Питательная среда для культивирования микроорганизмов Российский патент 2023 года по МПК C12N1/20 

Изобретение относится к области биотехнологии, микробиологии, и может быть использовано при приготовлении питательных сред, предназначенных для практического применения в лечебно-профилактических учреждениях, при лабораторной диагностике возбудителей инфекции и определения их отношения к антимикробным препаратам.

В настоящее время актуальной проблемой является использование в клинической микробиологии питательных сред отечественного производства, позволяющих достаточно точно проводить идентификацию микроорганизмов. Отсутствие необходимого количества отечественных питательных сред для диагностики вынуждает потребителей к повторам исследования, что отражается на качестве исследования и себестоимости анализа.

Известна питательная среда для культивирования микроорганизмов, содержащая основу вторичного продукта кислотного гидролизата говяжьего мяса, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный, натрий сернистокислый, агар микробиологический и дистиллированную воду при заданном содержании компонентов (Патент РФ 2681499, МПК C12N 1/20, C12R 1/01, публ. 2019).

Недостатком этой питательной среды является высокая себестоимость, нестабильность результатов по интенсивности роста, чувствительности к антибактериальным препаратам и слабая чувствительность бактериофагам.

Известна питательная среда для культивирования микроорганизмов, которая содержит основу вторичного продукта кислотного гидролизата говяжьего мяса, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный, натрий сернистокислый, агар микробиологический и дистиллированную воду при заданном содержании компонентов (Мюллера-Хинтона), https://himedialabs.ru/m173-m391?).

Данная питательная среда имеет ряд недостатков: выпускается зарубежными производителями или отечественными, но из импортных компонентов, имеет высокую цену, что ограничивает широту использования. Не обеспечивает получение достоверных результатов при постановке чувствительности ряда микроорганизмов, в частности, бактериофагов.

Наиболее близкой по составу является питательная среда, содержащая кислотный гидролизат казеина, мясной экстракт, бактериологический агар, соль двухвалентного металла. Кроме того, в состав питательной среды входят - дефибринированная лошадиная кровь, никотинамидадениндинуклеотид, дрожжевой экстракт и гемоглобин. В качестве соли двухвалентных металлов предложены: кальций D-глюконат, хлорид магния, хлорид марганца и сульфат цинка (Косилова И.С. «Питательная среда для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам». Диссер. на соискание уч. ст. к.б.н., Оболенск - 2021 с. 48-49).

Недостатком этой питательной среды является многокомпонентность, значительно увеличивающая стоимость питательной среды, возможность использования преимущественно только при постановке антибиотикочувствительности.

Задачей предлагаемого изобретения является устранение указанных недостатков, создание отечественной питательной среды, предназначенной для выделения широкого спектра микроорганизмов, обеспечение постановки антибиотико- и фагочувствительности с высокой степенью достоверности результатов, доступная стоимость.

Предлагаемая питательная среда для определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам, содержит кислотный гидролизат казеина, мясной экстракт, бактериологический агар, хлорид натрия, соль двухвалентного магния, в качестве которой используют сульфат магния при следующем соотношении компонентов в гР:

солянокислотный гидролизат казеина 10-12 мясной экстракт 11-14 агар бактериологический 12-15 сульфат магния 1,2-1,4

То, что в составе питательной среды используют предложенные прописи среды, позволяет посредством отработки рационального качественного и количественного состава, повысить качество питательной среды, а именно: повысить бактериочувствительность, фагочувствительность. Также предлагаемая питательная среда имеет широки спектр применения для выделения любого вида микроорганизмов. Особенно эффективно ее использования для постановки антибиотикочувствительности и чувствительности к бактериофагам за счет сбалансированностью компонентного состава среды.

Предлагаемую питательную среду готовят следующим образом.

Взвешивают солянокислотный гидролизат казеина, мясной экстракт, агар бактериологический и сульфат магния в заданных соотношениях в сухом виде, перемешивают, и по стандарту помещают в герметично закрытую упаковку и хранят в сухом, защищенном от света месте при температуре от 2 до 25°С в течение всего срока годности (2 года).

