СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ КАЧЕСТВА СПЕРМЫ ПРИ АСТЕНОЗООСПЕРМИИ ДЛЯ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ БЕСПЛОДИЯ Российский патент 2008 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, в частности к урологии и андрологии, и может быть использовано для исследования качества спермы при астенозооспермии и прогнозирование эффективности лечения бесплодия.

Бесплодием страдают мужчины и женщины во всем мире. Оценка распространенности данного состояния в настоящее время неточна. Считается, что от 8 до 15% супружеских пар в течение репродуктивного периода сталкиваются с данной проблемой (ВОЗ, 1995). При расчете на общую популяцию это значит, что в мире насчитывается более 100 млн супружеских пар, для которых проблема бесплодия является причиной личных страданий и влечет за собой распад семьи.

На современном этапе диагностика и лечение мужского бесплодия является одним из самых трудоемких и труднопрогнозируемых. Велика вероятность ошибок диагностики и тактики ведения больных с бесплодием, применение необоснованных оперативных и консервативных методов лечения без учета данных спермограмм.

Учитывая все возрастающее количество патологии у мужчин, данные спермограммы должны быть оценены как можно раньше, так как, возможно, потребуется дальнейшее обследование и лечение.

Таким образом, оценка прогноза лечения представляется весьма перспективным направлением в урологии и андрологии.

Известен способ дифференциальной диагностики мужской инфертильности при варикоцеле, заключающийся в том, что после холодового воздействия на поясничную область спины измеряют внутримошоночную температуру и по отсутствию градиента температуры или его падению, не превышающему 0,4°С по сравнению с исходной, диагностируют инфертильность, обусловленную варикоцеле, а по значению, превышающему 0,4°С, - мужскую инфертильность иного генеза. Заявка на изобретение №94036431, МПК А61В 5/00, публ. 20.08.1996 г., Авторы Артифексов С.Б., Кошечкин С.В.

Способ является недостаточно точным, его применение ограничено определением инфертильности только при варикоцеле.

Известен способ диагностики мужского бесплодия, включающий исследование эякулята на содержание металлов. При наличии ртути или свинца устанавливают интоксикационную форму бесплодия. Патент №2247371, МПК G01N 33/48, G01N 33/84, публ. 27.02.2005. БИПМ №6, с.837. Авторы Поляков В.М., Лепехова С.А.

Способ ограничен в применении и позволяет диагностировать только интоксикационную форму бесплодия.

Известен способ исследования эякулята полученного от пациента путем мастурбации после 3-4-дневного воздержания. Исследование начинается спустя 30 минут после сбора эякулята. Проводят микроскопическое исследование: оценка объема, вязкости, запаха, цвета, реакции (рН). Микроскопическое исследование определяет количество, качество и подвижность сперматозоидов. Урбанский А.С., Чекушин Р.Х., Медведева Н.Л., Громов К.Г. Методические рекомендации для врачей "Комплексная медико-социальная реабилитация репродуктивной функции мужчин, перенесших урогенитальные инфекции на этапе планирования семьи", Кемерово, - 2005. - С.13-15.

Для микроскопического исследования используют бинокулярный микроскоп МС-50 (micros Austria), с увеличением до 1600х, ахромат объективы (4х, 10х, 40х, 100х). Исследование проводят при комнатной температуре (не ниже +20°С). Для обзорной микроскопии используют нативный препарат, приготовленный из свежего эякулята. Для подсчета процента подвижных и неподвижных форм используют камеру Горяева с физиологическим раствором, а также разводящей жидкостью А.А.Рубенкова для подсчета общего числа сперматозоидов. Способ позволяет определить количество подвижных сперматозоидов и диагностировать бесплодие мужчины.

Недостатком способа является то, что определение количества подвижных сперматозоидов позволяет диагностировать бесплодие, но не позволяет прогнозировать эффективность лечения бесплодия.

Задача данного изобретения: усовершенствование способа исследования качества спермы и создание способа прогнозирования эффективности лечения бесплодия, связанного с астенозооспермией, повышение точности исследования и прогнозирования.

