СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ С РЕВМАТОИДНЫМ ПОЛИАРТРИТОМ Российский патент 2008 года по МПК G01N33/68 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а точнее - к способам оценки эффективности лечения больных с ревматоидным полиартритом

Известны способы иммунологической оценки результатов лечения больных ревматоидным полиартритом путем определения в крови пациентов титров ревматоидного фактора (РФ), анти-ЦЦП, АНФ, концентрации иммуноглобулинов (IgG, IgM, IgA), ЦИК и т.д. [Клиническая ревматология (руководство для врачей)/ под. ред. чл.-корр. РАМН проф. В.И.Мазурова. - 2-е изд., перераб. и доп. - СПб: ООО «Издательство ФОЛИАНТ», 2005. - 48-63 с.].

Однако эти способы являются малоинформативными.

В качестве прототипа нами выбран способ оценки эффективности лечения больных с ревматоидным полиартритом, заключающийся в заборе крови и определения в ней титров РФ [Ревматология 2005/ Клинические рекомендации под. Ред. чл.-корр. РАМН Е.Л.Насонова - Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2005. - С.28].

Однако данный показатель выявляется у 70-90% больных, имеет низкую «чувствительность» и «специфичность» на ранней стадии заболевания, и динамика его титров не всегда отражает эффективность лечения.

Задачей настоящего изобретения является повышение специфичности, точности и чувствительности способа.

Поставленная задача решается за счет того, что в способе, включающем забор крови из периферической вены, в мононуклеарной клеточной фракции определяют спонтанную продукцию фактора некроза опухоли-α и при ее снижении в процессе лечения проведенные лечебные мероприятия оценивают как эффективные.

Способ осуществляют следующим образом. До начала лечения у пациента с ревматоидным полиартритом забирают 20 мл периферической крови, которую используют для выделения клеток. Мононуклеарные клеточные фракции, содержащие макрофаги и лимфоциты, выделяют из гепаринизированной периферической крови путем градиентного центрифугирования на фикол/верографин, после чего клетки изолируют и трижды отмывают фосфатно-солевым буфером (ФСБ), ресуспензируют в среде RPMI-1640 ("Sigma") с добавлением 10% телячьей эмбриональной сыворотки, 2% глутамина и 1% антибиотика-антимикотика ("Панэко", Москва). Концентрацию клеток в среде определяют с помощью гемоцитометра и высевают их по 1 млн клеток на лунку 24-луночного культурального планшета. Для оценки состояния цитокинпродуцирующей функции мононуклеаров определяют спонтанную продукцию этих белков. Для определения спонтанной продукции цитокинов в каждую лунку добавляют по 0,1 мл фосфатного буфера. Содержание цитокинов определяют в каждой лунке индивидуально. Клетки инкубируют в течение 48 часов при стандартных условиях. После окончания инкубации супернатанты собирают, центрифугируют для отделения любых клеточных отломков и хранят при - 80°С. Содержание цитокинов в супернатантах определяют с помощью твердофазного иммуноферментного анализа, используя наборы реагентов ProCon ФНО-α "Протеиновый контур", "Цитокин" Санкт-Петербург. Измерение проводят на анализаторе АИФ-Ц-01С (Санкт-Петербург). Предел определения составляет для ФНО-α 5 пкг/мл.

После окончания курса консервативного лечения проводится повторное определение спонтанной продукции ФНОα, и если отмечают ее снижение, лечение считают эффективным.

Основанием для определения критерия эффективности лечения явились результаты клинико-иммунологических исследований в процессе консервативного лечения в ННИИТО 12 больных (11 женщин и одного мужчины в возрасте от 31 до 64 лет) с ревматоидным полиартритом. Стационарное лечение больных с ревматоидным полиартритом включало в себя медикаментозную терапию, индивидуальную лечебную гимнастику, массаж, рефлексо- и физиотерапию. В комплексе лечебных мероприятий пяти больным с ревматоидным артритом проводился плазмаферез (три сеанса) с последующей пульс-терапией мерипредом в дозе 250 мг, а другим пяти пациентам была выполнена лечебная артроскопия коленных суставов.