Перед началом использования питательной среды в нее добавляют 1 литр дистиллированной воды, тщательно перемешивают до полного растворения ингредиентов. Полученную среду нагреваю до кипения, а затем стерилизуют методом автоклавирования и разливают по чашкам Петри.

На предлагаемой питательной среде, состоящей из солянокислотный гидролизат казеина - 11 г, мясной экстракт - 11 г, агар бактериологический - 12 г, сульфат магния - 1,2 г, были проверены ростовые, морфологические свойства, чувствительность к антибиотикам и бактериофагам, с использованием, следующих тест-штаммов: Staphylococcus aureus ATCC® 25923 Esherichia coli ATCC® 25922, Enterococcus faecalis ATCC® 29212, Pseudomonas aeruginosa ATCC^® 27853, при посеве инокулята 10-100 КОЕ после аэробной инкубации при 37±2°С в течение 20 часов. Выросшую на питательной среде культуру каждого тест-штамма проверяют визуально на чистоту роста и отсутствие диссоциации, а затем проводят постановку на антибиотикочувствительность и фагочувствительность.

Для контроля качества испытуемой среды проводился посев на универсальную среду Мюллера-Хинтона производства Испания, разрешенную к применению на территории РФ (среда сравнения). Результаты экспериментальной работы представлены в таблице №1 и №2

Использование предлагаемой питательной среды показано на конкретных примерах.

Пример 1.

Для приготовления предлагаемой питательной среды взяли солянокислотный гидролизат казеина - 10 г, мясной экстракт - 11 г, агар бактериологический - 12 г, сульфат магния - 1,2 г, добавили 1 литр дистиллированной воды, тщательно перемешали до полного растворения ингредиентов. Полученную среду стерилизовали методом автоклавирования и разлили по чашкам Петри

Для проверки качества среды на предлагаемую среду был проведен посев клинического материала, полученный из раневого отделяемого пациента.

Посев проводился стандартным методом. После термостатирования засеянных чашек через 18 часов был проведен анализ результатов. На чашках с посевом клинического материала была выделена культура Pseudomonas aeruginosa с типичными морфологическими признаками (колонии желто-зеленого цвета). При постановке чувствительности к антибиотикам были получены значения диаметров зон подавления роста, соответствующие установленной нормы производителей дисков. При постановке чувствительности клинических штаммов к соответствующим бактериофагам были получены зоны лизиса с единичными колониями вторичного роста.

Пример 2.

Для приготовления предлагаемой питательной среды брали солянокислотный гидролизат казеина - 11 г, мясной экстракт - 12 г, агар бактериологический - 13 г, сульфат магния - 1,3 г, добавляют 1 литр дистиллированной воды, тщательно перемешивали до полного растворения ингредиентов. Провели стерилизацию полученную среду методом автоклавирования и разлили по чашкам Петри

На предлагаемую среду был проведен посев клинического материала, полученный из отделяемого брюшной полости пациента. Посев проводился стандартным методом. После термостатирования засеянных чашек через 18 часов был проведен анализ результатов. На чашках с посевом клинического материала были выделены культуры Escherichia coli, и Enterococcus faecalis с типичными морфологическими признаками.

При постановке чувствительности к антибиотикам были получены значения диаметров зон подавления роста соответствующие установленной нормы производителей дисков. При постановке чувствительности клинических штаммов к соответствующим бактериофагам были получены зоны лизиса с единичными колониями вторичного роста.

Пример 3.

Для приготовления предлагаемой питательной среды взяли солянокислотный гидролизат казеина - 12 г, мясной экстракт - 13 г агар бактериологический - 15 г, сульфат магния - 1,4 г, добавили 1 литр дистиллированной воды, тщательно перемешали до полного растворения ингредиентов. Полученную среду стерилизовали методом автоклавирования и разлили по чашкам Петри

На предлагаемую среду был проведен посев клинического материала, полученный из отделяемого гайморовой полости пациента. Посев проводился стандартным методом. После термостатирования засеянных чашек через 18 часов был проведен анализ результатов. На чашках с посевом клинического материала были выделена культура Staphylococcus aureus с типичными морфологическими признаками. При постановке чувствительности к антибиотикам были получены значения диаметров зон подавления роста соответствующие установленной нормы производителей дисков. При постановке чувствительности клинических штаммов к соответствующим бактериофагам были получены зоны лизиса с единичными колониями вторичного роста.

