СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ АЦЕТИЛСАЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТОЙ ПРИ L-NAME ИНДУЦИРОВАННОМ ДЕФИЦИТЕ ОКСИДА АЗОТА Российский патент 2009 года по МПК A61K31/185 A61K31/616 A61P9/00 

Наиболее близким к заявленному решению является способ вазопротекторного воздействия с помощью аспирина, относящегося к антиагрегантам, изученный in vitro, описанный D. Taubert, R. Berkels, N. Grosser, H. Schroder, D. Grundemann and E. Schömig «Aspirin induces nitric oxide release from vascular endothelium: a novel mechanism of action», Br. J. Pharmacol., V.143(1), P.159-165, 2004 г., который заключается в увеличении содержания оксида азота в эндотелии коронарных артерий свиней и увеличении активности эндотелиальной NO-синтазы в культуре эндотелиальных клеток пупочной вены человека, не связанного с торможением активности циклооксигеназы, но отсутствующим при введении блокаторов индуцибельной (N^G-monomethyl-L-arginine-L-NMMA) и эндотелиальной (N-нитро-L-аргинин-метилового эфира-L-NAME) NO-синтаз.

Основным недостатком способа является отсутствие оценки функционального состояния сосудистого русла в условиях целостного организма при моделировании дефицита оксида азота в эксперименте.

Техническим результатом изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции при L-NAME индуцированном дефиците оксида азота, включающий использование ацетилсалициловой кислоты. Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте внутрибрюшинным ежедневным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг, проводится ее коррекция путем ежедневного внутрижелудочного введения ацетилсалициловой кислоты в дозе 8,6 мг/кг.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Biopac". Функциональные пробы: эндотелийзависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелийнезависимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг. При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при р<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 сек приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных: для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 сек развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 сек после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 сек. Блокада NO-синтазы с помощью длительного, ежедневного, в течение 7-суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД -190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.

Одновременное введение L-NAME и ацетилсалициловой кислоты не приводило к снижению показателей исходных значений АД (таблица 1).

Таблица 1.

Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции ацетилсалициловой кислотой.

Группы животных Функциональные пробы САД, мм рт.ст. ДАД, мм рт.ст. ЧСС, уд. в мин. Интактные Исходные 137,7±3,7 101,9±4,3 420,0±9,0 ЭЗВ с АХ 84,3±4,5 38,7±2,8 416,0±14,0 ЭНЗВ с НП 83,0±3,7 42,1±4,4 415,0±10,0 Получавшие L-NAME (25 мг/кг) Исходные 190,3±6,7* 145,0±3,9* 428,0±11 ЭЗВ с АХ 110,6±5,2* 82,8±6,6* 426,0±14,0 ЭНЗВ с НП 88,7±4,7 50,8±4,2 426,0±13,0 L-NAME (25 мг/кг)+ацетилсалициловая к-та (8,6 мг/кг) Исходные 173±8,2 130,4±10,2 373,0±12 ЭЗВ с АХ 106,6±4,9 51,8±4,3** 348,0±16 ЭНЗВ с НП 108,4±7,6 41,6±3,0 364,0±13 * - р<0,05 в сравнении с группой интактных; ** - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME

Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привела нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.

Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME. Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции. Так, в группе, где на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME вводилась ацетилсалициловая кислота, это отношение соответствовало значению 2,1±0,3 (таблица 2).

Таблица 2. Показатели, отражающие коррекцию эндотелиальной дисфункции на фоне введения L-NAME ацетилсалициловой кислотой. Группы животных Функциональ-
ные пробы Прирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.) Время сосудистой реакции (сек.) Площадь сосудистой реакции (усл. ед) Отношение площадей сосудистой реакции АХ к НП Интактные АХ 59,9±2,9 42,2±0,8 1268,0±74,8 1,1±0,1 НП 61,0±3,0 45,1±1,0 1375,3±93,7 L-NAME АХ 68,0±4,1 20,0±1,4 695,3±87,6* 5,4±0,6* НП 98,0±2,0 67,4±1,4 3322,7±116,7* L-NAME+ацетилсалициловая кислота АХ 74,6+7,8 78,4+9,1** 3111,0+634** 2,1±0,3** НП 85,0±8,0 128,7±7,8** 5546,0±740** * - р<0,05 в сравнении с группой интактных, ** - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать коррекцию эндотелиальной дисфункции ацетилсалициловой кислотой на фоне введения L-NAME.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции. Для этого в эксперименте моделируют эндотелиальную дисфункцию ежедневным внутрибрюшинным введением крысам-самцам линии Wistar в течение 7 дней N-нитро-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг. При этом степень развития дисфункции оценивают по соотношению эндотелийнезависимой и эндотелийзависимой вазодилатации. Коррекцию дисфункции осуществляют внутрижелудочным введением ацетилсалициловой кислоты в дозе 8,6 мг/кг 1 раз в сутки. Способ позволяет оценить динамику коррекции эндотелиальной дисфункции в специфических условиях эксперимента. 2 табл.

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции, отличающийся тем, что в эксперименте белым крысам самцам линии Wistar с эндотелиальной дисфункцией, на фоне ее моделирования внутрибрюшинным введением ингибитора эндотелиальной синтазы N-нитро-L-аргинин метилового эфира в дозе 25 мг/кг ежедневно, в течение 7 сут, оценивая степень развития дисфункции по отношению показателей эндотелийнезависимой и эндотелийзависимой вазодилатации, внутрижелудочно вводят ацетилсалициловую кислоту 8,6 мг/кг ежедневно, в течение 7 сут.