da, выделенное из тканей, гомологичных тканям, являющимся объектом лечебного воздействия, и обладающее способностью тканеспецифически понижать отношение фосфорилированного аденозиндифосфата к количеству атомарного кислорода, затраченного высокоэнергизованными митохондриями в ходе окислительного фосфорилирования.14. Средство по п.13, отличающееся тем, что этим средством является экстракт или субклеточная фракция гомологичной ткани.15. Средство тканеспецифического регулирования митохондриальных процессов, которое представляет собой гомеопатический препарат, имеющий гомеопатическое разведение D6 вещества, являющегося слабогидрофобным, водорастворимым, отрицательно заряженным при щелочном рН, с молекулярной массой от 500 до 15000 Da, выделенным из тканей, гомологичных тканям, являющимся объектом лечебного воздействия, и обладающий способностью тканеспецифически понижать отношение фосфорилированного аденозиндифосфата к количеству атомарного кислорода, затраченного высокоэнергизованными митохондриями в ходе окислительного фосфорилирования.16. Средство тканеспецифического регулирования митохондриальных процессов, представляющее собой биологически активную пищевую добавку с веществом, являющимся слабогидрофобным, водорастворимым, отрицательно заряженным при щелочном рН, с молекулярной массой от 500 до 15000 Da, выделенным из тканей, гомологичных тканям, являющимся объектом лечебного воздействия, и обладающим способностью тканеспецифически понижать отношение фосфорилированного аденозиндифосфата к количеству атомарного кислорода, затраченного высокоэнергизованными митохондриями в ходе окислительного фосфорилирования.17. Средство по п.16, отличающееся тем, что в состав биологически активной добавки входит вещество в эффективной дозе 10-100 мкг и носитель.18. Средство по п.17, отличающееся тем, что в биологически активной добавке в качестве носителя использованы сахароза, или сорбит, или пищевой сахар, или любые другие нетоксичные ингредиенты.