СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАЧЕСТВА И ПРОИСХОЖДЕНИЯ МЕДИЦИНСКОЙ ПИЯВКИ Российский патент 2007 года по МПК A61K35/62 A01K67/33 

Изобретение относится к области биологических исследований и может быть использовано для оценки качества медицинской пиявки, в частности при установлении ее пригодности и безопасности для использования в лечебных целях.

Срок голодания и происхождение пиявки являются основными критериями для сертификации ее в качестве лекарственного средства «Пиявка медицинская».

Срок голодания пиявки медицинской фиксируют в процессе производства на предприятии по истечению времени от последнего кормления. Однако при контроле в аккредитованных аналитических лабораториях на сегодняшний день отсутствуют методы, позволяющие объективно определять этот критерий.

Важность указанного параметра заключается в том, что только к сроку голодания три месяца пиявка медицинская набирает необходимое количество биологически активных веществ и становится лекарственным средством. При этом сроке голодания пиявки формируют в серии и осуществляют процедуру сертификации.

Сертификация искусственно выращенной пиявки производится в соответствии с фармакопейной статьей предприятия (ФСП), утвержденной Минздравом РФ для каждого предприятия, выращивающего пиявку. Тем не менее, часто имеют место случаи отрицательных последствий применения пиявок, как правило, связанные с использованием «дикой» пиявки, то есть выловленной в естественных водоемах, что опасно с медицинских позиций, а также дискредитирует методики гирудотерапии, как одного из самых эффективных способов безмедикаментозного лечения различных заболеваний.

На некоторых предприятиях для определения срока голодания медицинской пиявки используют так называемый «метод пищевой активности», основанный на измерении времени насасывания пиявкой крови испытываемого животного. Такой метод необъективен и может привести к сертификации «дикой» пиявки, которая, как известно, после ее отлова значительное время достаточно активна.

Наиболее близким к описываемому изобретению является способ определения качества и происхождения медицинской пиявки, включающий ее взвешивание с последующим визуальным исследованием (ФСП ЗАО «Международный центр медицинской пиявки №42-0233090301, утв. Департаментом ГКК МЗ РФ 11.03.2001). В соответствии с требованиями упомянутого ФСП масса пиявки должна быть от 0,5 г до 3 г.

Однако измерение непосредственно массы пиявки не позволяет достоверно произвести оценку срока голодания пиявки. Визуальное же исследование носит субъективный характер и имеет целью установить только биологический вид пиявки, а потому известный метод определения качества медицинской пиявки не может быть применен к пиявкам с сомнительным происхождением или неизвестной технологией их производства и выращивания. Необъективная оценка срока голодания пиявки может привести к использованию пиявки со сроком голодания менее 3-х месяцев, то есть не накопившей достаточного количества биологически активных веществ для эффективного воздействия на пациента. В то же время, длительно голодающая пиявка становится малоактивной, время ее насасывания увеличивается, а объем отсасываемой крови уменьшается, что также снижает лечебный эффект.

При этом известный метод определения качества пиявки также не исключает опасности приобретения «дикой» пиявки, использование которой часто сопровождается в разной степени аллергическими проявлениями.

Таким образом, технический результат, получаемый при реализации описываемого изобретения, состоит в повышении достоверности определения качества медицинской пиявки путем объективного определения срока ее голодания, а также в исключении возможности сертификации «дикой» пиявки в качестве «Лекарственного средства», и как следствие - в повышении эффективности лечения различных заболеваний.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе определения качества медицинской пиявки, включающем взвешивание пиявки и определение срока ее голодания, после взвешивания из пиявки извлекают содержимое желудочно-кишечного тракта и производят повторное взвешивание, после чего определяют критерий качества пиявки (К), равный величине отношения масс пиявки, полученных до и после извлечения содержимого ее желудочно-кишечного тракта, устанавливают срок голодания пиявки, равный или более трех месяцев, при значениях критерия качества К≥1,327+0,338Ln(М), где М - масса пиявки, и по сроку голодания судят о качестве пиявки.