Поставленная задача достигается тем, что проводят исследование качества спермы при астенозооспермии и прогнозирование эффективности лечения бесплодия путем микроскопического исследования с определением подвижности сперматозоидов в нативном препарате с физиологическим раствором. В нативный препарат добавляют 0,4 мл перфторана, выдерживают в течение 3 мин и повторно микроскопируют и при увеличении количества подвижных сперматозоидов на 30% и более прогнозируют эффективное лечение бесплодия.

Новизна способа:

- В нативный препарат добавляют 0,4 мл перфторана, обладающего газотранспортной функцией, улучшающего газообмен и метаболизм на уровне тканей.

- Выдерживают в течение 3 мин и повторно микроскопируют, это обеспечивает более полное взаимодействие сперматозоидов с перфтораном.

- При увеличении количества подвижных сперматозоидов на 30% и более прогнозируют лечение бесплодия как эффективное. Такое увеличение подвижности говорит о том, что сперматозоиды в сперме обладают достаточным потенциалом подвижности, который можно эффективно восстановить при дальнейшем лечении, что позволяет осуществить прогнозирование исходов лечения.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет осуществить прогнозирование для эффективного лечения бесплодия, связанного с астенозооспермией, повысить точность исследования и прогнозирования за счет выявления той части сперматозоидов, подвижность которых можно восстановить при проведении лечения.

Перфторан - перфторуглеродное соединение - эмульсия - кровезаменитель, обладающий газотранспортной функцией, улучшающий газообмен и метаболизм на уровне тканей, повышающий кислородный транспорт крови, обладающий мембраностабилизирующей функцией, восстанавливающий центральную гемодинамику, обладающий протекторным действием на миокард и блокирующий медленно входящие токи. Обладает сорбционными, диуретическими свойствами, улучшает динамику кровотока и периферическую микроциркуляцию крови. Кислородная емкость перфторана в 3 раза выше кислородной емкости цельной крови. (Перфторорганические соединения в биологии и медицине. Иваницкий Г.Р., Пущино; 1999; 1: с.225.; Местное применение перфторана в лечении больных распространенным гнойным перитонитом. Перфторорганические соединения в биологии и медицине. Пущино; 2001. с.137-141; Биофизические основы создания перфторуглеродных сред и газотранспортных кровезаменителей (обзор) / Перфторорганические соединения в биологии и медицине. Пущино; 2001. с.44-48)

Утвержден к клиническому применению фармкомитетом РФ 24.06.1999 г. Производитель - ОАО НПФ "Перфторан" (Регистрационное удостоверение №96/50/10). 142299, г.Пущино, Московской области, ИТЭБ РАН, корпус "Искусственной крови".

Состав: перфтордекалин - 13 г, префторметилциклогексила пиперидин - 6,5 г, проксанол - 4 г, натрия хлорид - 0,6 г, магния хлорид - 0,019 г, калия хлорид - 0,039 г, натрия гидрокарбонат - 0,065 г, глюкоза - 0,2 г, натрия гидрофосфат - 0,02 г, вода для инъекций до 100 мл.

Растворимость O₂ 6-7 об.% при рO₂=760 мм рт. ст., вязкость - 2,5 сП, осмолярность - 280-310 мОсм/л, рН - 7,22-7,8.

Фармакологические свойства: перфторан - кровезаменитель с газотранспортной функцией, применяется в качестве противошокового и противоишемического средства. Перфторан обладает реологическими, гемодинамическими, диуретическими, мембраностабилизирующими, кардиопротекторными и сорбционными свойствами.

Фармакокинетика: период полувыведения перфторана из кровяного русла составляет 24 часа. Поверхностно-активное вещество полностью покидает организм через почки в течение первых суток. Перфторуглероды химически инертны и в организме не метаболизируются. Перфторуглероды полностью выводятся из организма в течение 18-24 месяцев.

Показания: применяется в качестве кровезаменителя с газотранспортной функцией при шоковых состояниях, больших кровопотерях, множественных травмах, ожогах больших поверхностей тела, циррозах печени, множественных скелетных травмах, отравлениях угарным газом, комбинированных поражениях, перитонитах, состояниях клинической смерти, а также в трансплантологии при пересадке органов.