Пример 4.

Для приготовления предлагаемой питательной среды в смесь солянокислотного гидролизата казеина - 12 г, мясного экстракта - 11 г, агара бактериологического - 12 г, сульфат магния - 1,2 г, добавили 1 литр дистиллированной воды, тщательно перемешали до полного растворения ингредиентов. Полученную среду простерилизовали и разлили по чашкам Петри

Для проверки качества среды на предлагаемую среду был проведен посев клинического материала, полученный из отделяемого прямой кишки пациента. Посев проводился стандартным методом. После термостатирования засеянных чашек через 18 часов был проведен анализ результатов. На чашках с посевом клинического материала были выделены культуры Esherichia coli, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus с типичными морфологическими признаками. При постановке чувствительности к антибиотикам были получены значения диаметров зон подавления роста соответствующие установленной нормы производителей дисков. При постановке чувствительности клинических штаммов к соответствующим бактериофагам были получены зоны лизиса с единичными колониями вторичного роста.

Пример 5.

Для приготовления предлагаемой питательной среды взяли солянокислотный гидролизат казеина - 10 г, мясной экстракт - 14 г, агар бактериологический - 14 г, сульфат магния - 1,4 г, добавляют 1 литр дистиллированной воды, тщательно перемешали до полного растворения ингредиентов. Полученную среду стерилизовали и разлили по чашкам Петри.

Для проверки качества среды на предлагаемую среду был проведен посев клинического материала, полученный из отделяемого прямой кишки пациента. Посев проводился стандартным методом. После термостатирования засеянных чашек через 18 часов был проведен анализ результатов. На чашках с посевом клинического материала были выделены культуры Esherichia coli, Enterococcus faecalis, с типичными морфологическими признаками. При постановке чувствительности к антибиотикам были получены значения диаметров зон подавления роста соответствующие установленной нормы производителей дисков. При постановке чувствительности клинических штаммов к соответствующим бактериофагам были получены зоны лизиса отражающие высокую чувствительность.

Таким образом заявленная питательная среда удовлетворяет требованиям на основании стабильности основных биологических свойств, скорости роста, чувствительности, антибиотико- и фагочувствительности.

Указанные характеристики предлагаемой среды в совокупности ее компонентов повышают эффективность диагностики клинических исследований. Универсальность среды обеспечивает как рост микроорганизмов, так и постановку антибиотико- и фагочувствительность.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предлагаемая питательная среда для определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам содержит кислотный гидролизат казеина, мясной экстракт, бактериологический агар, хлорид натрия, соль двухвалентного магния, в качестве которой используют сульфат магния при следующем соотношении компонентов в гР: солянокислотный гидролизат казеина 10-12; мясной экстракт 11-14; агар бактериологический 12-15; сульфат магния 1,2-1,4. То, что в составе питательной среды используют предложенные прописи среды, позволяет посредством отработки рационального качественного и количественного состава, повысить качество питательной среды, а именно: повысить бактериочувствительность, фагочувствительность. Также предлагаемая питательная среда имеет широкий спектр применения для выделения любого вида микроорганизмов. Особенно эффективно ее использование для постановки антибиотикочувствительности и чувствительности к бактериофагам за счет сбалансированности компонентного состава среды. 2 табл., 4 пр.

Питательная среда для культивирования микроорганизмов, содержащая кислотный гидролизат казеина, мясной экстракт, бактериологический агар, соль двухвалентного магния, хлорид натрия, отличающаяся тем, что среда содержит в качестве соли магния сульфат магния при следующем соотношении компонентов в г/л:

солянокислотный гидролизат казеина 10-12 мясной экстракт 11-14 агар бактериологический 12-15 сульфат магния 1,2-1,4

с последующим добавлением дистиллированной воды до 1 л.