Указанный технический результат достигается также тем, что в способе определения происхождения медицинской пиявки путем формирования экспериментальной партии, взвешивания и исследования каждой экспериментальной пиявки, по значениям критерия качества пиявки (К), равного величине отношения масс пиявки, полученных до и после извлечения содержимого ее желудочно-кишечного тракта, К≥1,327+0,338Ln(М), где М - масса пиявки, устанавливают срок голодания пиявок экспериментальной партии, равный или более трех месяцев, и при однородности критерия качества не менее чем у 20% пиявок в партии при отсутствии пиявок со сроком голодания более шести месяцев устанавливают принадлежность пиявки к лекарственному средству «Пиявка медицинская».

При этом величины критерия качества считают однородными, если они отличаются не более чем на 0,05.

Целесообразно дополнительно исследовать содержимое кишечника и по степени текучести и однородности извлеченной массы определять принадлежность пиявки к лекарственному средству «Пиявка медицинская».

Установлено, что существует зависимость массы пиявки и находящейся в ней массы крови во времени после кормления. В результате проведенных исследований по изучению изменения содержания крови в пиявке по мере ее голодания разработаны статистически достоверные критерии качества медицинской пиявки и метод идентификации пиявки, выращенной в искусственных условиях в соответствии с принятыми требованиями разведения и содержания «Пиявки медицинской».

Описываемый способ определения качества медицинской пиявки осуществляют следующим образом.

Первоначально определяют критерий качества пиявки (К), равный отношению массы исследуемой пиявки (Md) к массе пиявки после извлечения из нее содержимого ЖКТ (Мр)

K=Md/Mp

С этой целью пиявку взвешивают, затем извлекают из ее кишечника содержимое, например, путем выдавливания, после чего пиявку снова взвешивают и вычисляют соотношение результатов взвешивания пиявки до и после извлечения содержимого ее кишечника. По соответствию полученной величины коэффициента «К» значениям расчетных статистически достоверных зависимостей определяют срок голодания пиявки, после чего устанавливают принадлежность пиявки к лекарственному средству «Пиявка медицинская».

В соответствии с описываемым методом определения происхождения пиявки из партии пиявок отбирают достаточное количество экспериментальных пиявок, взвешивают каждую пиявку, извлекают содержимое ее кишечника, повторно взвешивают, определяют критерий качества пиявки, равный величине отношения масс пиявки до и после извлечения содержимого ее кишечника, и устанавливают срок голодания пиявки. При однородности критерия качества или сроков голодания не менее чем у 20% пиявок в экспериментальной партии и при отсутствии пиявок со сроком голодания более шести месяцев квалифицируют принадлежность пиявки к лекарственному средству «Пиявка медицинская».

С целью повышения достоверности определения происхождения пиявки производят дополнительный визуальный анализ содержимого кишечника, определяют его однородность и степень текучести, принимая во внимание, что неоднородная масса разной консистенции и отсутствие каловых масс однозначно характеризует «дикую пиявку» и такая пиявка не может быть отнесена к лекарственному средству «Пиявка медицинская».

Пригодность описываемого способа подтверждается испытаниями с использованием пиявок, выращенных в искусственно созданных условиях на производстве ЗАО «Международный Центр медицинской пиявки» по технологии, отвечающей требованиям системы GMP.

Приведенные ниже результаты исследований иллюстрируют значимость выбранного критерия качества пиявки «К» в методике определения срока голодания пиявки и ее происхождения.

С целью определения критерия качества «К» из разных серий пиявок, сертифицированных как лекарственное средство «Пиявка медицинская», случайным образом отбирают пиявки с известным сроком голодания. Каждую пиявку взвешивают, извлекают содержимое кишечника и взвешивают повторно, после чего производят расчет критерия «К» по описанной выше методике.

Пример 1. Исследование влияния массы пиявки на критерий качества «К».

Известно, что по достижении срока голодания в 3 месяца искусственно выращенная пиявка переходит в разряд лекарственных средств «Пиявка медицинская», поскольку к этому времени они накапливают (нарабатывают) необходимое для лечебного воздействия количество биологически активных веществ. Именно на стадии этого срока голодания пиявки формируют в серии, проводят испытания в независимой лаборатории и производят их сертификацию в качестве лекарственного средства «Пиявка медицинская». Требования упомянутой выше ФСП распространяются на пиявки с массой от 0,5 грамм до 3 грамм, поэтому исследованию по установлению критерия качества прежде всего подвергают пиявки разной массы со сроком голодания три месяца.