Выпускается во флаконах из стекла по 50, 100, 200, 400 мл.

Нами впервые перфторан был применен для обработки спермы для улучшения ее качественных показателей, повышения жизнеспособности и активности сперматозоидов, для усовершенствования исследования спермы и составления прогноза эффективности лечения. Предлагаемый нами способ позволяет выявить ту часть сперматозоидов, подвижность которых можно восстановить при проведении лечения.

Одной из причин снижения подвижности сперматозоидов является снижение их дыхательной активности. При использовании перфторана происходит, по-видимому, быстрое насыщение (поглощение) сперматозоидов кислородом, что повышает их двигательную активность. Перфторан, обладая газотранспортной функцией, доставляет кислород непосредственно к сперматозоидам. Кроме того, перфторан, обладая мембраностабилизирующим действием, увеличивает проницаемость мембраны сперматозоида, облегчая процессы газообмена (облегчает отдачу CO₂ и присоединение О₂).

Причиной снижения подвижности сперматозоидов является также снижение поглощения сперматозоидом фруктозы из эякулята за счет снижения проницаемости мембраны сперматозоида. Увеличивая проницаемость мембраны сперматозоида, перфторан облегчает поглощение фруктозы из эякулята, тем самым повышая их двигательную активность.

Способ осуществляется следующим образом.

Методика получения и исследования эякулята унифицирована. Эякулят получают путем мастурбации после 3-4-дневного воздержания. Исследование начинается спустя 30 минут после сбора эякулята. Макроскопическое исследование: оценка объема, вязкости, запаха, цвета, реакции (рН). Микроскопическое исследование определяет количество, качество и подвижность сперматозоидов.

Для микроскопического исследования использовался бинокулярный микроскоп МС-50 (micros Austria), с увеличением до 1600х, ахромат объективы (4х, 10х, 40х, 100х). Исследование проводилось при комнатной температуре (не ниже +20°С). Для обзорной микроскопии использовали нативный препарат, приготовленный из свежего эякулята. Для подсчета процента подвижных и неподвижных форм использовали камеру Горяева с физиологическим раствором, а также разводящей жидкостью А.А.Рубенкова для подсчета общего числа сперматозоидов.

Обработку эякулята проводят следующим образом: на предметном стекле проводят разведение 0,4 мл эякулята в 0,4 мл физиологического раствора (0,9% раствор NaCl) и добавляют 0,4 мл перфторана, выдерживают в течение 3 минут. После этого эякулят повторно микроскопируют с подсчетом процента подвижных и неподвижных форм с использованием камеры Горяева.

При увеличении количества подвижных сперматозоидов на 30% и более прогнозируют лечение бесплодия как эффективное.

В соответствии с данным методом нами обследовано 64 пациента с секреторными формами мужского бесплодия.

Таблица 1Количество пациентовУвеличение подвижности сперматозоидов после обработки спермы перфтораномПрогноз леченияРезультаты лечения140-20%ОтрицательныйЛечение не эффективно820-30%ОтрицательныйЛечение не эффективно2430-40%ПоложительныйЛечение эффективно1840-50%ПоложительныйЛечение эффективно

Из Таблицы 1 видно, что увеличение подвижности сперматозоидов на 30% и более при положительном прогнозе позволяет добиться положительного результата при лечении бесплодия.

Пример 1.

Больной С., ист. бол. № К 5622, 29 лет, обратился в поликлинику на прием к урологу по поводу бесплодия в браке в течение 7 лет.

В анамнезе - хронический простатит. По данному поводу принимает лечение в настоящее время.

При исследовании эякулята: количество сперматозоидов - 86 млн (в норме - более 40 млн). Живых - 68% (норма - 80-90%). Нормокинезис (активно поступательные движения) - 56% (норма - более 80%) - имеется значительное снижение двигательной активности сперматозоидов.

После разведения 0,4 мл эякулята 0,4 мл физраствора с добавлением перфторана вновь провели исследование эякулята: количество сперматозоидов - 86 млн. Живых - 68%. Нормокинезис - 74,2%. Количество сперматозоидов с активно поступательными движениями увеличилось на 32,5%.

Прогноз эффективности лечения мужского бесплодия положительный.

