СПОСОБ ЗАРАЖЕНИЯ МОРСКИХ СВИНОК ПРИ ИЗУЧЕНИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА Российский патент 2008 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к области ветеринарии, преимущественно лабораторному делу и может быть использовано для заражения лабораторных животных при изучении возбудителя туберкулеза.

При изучении туберкулеза и его возбудителя в специальных научно-исследовательских целях применяют различные способы заражения мелких лабораторных животных, в частности морских свинок и кроликов.

В ветеринарных лабораториях известен способ подкожного заражения морских свинок в области паха, который применяется для диагностики туберкулеза, определения видовой принадлежности микобактерий и их вирулентности. При этом туберкулезных микобактерий суспендируют в физрастворе (наставление по диагностике туберкулеза животных. Утв. ДВ РФ - 18.11.2002. М.: - С.35. п.6.4.5.2).

Однако при существующем способе заражения продолжительность биопробы может колебаться от 90 до 150 дней и более (Кузин А.И. Туберкулез с-х животных и его профилактика. М. - Роспромиздат. - 1992. - С.143).

Диагноз на туберкулез считают установленным в хозяйстве только при выделении культуры возбудителя и при получении положительного результата биологической пробы. Удлинение срока постановки диагноза сопровождается масштабными экономическими потерями.

Кроме того, при подкожном способе заражения, на месте инъекции туберкулезных микобактерий образуется воспалительный инфильтрат, превращающийся затем в абсцесс. Примерно через 21 день абсцесс вскрывается наружу и с гноем вирулентный возбудитель выделяется во внешнюю среду и обсеменяет окружающие предметы.

Целью настоящего изобретения является оптимизация срока постановки биопробы и предотвращение контаминации окружающей среды высоковирулентным возбудителем.

Поставленная цель достигается тем, что туберкулезных микобактерий суспендируют в 5 мл стабилизированной крови крупного рогатого скота. Стабилизацию крови проводят 3%-ным раствором цитрата натрия из расчета 0,3 мл на 10 мл крови или любым другим применяемым в ветеринарной медицине антикоагулянтом и вводят в брюшную полость морской свинки живой массой 250-300 г.

У фиксированной головой вниз морской свинки, с левой стороны нижней трети брюшка, после выстригания волосяного покрова и обработки места инъекции суспензии 70% спиртом-ректификатом оттягивают большим и указательным пальцами левой руки кожу в складку от подлежащей ткани. Прокалывают вплотную над большим пальцем надетой на шприц отточенной под углом 45° иглой сначала кожу, а затем продвигают иглу в косом направлении через брюшные мышцы в брюшную полость. После появления чувства провала иглы в полость впрыскивают медленно содержимое шприца. После введения культуры микобактерий иглу вынимают, место вкола иглы дезинфицируют.

Перед введением в брюшную полость прививочный материал в течение 10-15 мин выдерживают в термостате при температуре 37-38°С. Результаты представлены в таблице.

Продолжительность жизни у морских свинок, зараженных различными способами культурой М. bovis, выделенными из биоматериала больных туберкулезом животных№№ п.п.Название хозяйстваГода неблагополучияЗаражение под кожуЗаражение в брюшную полостьДатаПродолжит. жизни (в дн.)ДатаПродолжит. жизни (в дн.)заражениягибелизаражениягибели а) при остром течении туберкулеза1.«Рассвет»199912.01.999.03.995612.01.9915.02.99342.«Луч»199921.11.9922.12.993321.11.995.12.99243.«Совхоз-техникум»20005.01.0024.02.00505.01.0012.02.00384.им. Вахитова20003.02.003.04.00333.02.0026.02.00235.«Яна Сала»200014.11.0026.12.004114.11.003.12.02266.«Новый арыш»200218.06.029.08.025118.06.0226.07.02397.«Подберезье»200210.10.0220.12.027010.10.027.11.02288.«Победа»200218.10.02.29.11.024218.10.02.12.11.02259.«Макулова»20034.04.0312.05.03384.04.033.05.033510.«Матюшино»20039.06.038.08.03709.06.0315.07.0336    М±m=48,4±4,55  30,8±2,06 б) при длительном течении туберкулеза1.«Волга»1999*22.02.9922.04.996022.02.9917.03.99232.им. Кирова1999*1.07.991.10.998701.07.999.08.99393.М.Горького2000*23.05.0014.08.008323.05.003.07.00414.«К. - Устье»2000*1.11.001.02.019101.11.0018.12.00475.«Чулпан»2000*1.11.001.02.019101.11.0020.12.00496.«Тан»»2000*19.10.0026.12.006919.10.0014.11.00267.«Кр. Октябрь»2001*4.08.0116.10.017304.08.0129.08.01258.«Токарликовский»2002*11.04.029.07.028911.04.0224.05.02439.«Болтачево»2002*5.12.024.02.036005.12.0230.12.022510.«Победа»2002*17.12.025.03.037917.12.0225.01.0340    M±m=78,2±4,03  35,8±3,8* - Дата повторного возникновения туберкулеза

Как видно из данных таблицы, продолжительность жизни у морских свинок, зараженных возбудителем туберкулеза, выделенным из биоматериала больных животных, с острым течением болезни, подкожным способом, составляет - 48,4±4,55, а внутрибрюшинным - 30,8±2,06 дней; при заражении возбудителем, выделенным из неблагополучных хозяйств с длительным течением болезни, в связи с многократными повторными вспышками болезни, через каждые 4-5 лет, соответственно - 78,2±4,03 и 35,8±3,8 дней.

Удлинение срока постановки биопробы в длительно неблагополучных хозяйствах мы связываем снижением вирулентности туберкулезных микобактерий более широким и интенсивным применением дезинфицирующих средств в этих хозяйствах, которое не всегда убивают, но, несомненно, оказывают значительное влияние на снижение вирулентных свойств микобактерий туберкулеза.

Кроме того, при инъекции туберкулезных микобактерий в брюшную полость на месте введения не образуются воспалительный инфильтрат и абсцесс.

Снижение срока продолжительности жизни у зараженных в брюшную полость происходит за счет разноса туберкулезных микобактерий фагоцитированными клетками крови. Ввиду того, что при туберкулезе фагоцитоз незавершенный, оседая в местах повторного внедрения, туберкулезные микобактерии, повреждая фагоциты, освобождаются и начинают усиленно размножаться, обуславливая генерализованный туберкулезный процесс. Особенно сильно поражаются печень, селезенка, сальник и другие органы. У больных проявляется лихорадка с повышением температуры тела до 39,3±0,28°С, развивается прогрессирующее истощение с потерей живой массы до 31% со 100% гибелью.

Использование предлагаемого способа заражения морских свинок сокращает срок постановки биопробы в 1,5-2,1 раза.

Изобретение относится к ветеринарии, микробиологии, в частности к созданию биологических моделей, и касается заражения морских свинок при изучении биологических свойств микобактерий туберкулеза (МТ). Для этого перед инъекцией в брюшную полость МТ суспендируются в 5 мл крови крупного рогатого скота, стабилизированной 3%-ным раствором цитрата натрия. Способ обеспечивает за счет незавершенного характера фагоцитоза микобактерий туберкулеза ускоренный выраженный генерализованный туберкулезный процесс, сокращение срока постановки биопробы. 1 табл.

Способ внутрибрюшинного заражения морских свинок при изучении туберкулеза, отличающийся тем, что микобактерии туберкулеза перед инъекцией в брюшную полость суспендируются в 5 мл стабилизированной крови крупного рогатого скота 3%-ным раствором цитрата натрия.