Отобранные пиявки со сроком голодания три месяца разбивают по первоначальной массе (М) на 5 групп:

1. - 0,8±0,1 г

2. - 1,0±0,1 г

3. - 1,25±0,15

4. - 1,55±0,15 г

5. - 2,55±0,85 г

и определяют критерий качества пиявки «К» по описываемому способу.

Результаты исследования показали, что для пиявок массой 1 грамм со сроком голодания 3 месяца критерий качества пиявки «К» составляет величину 1,3±0,03.

Статистические значения критерия «К», рассчитанные по весовым интервалам для пиявок со сроком голодания 3 месяца, приведены в таблице 1.

Установлено, что полученные данные с достаточной степенью достоверности описываются зависимостью критерия «К» от натурального логарифма по массе пиявок, измеренной в граммах

К=1,327+0,338Ln(M)

Графически зависимость значений критерия «К» от массы пиявок при сроке голодания 3 месяца представлена на графиках фиг.1.

Пример 2. Исследование влияния срока голодания пиявки на критерий качества «К».

Для исследования используют пиявки со сроком голодания 0,5; 1; 2; 3; 4; 5; и 6,5 месяцев. С целью исключения возможного влияния параметра массы пиявок на критерий качества «К» выбирались пиявки массой 1±0,15 г с разных рабочих мест.

Оценку критерия «К» для пиявок, выращенных в искусственно созданных условиях с разным сроком голодания, производят в соответствии с описываемым способом.

Статистические значения критерия качества «К» пиявок массой 1±0,15 г для различных сроков голодания приведены в таблице 2.

Полученные данные свидетельствуют, что каждая конкретная величина критерия качества «К» характеризует определенный срок голодания пиявки и снижается с увеличением срока голодания.

Полученные данные с достаточной степенью достоверности можно описать зависимостью критерия «К» от натурального логарифма по времени в месяцах

К=1,537-0,232Ln(t)

Графически зависимость критерия качества «К» от времени голодания (t) представлена на фиг.2.

Пример 3. Исследование критериев определения происхождения пиявки.

Исследования проводились на двухстах пиявках, выловленных в естественных условиях в разное время, в различных водоемах и сформированных в пять партий по месту и времени отлова.

Каждая пиявка подвергалась первоначальному взвешиванию с последующим извлечением содержимого ее кишечника и повторным взвешиванием. По полученным данным для каждой пиявки определяли значение критерия «К» как соотношение масс до и после извлечения содержимого ЖКТ.

По соответствию полученной величины коэффициента «К» значениям расчетных статистически достоверных зависимостей для пиявок, выращенных в искусственно созданных условиях, устанавливали срок голодания каждой «дикой» пиявки.

Анализ полученных данных показал, что в партиях «дикой» пиявки значения критерия «К», соответствующие срокам голодания пиявки от 3-х до 6-ти месяцев, неоднородны и составляют для каждого конкретного срока голодания из этого интервала не более 20%. При этом однородность значений критерия «К» устанавливалась при их различии не более чем на 0,05.

Срок голодания более 50% «диких» пиявок в экспериментальных партиях составлял шесть и более месяцев, что недопустимо для сертификации пиявки в качестве лекарственного средства «Пиявка медицинская».

Дополнительно производят визуальный анализ содержимого кишечника.

Практически у всех «диких» пиявок содержимое кишечника представляет собой неоднородную массу разной консистенции, например в виде желеобразного сгустка, иногда с кровянистыми включениями, либо в виде жидкой крови с включениями икры водных обитателей.

Таким образом, наличие в экспериментальной партии менее чем 20% пиявок с однородным значением критерия качества «К», характеризующим пиявки от трех до шести месяцев, а также наличие пиявок со сроком голодания шесть и более месяцев однозначно характеризует партию «диких» пиявок, и такие пиявки не могут быть отнесены к лекарственному средству «Пиявка медицинская».

Описываемое изобретение представляет собой простейший метод, позволяющий без применения сложных приборов и животных для забора крови, с достаточной степенью достоверности установить истинные сроки голодания пиявок и идентифицировать их как выращенных в искусственно созданных условиях или как «диких», что позволяет объективно проводить сертификацию пиявок в качестве лекарственного средства «Пиявка медицинская».

