СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ОТРАВЛЕНИЙ СОЕДИНЕНИЯМИ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ Российский патент 2008 года по МПК A61K31/33 A61P39/02 

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии и может быть использовано в качестве средства для лечения и профилактики отравлений соединениями тяжелых металлов.

Известно применение бис(бензоилметил)селенида (торговое название - ДАФС-25) общей формулы: (C₆H₅COCH₂)₂Se в качестве средства для лечения и профилактики болезней, вызываемых недостаточностью селена в организме сельскохозяйственных животных и птиц (см. патент РФ №2051681, МПК А61К 33/04), и в качестве средства для лечения и профилактики инфекционных заболеваний и отравлений (см. патент РФ №2171110, МПК А61К 33/04). Этот относительно малотоксичный препарат был испытан при отравлении животных микотоксинами.

Арилзамещенные 4Н-селенопираны являются одними из наименее токсичных органических соединений селена (LD₅₀>700 мг/кг) и могут быть использованы в качестве препаратов, обладающих антимикробной и антифаговой активностью (см. А.С. №1246566, МПК C07D 345/00).

Применение 9-фенил-симм-октагидроселеноксантена (который структурно можно отнести к конденсированным селенопиранам) положительно влияет на жизнедеятельность животных, человека, и птиц (см. патент РФ №2230523, МПК A61D 7/00; патент РФ №2230524, МПК A61D 7/00; патент РФ №2230525, МПК A61D 7/00; патент РФ №2230526, МПК A61D 7/00).

Установлено, что в настоящий момент лишь селенит натрия снижает степень тяжести отравления соединениями мышьяка, кадмия, свинца и др. (см. Гигиенические критерии состояния окружающей среды. 58. Селен. - Женева: Всемирная организация здравоохранения. - 1989. - 270 С.). Однако селенит натрия обладает относительно высокой токсичностью (LD₅₀=7-9 мг/кг) (см. Червяков Д.К., Евдокимов П.Д., Вишер А.С., Лекарственные средства в ветеринарии. Справочник. / М.: Колос, 1977, с.432). Поэтому поиск среди селеносодержащих органических соединений представляется актуальным.

Задачей данного изобретения является создание селенсодержащего препарата, который повышает устойчивость животных и человека к отравлению соединениями тяжелых металлов.

Указанное достигается путем введения в организм 2,4-дифенил-7,8-бензо-5,6-дигидроселенохромена.

Данное вещество легко получается из соответствующего 1,5-дикетона и селенида цинка в условиях кислотного катализа (см. Федотова О.В., Древко Я.Б. Журнал «Химия гетероциклических соединений». - 2006. - №10. - С.1586-1587). Установлено неизвестное ранее свойство 2,4-дифенил-7,8-бензо-5,6-дигидроселенохромена снижать степень тяжести отравлений тяжелыми металлами.

Исследована способность 2,4-дифенил-7,8-бензо-5,6-дигидроселенохромена снижать степень тяжести отравления соединениями тяжелых металлов на примере сульфата кадмия (CdSO₄), хлорида кобальта (CoCl₂), нитрата ртути (Hg(NO₃)₂) и арсенита натрия (Na₃AsO₃). В качестве объекта исследования были взяты беспородные белые мыши in vivo со средней массой 20 г (18-23 г), из которых были созданы 7 контрольных групп и 4 экспериментальные группы по десять животных в каждой.

2,4-Дифенил-7,8-бензо-5,6-дигидроселенохромен вводили в виде раствора масла из расчета 0,8 мг/кг (16 мкг в 10 мл оливкового масла). А соли кобальта, кадмия, ртути и мышьяка вводили растворенными в соответствующем объеме дистиллированной воды.

Анализы крови мышей проводились на биохимическом анализаторе Screen master PLUS. Биохимический анализатор Screen master PLUS - полуавтоматический биохимический анализатор, определяет субстраты, ферменты, электролиты, гормоны и некоторые гематологические параметры. Технические характеристики: оптический диапазон - 6 светофильтров; от 340 до 630 нм; линейный диапазон - от 0,006 до 2,500 опт.ед. Точность - 0,001 опт.ед.

Животным первой контрольной группы перорально вводили оливковое масло в количестве 10 мкл в день на протяжении 14 дней.

Животным второй контрольной группы перорально вводили раствор 2,4-дифенил-7,8-бензо-5,6-дигидроселенохромена (селенохромена) в оливковом масле в количестве 10 мкл в день на протяжении 14 дней. В 10 мкл оливкового масла содержалось 16 мкг селенохромена, что для животного весом 20 г составляет дозу 0,8 мг/кг живого веса (табл.1, 3, 5, 7).

