СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ К ЖИДКОМУ КОМБИНИРОВАННОМУ БАКТЕРИОФАГУ Российский патент 2007 года по МПК G01N33/48 C12Q1/02 C12N1/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано в процессе лечения нагноительных осложнений раневого процесса.

Известен способ определения фагочувствительности путем посева выделенных культур возбудителей на плотные питательные среды и дальнейшего нанесения соответствующего бактериофага (Перепанова Т.С. Бактериофаготерапия урологических инфекций. Методические рекомендации №96/53. // Т.С.Перепанова, О.С.Дарбеева, Г.А.Котлярова и др. - М., 1996, - 7 с.).

Этот метод предполагает предварительное выделение и идентификацию чистых культур из раневого отделяемого, что удлиняет сроки исследования до 3-5 суток.

Существенным недостатком метода является также большой расход питательных сред, стерильной лабораторной посуды и его трудоемкость.

Кроме того, такой метод определения фагочувствительности чистых культур не учитывает взаимодействие бактерий разных видов в раневом сообществе.

Изобретение направлено на решение задачи: сокращение сроков исследования при высокой эффективности способа.

Технический результат: возможность раннего начала целенаправленной бактериофаготерапии.

Указанные задачи решаются путем взаимодействия взятого из патологического очага цельного раневого отделяемого на плотной питательной среде с жидким комбинированным бактериофагом, инкубации посева и учета результатов по отсутствию роста бактерий без выделения чистых культур и раздельного определения их чувствительности к указанному бактериофагу.

Способ осуществляют следующим образом.

После забора цельного раневого отделяемого к нему добавляют 3-5 мл физиологического раствора, гомогенизируют, центрифугируют 5-7 минут при 1500 об/мин на центрифуге ОПн - 3 для осаждения крупных частиц раневого детрита. Затем супернатант засевают шпателем в количестве 0,1-0,2 мл на плотную питательную среду, например кровяной агар. Спустя 10 минут на среду наносят 0,01-0,05 мл жидкого комбинированного бактериофага, например «Секстафаг», выпускаемый ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ филиал «Пермское НПО «Биомед». Посевы инкубируют при температуре 37°С в течение 18-24 часов. Отсутствие роста бактерий в зоне нанесения бактериофага (наличие стерильного пятна) свидетельствует о чувствительности присутствующей микрофлоры к жидкому комбинированному бактериофагу.

Примеры конкретного выполнения.

Пример 1. Больной Б-ов, 25 лет, поступил в клинику с диагнозом: острый панкреатит, тяжелое течение, инфицированный панкреонекроз. Забрюшинная флегмона слева. До поступления был оперирован в районной больнице, где выполнена лапаротомия, санация и дренирование сальниковой сумки, сформирована бурсооментостома. В послеоперационном периоде отмечалось обильное гнойное отделяемое из бурсооментостомы. К взятому цельному раневому отделяемому из бурсооментостомы (0,2 мл) добавили 3 мл физиологического раствора, произвели гомогенизацию и центрифугирование при 1500 об/мин в течение 5 минут для осаждения крупных частиц детрита. Затем супернатант засеяли шпателем в количестве 0,1 мл на плотную питательную среду. Спустя 10 минут на среду нанесли 0,05 мл жидкого комбинированного бактериофага. Посев инкубировали при температуре 37°С в течение 18 часов. При оценке результатов отметили отсутствие роста в зоне нанесения бактериофага, что свидетельствовало о чувствительности микрофлоры к жидкому комбинированному бактериофагу. После этого в комплекс лечения сразу был включен жидкий комбинированный бактериофаг в виде ежедневного промывания бурсооментостомы и наложения повязок с ним. На 5-е сутки отмечалась нормализация температуры тела и снижение лейкоцитоза. При бактериологическом исследовании раневого отделяемого выделены культуры Pseudomonas aeruginosa и Klebsiella spp., чувствительные к соответствующим видовым бактериофагам и к жидкому комбинированному бактериофагу. Микробиологический мониторинг (7-е сутки) свидетельствовал о снижении уровня микробной обсемененности бурсооментостомы в 10 раз. К 15-м суткам появились признаки очищения бурсооментостомы и отмечалось дальнейшее снижение концентрации микроорганизмов в гнойном отделяемом.

Пример 2. Больная С-на, 37 лет, диагноз: инфицированная рана левой голени. К гною из раны в количестве 0,15 мл добавили 5 мл физиологического раствора. Проведена гомогенизация и центрифугирование (7 минут, 1500 об/мин) для осаждения крупных частиц детрита. В дальнейшем супернатант засеяли шпателем в количестве 0,2 мл на плотную питательную среду. Через 10 минут на среду нанесли 0,01 мл жидкого комбинированного бактериофага. Посев инкубировали 24 часа при температуре 37°С. В зоне нанесения жидкого комбинированного бактериофага отметили отсутствие роста бактерий (наличие стерильного пятна). Сразу в комплекс лечения включили жидкий комбинированный бактериофаг в виде ежедневной обработки раны и наложения повязок с ним. По результатам проведенного классического бактериологического исследования из раневого отделяемого выделена культура Staphylococcus epidermidis, чувствительная к стафилококковому бактериофагу и жидкому комбинированному бактериофагу. К 3 суткам согласно клиническим и бактериологическим критериям рана очистилась. Отмечался рост грануляций и краевая эпителизация.

Положительный эффект: предлагаемый способ экономичен, сокращает расход питательных сред в 2-6 раз, не требует сложного подготовительного этапа, менее трудоемок. Способ может применяться как экспресс-метод в любых лечебных учреждениях. Применение способа дает выигрыш во времени для начала целенаправленной бактериофаготерапии, так как исследование занимает не более 18-24 часов по сравнению с 72-96 часами в способе-прототипе.

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии. Сущность способа определения чувствительности микроорганизмов к жидкому комбинированному бактериофагу заключается в том, что цельное раневое отделяемое разбавляют физиологическим раствором, гомогенизируют и центрифугируют для осаждения крупных частиц раневого детрита. Затем определяют чувствительность полученного супернатанта к жидкому комбинированному бактериофагу в течение 18-24 часов путем взаимодействия с жидким комбинированным бактериофагом на питательной среде. Использование способа дает возможность раннего начала целенаправленной бактериофаготерапии и позволяет сократить сроки исследования при высокой эффективности способа.

Способ определения чувствительности микроорганизмов к жидкому комбинированному бактериофагу путем взаимодействия раневой микрофлоры на питательной среде с жидким комбинированным бактериофагом, инкубации смеси и учета результатов по отсутствию роста бактерий, отличающийся тем, что в качестве исследуемого материала берут цельное раневое отделяемое, разбавляют физиологическим раствором, гомогенизируют и центрифугируют для осаждения крупных частиц раневого детрита, после чего определяют чувствительность полученного супернатанта к жидкому комбинированному бактериофагу в течение 18-24 ч.