Таблица 1Статистические значения коэффициента К, определенные для пиявки разной массы со сроком голодания 3 месяцаПараметрПиявки массой, г0,8±0,11,0±0,11,25±0,151,55±0,152,55±0,85№ интервала12345n538565187К_ср1,261,2961,401,511,63S0,10090,11100,13630,19270,2248S²0,01020,01230,01860,03710,0505K_min1,091,131,171,271,35K_max1,471,721,732,062,03Где:n - число экспериментальных значений;К_ср - рассчитанное среднее значение критерия качества К;S - среднеквадратичное отклонение для критерия К;S² - дисперсия для критерия К;K_min - минимальное значение для критерия К, полученное из экспериментальных данных;К_max - максимальное значение для критерия К, полученное из экспериментальных данных.

Таблица 2Статистические оценки значений коэффициента качества "К" для пиявок с разным сроком голоданияПараметр0,5 м-ца1 м-ц2 м-ца3 м-ца4 м-ца5 м-цев6,5 м-цевn50504950491313К_ср1,701,511,411,301,201,171,09S0,180,1280,0830,0900,0450,0680,036S²0,03260,01640,00680,0080,0020,00460,0013K_max2,001,831,581,501,311,291,16K_min1,3751,251,241,111,121,11,05K_cp+3S2,241,891,661,571,331,371,20K_cp-3S1,161,131,161,031,071,001,00Обозначения:n - число экспериментальных значений;К_ср - рассчитанное среднее значение критерия качества "К";S - среднеквадратичное отклонение для критерия "К";S² - дисперсия для критерия "К";K_cp+3S - предельно допустимое максимальное значения для К, исходя из нормального закона распределения значений;K_cp-3S - предельно допустимое минимальное значения для К, исходя из нормального закона распределения значений.

Изобретение относится к области биологических исследований, может быть использовано при установлении пригодности и безопасности для использования в лечебных целях медицинских пиявок. Способ определения качества медицинской пиявки включает взвешивание пиявки, извлечение содержимого кишечника пиявки и повторное взвешивание. Определяют критерий качества пиявки (К), равный величине отношения масс пиявки, полученных до и после извлечения содержимого ее желудочно-кишечного тракта. При значении К≥1,327+0,338Ln(M), где М - масса пиявки, устанавливают срок голодания пиявки, равный или более трех месяцев, по которому судят о ее качестве. Для определения происхождения медицинской пиявки формируют экспериментальною партию. При однородности критерия качества более чем у 20% пиявок в партии и отсутствии пиявок со сроком голодания более шести месяцев устанавливают принадлежность пиявки к лекарственному средству «Пиявка медицинская». Изобретение позволяет объективно определить срок голодания пиявки и исключает возможность сертификации «дикой» пиявки в качестве «Лекарственного средства». 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл.

1. Способ определения качества медицинской пиявки, включающий взвешивание пиявки и определение срока ее голодания, отличающийся тем, что после взвешивания извлекают содержимое желудочно-кишечного тракта и производят повторное взвешивание, после чего определяют критерий качества пиявки (К), равный величине отношения масс пиявки, полученных до и после извлечения содержимого ее желудочно-кишечного тракта, устанавливают срок голодания пиявки, равный или более трех месяцев, при значениях критерия качества К≥1,327+0,338 Ln (М), где М - масса пиявки, и по сроку голодания судят о качестве пиявки.2. Способ определения происхождения медицинской пиявки путем формирования экспериментальной партии, взвешивания и исследования каждой экспериментальной пиявки, отличающийся тем, что при значениях критерия качества пиявки, равного величине отношения масс пиявки, полученных до и после извлечения содержимого ее желудочно-кишечного тракта, К≥1,327+0,338 Ln (М), где М - масса пиявки, устанавливают срок голодания пиявок экспериментальной партии равным или более трех месяцев, и при однородности критерия качества более чем у 20% пиявок в партии и отсутствии пиявок со сроком голодания более шести месяцев устанавливают принадлежность пиявки к лекарственному средству «Пиявка медицинская».3. Способ по п.2, отличающийся тем, что значения критерия качества считают однородными, если они отличаются не более чем на 0,05.4. Способ по п.2, отличающийся тем, что дополнительно исследуют содержимое кишечника пиявки и по степени текучести и однородности извлеченной массы определяют принадлежность пиявки к лекарственному средству «Пиявка медицинская».