Животным третьей контрольной группы перорально вводили раствор 0,9 мг арсенита натрия в 10 мкл дистиллированной воды, что для животного весом 20 г составляет дозу 45 мг/кг живого веса. Смерть подопытных животных наступает через 22-30 часов после введения раствора в организм.

Животным четвертой контрольной группы перорально вводили раствор 0,9 мг арсенита натрия (Na₃AsO₃) в 10 мкл дистиллированйой воды, что для животного весом 20 г составляет дозу 45 мг/кг живого веса. Через 20 час после введения раствора в организм мышей проводили декапитацию и отбор крови на анализ (табл.1, 2).

Животным пятой контрольной группы перорально вводили раствор хлорида кобальта (CoCl₂) в количестве 20 мкл, с дозой 200 мг/кг. Операцию проводили в течение 7 суток, на 7 сутки через 2 часа после введения токсиканта производили декапитацию. В ходе декапитации осуществляли забор крови с ее последующим клинико-лабораторным исследованием. Вскрытие показало, что внутренние органы находятся в предположительной норме (табл.3, 4).

Животным шестой контрольной группы перорально вводили нитрат ртути (Hg(NO₃)₂) в количестве 10 мкл, с дозой 140 мг/кг. Вещества вводили в течение 7 суток, на 7 сутки через 2 часа после введения токсиканта производили декапитацию. В ходе декалитации осуществляли забор крови с ее последующим клинико-лабораторным исследованием. Вскрытие показало обильное кровоизлияние в области легких, сердца и печени (табл.5, 6).

Животным седьмой контрольной группы перорально вводили сульфат кадмия (CdSO₄) в количестве 10 мкл, с дозой 200 мг/кг. Вещества вводили в течение 7 суток, на 7 сутки через 2 часа после введения токсиканта производили декапитацию. В ходе декапитации осуществляли забор крови с ее последующим клинико-лабораторным исследованием. При вскрытии наблюдали кровоизлияние в области легких и сердца (табл.7, 8).

Животным первой экспериментальной группы вводили 2,4-дифенил-7,8-бензо-5,6-дигидроселенохромен в количестве 0,8 мг/кг, через 1 час вводили Na₃AsO₃ с дозой 45 мг/кг. Четверо животных умерло через 20-30 часов. За остальными животными вели наблюдение в течение 7 суток и затем проводили декапитацию. В ходе декапитации осуществляли забор крови с ее последующим клинико-лабораторным исследованием. Результаты исследований представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1
Результаты биохимического исследования крови при проведении эксперимента с арсенитом натрияБиохимический пок-льконтрольNa₃AsO₃селенохроменNa₃AsO₃+селенохроменГлюкоза, ммоль/л5±0,7511,55±2,05р<0,023.98±0,63р<0,057,14±0,34р<0,01ЛДГ, ед/л1117±1342109±151р<0,00120000±5144р<0,011720±158p<0,02Лактат, ед/л0,27±0,022,25±0,43р<0,00112,96±2,53р<0,00111,88±2,32р<0,001ЩФ, ед/л102±10154±14р<0,02105±10р<0,05298±37,8р<0,001АсАТ, ед/л90±3,6190±34р<0,02360±53,9р<0,001780±140р<0,001Мочевина, ммоль/л7,51±0,375,3±0,84р<0,057,3±0,36р<0,058,71±0,39р<0,05Креатинин, г/л152±13,7115±10р<0,0175±9,64р<0,001125±12р<0,001Альбумин, г/л40±2,834,3±2,6р<0,00180±7,5р<0,00138±2,7р<0,001О. белок, г/л58±6,3872±1,9р<0,05105±16,9р<0,02156±29р<0,01АсАт - аспартатаминотрансфераза
ЛДГ - лактатдегидрогеназа
ЩФ - щелочная фосфотаза
р - уровень значимости

Таблица 2
Результаты взвешивания внутренних органов, в граммахОрганы (г)нормаNa₃AsO₃Na₃AsO₃+селенохроменКишечник3,24±0,483,79±0,38р<0,024,67±0,39р<0,05Печень1,92±0,231,57±0,19р<0,021,8±0,23р<0,01Почки0,44±0,040,54±0,03р<0,010,49±0,04р<0,05Сердце0,12±0,010,15±0,01р<0,010,16±0,01р<0,02Легкие0,24±0,030,28±0,03р<0,0010,26±0,03р<0,01Поджелудочная железа0,32±0,060,05±0,02р<0,010,13±0,02р<0,01

Согласно биохимическим показателям крови 2,4-дифенил-7,8-бензо-5,6-дигидроселенохромен не оказывает выраженного антитоксического действия по отношению к препарату мышьяка (активность индикаторных ферментов печени остается повышенной). Однако смертность при применении арсенита натрия в контрольной группе была 100%, и наблюдалось значительное уменьшение массы печени и поджелудочной железы. Применение 2,4-дифенил-7,8-бензо-5,6-дигидроселенохромена приводит к полному восстановлению массы печени и частичному восстановлению массы поджелудочной железы и в значительной степени исключает смертность животных.