Лечение по поводу бесплодия продолжено: с целью эрадикации неспецифической флоры - норфлоксацин по 400 мг 2 раза в день в течение 30 дней, с целью профилактики развития кандидоза - дифлюкан 150 мг однократно.

С целью устранения ирритативных растройств - дальфаз-ретард 5 мг на ночь в течение 30 дней, с целью улучшения микроциркуляции в простате - детралекс по 1 таблетке 2 раза в день в течение 30 дней, свечи простанорм по 1 свече на ночь, поливитамины.

Физиолечение: ректальная лазеротерапия №10, массаж предстательной железы №10.

Массаж предстательной железы после элиминации возбудителя №10.

После окончания лечения проведено повторное исследование спермы: количество сперматозоидов - 88 млн. Живых - 84%. Нормокинезис - 79,8%.

Результат по восстановлению плодовитости - положительный.

Пример 2.

Больной М., ист. бол. №46, 24 года, находился на стационарном лечении в ОКВД г.Кемерово с 13.01.06. по 27.01.06. с диагнозом: Свежая гонорея. Подострый тотальный уретрит, осложненный левосторонним эпидидимитом. Дифферентит слева.

По окончании лечения, в срок 1 мес больному проведено исследование эякулята.

При исследовании эякулята: количество сперматозоидов - 68,2 млн (в норме - более 40 млн). Живых - 71% (норма - 80-90%). Нормокинезис (активно поступательные движения) - 16,1% (норма - более 80%) - имеется значительное снижение двигательной активности сперматозоидов.

После разведения 0,4 мл эякулята 0,4 мл физраствора с добавлением 0,4 мл перфторана вновь провели исследование эякулята: количество сперматозоидов - 68,2 млн. Живых - 71%. Нормокинезис - 28,7%. Количество сперматозоидов с активно поступательными движениями увеличилось на 78,3%.

Прогноз эффективности лечения мужского бесплодия положительный.

Лечение по поводу бесплодия усилено. С целью устранения ирритативных расстройств - кардура по 2 мг на ночь в течение 10 дней.

С целью эрадикации неспецифической флоры - пефлоксацин по 400 мг 2 раза в день в течение 30 дней, с целью профилактики развития кандидоза - дифлюкан 150 мг однократно.

С целью коррекции иммунитета - ректальные свечи Генферона по 500000 ME 2 раза в сутки в течение 14 дней, повторный курс Генферона через 10 дней по 500000 ME 2 раза в сутки в течение 14 дней.

Физиолечение: ректальная лазеротерапия №10, массаж предстательной железы №10.

После окончания лечения проведено повторное исследование спермы: количество сперматозоидов - 68,2 млн. Живых - 86%. Нормокинезис - 44,2%. Результат по восстановлению плодовитости - положительный.

Пример 3.

Больной К., ист. бол. № К 8148, 25 лет, обратился в поликлинику на прием к урологу по поводу бесплодия в браке в течение 5 лет.

В анамнезе - перенес смешанный (микст-инфекцию) уреаплазменно-хламидийно-трихомонадный уретрит 7 лет назад, который осложнился орхоэпидидимитом. По данному поводу принимал лечение, которое не закончил.

При исследовании эякулята: количество сперматозоидов - 160 млн (в норме - более 40 млн). Живых - 56% (норма - 80-90%). Нормокинезис (активно поступательные движения) - 32% (норма - более 80%) - имеется значительное снижение двигательной активности сперматозоидов.

После разведения 0,4 мл эякулята 0,4 мл физраствора с добавлением 0,4 мл перфторана вновь провели исследование эякулята: количество сперматозоидов - 160 млн. Живых - 56%. Нормокинезис - 37,5%..Количество сперматозоидов с активно поступательными движениями увеличилось на 17,2%.

Прогноз эффективности лечения мужского бесплодия отрицательный.

Лечение по поводу бесплодия неперспективно. Проведено лечение: с целью устранения ирритативных расстройств - кардура по 2 мг на ночь в течение 10 дней, с целью эрадикации неспецифической флоры - норфлоксацин по 400 мг 2 раза в день в течение 30 дней, с целью профилактики развития кандидоза - дифлюкан 150 мг однократно.