Исследование продукции ФНО-α мононуклеарами больных с ревматоидным полиартритом в системе in vitro позволило выявить отчетливые изменения (более чем в 20 раз, p<0,000001) спонтанной продукции ФНО-α по сравнению с таким же показателем у клеток здоровых лиц. Самое высокое значение спонтанной продукции ФНО-α (в 36 раз превышающее норму) было у пациентки с высокой степенью активности заболевания и наименьшей продолжительностью (менее года) ревматоидного полиартрита. После окончания курса консервативного лечения наблюдалась отчетливая динамика спонтанной продукции ФНО-α. Значение этого показателя практически у всех пациентов (у 11 из 12) уменьшилось, но только у одной больной достигло нормальных значений. Снижение спонтанной продукции ФНО-α коррелировало с улучшением клинического состояния пациентов. Увеличение спонтанной продукции отмечалось только у одной больной с изначально высокой активностью заболевания. Несмотря на уменьшение лабораторной активности (уменьшение СОЭ, СРВ) клиническое состояние этой больной практически не изменилось.

Клинические примеры.

Больная Емелина Н.П., 53 лет (ист. б-ни N 311), находилась на стационарном консервативном лечении в ННИИТО с 20.10.05 г. по 18.11.05 г. с диагнозом: ревматоидный артрит с системными проявлениями, серопозитивный, медленно прогрессирующего течения, активность II, НФ II, стадия II, вторичный гонартроз. При первичном обследовании больной спонтанная продукция мононуклеарами фактора некроза опухоли-α составила 572. Больной был проведен курс восстановительного лечения, который включал в себя терапию метотексатом (15 мг в неделю), ЛФК, электростимуляцию мышц, КВЧ-терапию, артроскопическую санацию правого коленного сустава. При повторном лабораторном исследовании по завершении курса лечения отмечалось незначительное повышение СОЭ с 37 до 46 мм/час и отсутствие динамики со стороны СРБ (18 при первичном и повторном исследовании). Клинически состояние больной за время лечения значительно улучшилось (уменьшились боли по ВАШ с 100 до 25 мм, улучшилась функция пораженных суставов), а при исследовании спонтанной продукции ФНО-α наблюдалось ее снижение с 572 до 306, что позволило сделать заключение об эффективности проведенного курса лечения.

Больная Шехалева Т.А., 47 лет (ист. б-ни N 432), находилась на стационарном консервативном лечении в ННИИТО с 28.10.05 г. по 18.11.05 г. с диагнозом: ревматоидный артрит с системными проявлениями, активность II, НФ III, стадия II, серо-позитивный, медленно прогрессирующего течения. При первичном обследовании больной спонтанная продукция мононуклеарами фактора некроза опухоли α составила 391,8. Больной был проведен курс восстановительного лечения, который включал в себя терапию метотексатом (15 мг в неделю), ЛФК, магнитотерапию, лазеротерапию, массаж, плазмаферез (три сеанса) с последующей пульс-терапией мерипредом в дозе 250 мг. При повторном лабораторном исследовании по завершении курса лечения отмечалось снижение СОЭ с 45 до 15 мм/час, СРБ с 18 до 12, РФ с 128 до 16. Однако клинически состояние больной практически не изменилось (отмечалось лишь незначительное уменьшение болевого синдрома), а при исследовании спонтанной продукции ФНОα наблюдалось ее возрастание с 391,8 до 649,3, что позволило сделать заключение о неэффективности проведенного курса лечения.

Способ оценки эффективности лечения больных с ревматоидным артритом позволяет с достаточной достоверностью объективно оценить течение аутоиммунного процесса. Способ информативен, выполним в условиях специализированного стационара и может быть использован в клинической практике.

Изобретение относится к области медицины, в частности к ревматологии. У больных с ревматоидным полиартритом до и после проведения курса лечебных процедур осуществляют забор крови из периферической вены. В образцах крови выделяют мононуклеарные клеточные фракции, содержащие макрофаги и лимфоциты. Определяют спонтанную продукцию фактора некроза опухоли-α (ФНО-α). При снижении спонтанной продукции ФНО-α к концу курса терапии проведенное лечение считается эффективным. Использование способа позволяет повысить специфичность и точность оценки эффективности лечения больных с ревматоидным полиартритом.

Способ оценки эффективности лечения больных с ревматоидным полиартритом, включающий забор крови, отличающийся тем, что забор крови осуществляют до и после проведения курса лечебных процедур, в образцах крови выделяют мононуклеарные клеточные фракции, определяют спонтанную продукцию фактора некроза опухоли-α, и в случае ее снижения к концу курса терапии проведенные лечебные мероприятия оценивают как эффективные.