Животным второй экспериментальной группы перорально вводили 2,4-дифенил-7,8-бензо-5,6-дигидроселенохромен (0,8 мг/кг), а через 1 час вводили CoCl₂ (200 мг/кг). Операцию проводили в течение 7 суток, на 7 сутки через 2 часа после введения токсиканта производили декапитацию. В ходе декапитации осуществляли забор крови с ее последующим клинико-лабораторным исследованием. Вскрытие показало, что внутренние органы находятся в предположительной норме. Результаты приведены в таблицах 3 и 4.

Таблица 3
Результаты биохимического исследования крови при проведении эксперимента с хлоридом кобальтаБиохимический пок-льконтрольCoCl₂селенохроменCoCl₂+селенохроменГлюкоза, ммоль/л5±0,757.78±0,49р<0,013.98±0,63р<0,058.22±0,48р<0,01ЛДГ, ед/л1117±1343740±716р<0,0120000±5144р<0,0118000±3616р<0,001Лактат, ед/л0,27±0,020,81±0,14р<0,0112,96±2,53р<0,0017,56±1,21р<0,001ЩФ, ед/л102±10306±42р<0,001105±10р<0,05170±19,4р<0,01АсАТ, ед/л90±3,6160±27,7р<0,05360±53,9р<0,001270±49,8р<0,01Мочевина, ммоль/л7,51±0,371,1±0,52р<0,0017,3±0,36р<0,057,1±0,34р<0,05Креатинин, г/л152±13,755±44р<0,0575±9,64р<0,00175±9,65р<0,001Альбумин, г/л40±2,864±4,82р<0,00180±7,5р<0,00176±9,6р<0,01О. белок, г/л58±6,38148±26,5р<0,01105±16,9р<0,02100±10,1р<0,01Таблица 4
Результаты взвешивания внутренних органов, в граммахОрганы (г)нормаCoCl₂CoCl₂+селенохроменКишечник3,24±0,484,19±0,43р<0,0014,22±0,06р<0,05Печень1,92±0,232,10±0,22р<0,021,77±0,22р<0,05Почки0,44±0,040,65±0,04р<0,010,38±0,03р<0,05Сердце0,12±0,010,16±0,01р<0,020,16±0,01р<0,01Легкие0,24±0,030,34±0,03р<0,050,27±0,03р<0,02Поджелудочная железа0,32±0,060,06±0,02р<0,010,15±0,02р<0,02

В результате применения препарата происходит восстановление массы почек, легких и поджелудочной железы. Масса всех остальных органов находится в относительной норме.

Животным третьей экспериментальной группы перорально вводили 2,4-дифенил-7,8-бензо-5,6-дигидроселенохромен (0,8 мг/кг), а через час Hg(NO₃)₂ (140 мг/кг). Вещества вводили в течение 7 суток, на 7 сутки через 2 часа после введения токсиканта производили декапитацию. В ходе декапитации осуществляли забор крови с ее последующим клинико-лабораторным исследованием. В отсутствие такового отмечалось обильное кровоизлияние в области легких, сердца и печени. В случае применения селеноорганического соединения кровоизлияние отсутствует. Результаты исследований приведены в таблицах 5 и 6.

Таблица 5
Результаты биохимического исследования крови при проведении эксперимента с азотнокислой ртутьюБиохимический пок-льконтрольHg(NO₃)₂селенохроменHg(NO₃)₂+селенохроменГлюкоза, ммоль/л5±0,758.85±1,15р<0,023.98±0,63р<0,055,11±0,75р<0,001ЛДГ, ед/л1117±134481±18р<0,00120000±5144р<0,011849±260р<0,05Лактат, ед/л0,27±0,0271,98±12р<0,00112,96±2,53р<0,0014,58±0,9р<0,001ЩФ, ед/л102±10304±44р<0,001105±10р<0,05312±43,5р<0,001АсАТ, ед/л90±3,6120±12р<0,05360±53,9р<0,001170±17р<0,001Мочевина, ммоль/л7,51±0,372,18±0,46р<0,0017,3±0,36р<0,054,92±0,61р<0,01Креатинин, г/л152±13,775±22р<0,0275±9,64р<0,001110±6,6р<0,01Альбумин, г/л40±2,876±9,6р<0,0180±7,5р<0,00181±9,9р<0,01О. белок, г/л58±6,3882±8,26р<0,05105±16,9р<0,0298±12р<0,02