С целью коррекции иммунитета - ректальные свечи Генферона по 500000 ME 2 раза в сутки в течение 14 дней, повторный курс Генферона через 10 дней по 500000 ME 2 раза в сутки в течение 14 дней.

Физиолечение: ректальная лазеротерапия №10, массаж предстательной железы №10. После проведения лечения проведено повторное исследование спермы: количество сперматозоидов - 160 млн, живых - 56% (норма - 80-90%). Нормокинезис (активно поступательные движения) - 36%.

Результат по восстановлению плодовитости - отрицательный.

Пример 4.

Больной А., ист. бол. № К 6311, 36 лет, наблюдается в поликлинике по поводу бесплодия в браке в течение 10 лет.

В анамнезе - хронический простатит, эпидидимит. По данному поводу принимает лечение в настоящее время.

При исследовании эякулята: количество сперматозоидов - 69 млн (в норме - более 40 млн). Живых - 0% (норма - 80-90%). Нормокинезис (активно поступательные движения) - 0% (норма - более 80%) - имеется полное снижение двигательной активности сперматозоидов.

После разведения 0,4 мл эякулята 0,4 мл физраствора с добавлением 0,4 мл перфторана вновь провели исследование эякулята: количество сперматозоидов - 69 млн. Живых - 0%. Нормокинезис - 0%. Количество сперматозоидов с активно поступательными движениями не увеличилось.

Прогноз эффективности лечения мужского бесплодия отрицательный.

Лечение по поводу бесплодия неперспективно.

Проведено лечение: с целью устранения ирритативных расстройств - кардура по 2 мг на ночь в течение 10 дней, С целью элиминации бактериальной флоры пефлоксацин по 400 мг×2 раза в день в течение 4 недель, с целью профилактики развития кандидоза - дифлюкан 150 мг однократно.

С целью коррекции иммунитета - ректальные свечи Генферона по 500000 ME 2 раза в сутки в течение 14 дней, повторный курс Генферона через 10 дней по 500000 ME 2 раза в сутки в течение 14 дней.

Физиолечение: ректальная лазеротерапия №10, массаж предстательной железы №10.

После проведения лечения проведено повторное исследование спермы: количество сперматозоидов - 69, живых - 0 (норма - 80-90%). Нормокинезис (активно поступательные движения) - 0.

Результат по восстановлению плодовитости - отрицательный.

Результат: в результате дополнительного исследования после разведения эякулята в 0,4 мл физиологического раствора (0,9% раствор NACl) и добавлении 0,4 мл перфторана мы прогнозируем положительный или отрицательный результат в лечении секреторных форм мужского бесплодия.

Нами предложен способ прогнозирования эффективности лечения бесплодия, связанного с астенозооспермией. Способ позволяет быстро и точно прогнозировать эффективность лечения секреторных форм мужского бесплодия.

Изобретение относится к области медицины, а именно к урологии и андрологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности лечения бесплодия. Способ заключается в том, что проводят исследование качества спермы путем микроскопического исследования и определяют подвижность сперматозоидов в нативном препарате с физиологическим раствором. При этом в нативный препарат, содержащий 0,4 мл эякулята и 0,4 физиологического раствора, добавляют 0,4 мл перфторана, выдерживают в течение 3 мин и повторно микроскопируют. При увеличении количества подвижных сперматозоидов на 30% и более прогнозируют эффективное лечение бесплодия. Использование способа позволяет усовершенствовать исследование качества спермы для прогнозирования эффективности лечения бесплодия, связанного с астенозооспермией. Способ обеспечивает высокую точность исследования. 1 табл.

Способ исследования качества спермы при астенозооспермии для прогнозирования эффективности лечения бесплодия, включающий микроскопическое исследование подвижности сперматозоидов в нативном препарате с физиологическим раствором, отличающийся тем, что в нативный препарат, содержащий 0,4 мл эякулята и 0,4 мл физиологического раствора, добавляют 0,4 мл перфторана, выдерживают в течение 3 мин и повторно микроскопируют, и при увеличении количества подвижных сперматозоидов на 30% и более прогнозируют эффективное лечение бесплодия.