Таблица 6
Результаты взвешивания внутренних органов, в граммахОрганы(г)нормаHg(NO3) 2Hg(NO3)2+селенохроменКишечник3,24±0,484,38±0,33р<0,015,03±0,29р<0,001Печень1,92±0,231,85±0,23р<0,012,25±0,2р<0,02Почки0,44±0,040,53±0,02 р<0,050,62±0,07р<0,05Сердце0,12±0,010,15±0,01р<0,050,17±0,02р<0,05Легкие0,24±0,030,26±0,03р<0,0010,22±0,03р<0,05Поджелудочная железа0,32±0,060,06±0,01р<0,0010,14±0,04р<0,05

Активность АсАт - соответствует норме. Однако, учитывая токсическое действие соли ртути на организм мышей, можно предположить, что нормальная активность АсАт - следствие ингибирующего действия соли ртути на фермент. Подтверждением этого является увеличение активности АсАт в присутствии селеноорганического соединения, а также при совместном применении соли ртути и селенохромена. При биохимическом анализе крови мышей, получавших селенохромен, обнаружено незначительное токсическое действие препаратов селена на печень мышей, что выражается в увеличении активности ферментов сыворотки крови ЩФ и АсАт.

При совместном кормлении мышей солью ртути и селеноорганическим соединением обнаруживается нормализация биохимических показателей сыворотки крови.

В результате применения препарата происходит восстановление массы поджелудочной железы. Масса всех остальных органов находится в относительной норме.

Животным четвертой экспериментальной группы перорально вводили 2,4-дифенил-7,8-бензо-5,6-дигидроселенохромен (0,8 мг/кг), а через час CdSO₄ (200 мг/кг). Вещества вводили в течение 7 суток, на 7 сутки через 2 часа после введения токсиканта производили декапитацию. В ходе декапитации осуществляли забор крови с ее последующим клинико-лабораторным исследованием. При вскрытии наблюдали кровоизлияние в области легких и сердца. В случае применения селеноорганического соединения кровоизлияние отсутствует. Результаты исследований приведены в таблицах 7 и 8.

Таблица 7
Результаты биохимического исследования крови при проведении эксперимента с сульфатом кадмияБиохимический пок-льконтрольCdSO₄селенохроменселенохромен+CdSO₄Глюкоза, ммоль/л5±0,759.54±0,75р<0,013.98±0,63р<0,055.95±0,63р<0,05ЛДГ, ед/л1117±1344018±134р<0,0120000±5144р<0,0119516±3830р<0,001Лактат, ед/л0,27±0,0265,0±0,02р<0,00112,96±2,53р<0,00111,13±2,22р<0,001ЩФ, ед/л102±10430±10р<0,01105±10р<0,05128±2р<0,05АсАТ, ед/л90±3,6290±3,6р<0,001360±53,9р<0,001210±39,8р<0,02Мочевина, ммоль/л7,51±0,371,03±0,37р<0,0017,3±0,36р<0,057,4±0,37р<0,02Креатинин, г/л152±13,7*75±14р<0,00175±9,64р<0,00163±11,4р<0,001Альбумин, г/л40±2,849±2,8р<0,00180±7,5р<0,00172±7,5р<0,01О. белок, г/л58±6,38112±6,4р<0,05105±16,9р<0,0278±4,3р<0,05Таблица 8
Результаты взвешивания внутренних органов, в граммахОрганы (г)нормаCdSO4CdSO4+селенохроменКишечник3,24±0,483,38±0,48р<0,054,08±0,45р<0,001Печень1,92±0,231,35±0,14р<0,051,92±0,23р<0,01Почки0,44±0,040,37±0,04р<0,0010,49±0,04р<0,02Сердце0,12±0,010,12±0,01р<0,010,10±0,01р<0,01Легкие0,24±0,030,24±0,03р<0,020,28±0,03р<0,02Поджелудочная железа0,32±0,060,04±0,01р<0,010,09±0.01р<0,001

В результате применения препарата происходит восстановление массы почек, печени и поджелудочной железы. Масса всех остальных органов находится в относительной норме.

Таким образом, показано, что применение 2,4-дифенил-7,8-бензо-5,6-дигидроселенохромена целесообразно при отравлении солями тяжелых металлов.

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии и описывает применение 2,4-дифенил-7,8-бензо-5,6-дигидроселенохромена в качестве средства для лечения и профилактики отравлений соединениями тяжелых металлов. Данный селенсодержащий препарат повышает устойчивость животных и человека к отравлению соединениями тяжелых металлов. 8 табл.

Применение 2,4-дифенил-7,8-бензо-5,6-дигидроселенохромена в качестве средства для лечения и профилактики отравлений соединениями тяжелых металлов.