СПОСОБ ОБСЛЕДОВАНИЯ ЖЕНЩИН НА НАЛИЧИЕ КАМПИЛОБАКТЕРИЙ В СОДЕРЖИМОМ ЦЕРВИКАЛЬНОГО КАНАЛА Российский патент 2008 года по МПК G01N33/48 C12Q1/04 

Предложенное изобретение относится к медицине, а именно к способу выявления кампилобактерий в цервикальном канале у женщин с невынашиванием беременности.

Известен способ лабораторной диагностики инфекций, вызванных бактерией рода Campylobacter (А.А.Воробьев, Л.А.Сичинский, С.А.Дратвин. 2000 г., З.У.Темирханова, П.Ш.Гашимова, Н.В.Сафонова, А.Ф.Мороз, Л.В.Хазенсон, 1999 г; Клинико-бактериологическая диагностика острых кишечных инфекций, 2003 г.). Известно наблюдение за женщинами с невынашиванием беременности в анамнезе и подозрением на хронический воспалительный процесс в гениталиях - наличие эктопии шейки матки - включает в себя обследование на стандартный набор инфекций, передаваемых половым путем, и бактериальный посев содержимого цервикального канала на условно-патогенную флору (Приказ №50 от 10.02.2003 г. МЗ РФ).

Из материалов исследований в ветеренарии достоверно известно влияние кампилобактерной инфекции на факт самопроизвольного аборта крупного рогатого скота (А.Н.Трубицкий. 1988 г.).

Неоднократно встречаются сообщения о высеве кампилобактерной инфекции у женщин, перенесших самопроизвольный аборт (Rams Т.Е., Feik D., Stots J. 1993).

Способ заключается в двухэтапном исследовании содержимого цервикального канала:

1 этап - бактериоскопия нативных мазков из цервикального канала, окрашенных по Граму;

2 этап - посев содержимого цервикального канала у женщин с обнаруженными в нативном мазке бактериями, морфологически сходными с кампилобактериями.

Способ заключается в посеве материала на селективный агар для кампилобактеров, содержащий селективную смесь антибиотиков. Посевы культивируют в микроаэрофильных условиях; чашки с посевом помещаются в микроаэростат.

При наличии микроанаэростатов с манометром после помещения в них посевов откачивают воздух до - 1 атм. Затем загружают специальной газовой смесью, находящейся в баллоне (83-85% - азота, 15-13% углекислого газа, 2% - кислорода). Откачку и загрузку газовой смесью повторяют еще 2 раза.

Посевы инкубируют при 37°С 48 часов.

Использование стандартных объемов обследования беременных на наличие инфекции в половых путях имеет ряд недостатков:

1 - бактериоскопию мазков на флору у беременных с эктопией шейки матки проводят с использованием окраски метиленовой синью, что не позволяет идентифицировать кампилобактер по морфологии;

2 - бактериальный посев у беременных с признаками кольпита или цервицита позволяет выявить наличие лишь части условно-патогенной инфекции, так как используемые питательные среды и условия культивирования не позволяют оценить наличия микроаэрофильных или анаэробных микроорганизмов в содержимом цервикального канала, в частности кампилобактеров.

Цель изобретения- повышение качества обследования, наблюдения и лечения женщин с самопроизвольными абортами в анамнезе.

Цель достигается путем тщательного обследования женщин на наличие кампилобактерной инфекции в цервикальном канале с использованием данной методики в бактериологическом исследовании и назначении адекватного лечения с последующим контролем.

Способ осуществляют следующим образом:

1) микроскопия мазков из цервикального канала, окрашенных по Граму, карболовым фуксином Циля 1:5;

2) содержимое цервикального канала у женщин с обнаруженными бактериями, морфологически сходными с кампилобактериями, засевают на плотную питательную среду - селективный агар для кампилобактеров производства Hi Media, Индия, содержащий селективную смесь антибиотиков. Посев производят непосредственно сразу после забора материала щеткой для ПНР-диагностики. Посевы культивируют в микроаэрофильных условиях; чашки с посевом помещаются в микроанаэростат. При наличии эксикаторов с манометром после помещения в них посевов проводят откачивание воздуха до -1 атм. Затем загружают специальной газовой смесью, находящейся в баллоне (83-85% азота, 15-13% углекислого газа, 2% кислорода). Откачку и загрузку газовой смесью повторяют еще 2 раза. Посевы инкубируют при 37°С 48 часов с последующим изучением роста.

3) Изучают рост на питательных средах, определяют подвижность и морфологию бактерий, каталазную, оксидазную и уреазную активность. Изучают характер роста на плотных питательных средах. Кампилобактеры образуют 2 типа колоний. Первый тип встречается наиболее часто. Это крупные плоские, округлые, растекающиеся в виде «лужиц» колонии неправильной формы, 2-8 мм в диаметре, бесцветные, прозрачные, напоминающие капли конденсационной воды, или светло-серые, без гемолиза. Второй тип колоний - очень мелкие, 1-2 мм в диаметре, круглой правильной формы, с ровными краями, с блестящей, гладкой поверхностью, выпуклые, прозрачные, без гемолиза.

4) Из колоний, характерных для кампилобактеров, готовят мазки, окрашенные по Граму, для изучения морфологии микроба и «раздавленную каплю» в физиологическом растворе для выявления подвижности микроба. В окрашенном мазке обнаруживают мелкие спиралевидные изогнутые вокруг продольной оси извитые формы палочек, располагающихся одиночно, парами или в виде «крыльев чайки». Подвижность определяется при фазовоконтрастной микроскопии с масляной иммерсией, объективом 90 и фазовым кольцом 90. Кампилобактеры двигаются стремительно, «штопорообразно», ввинчиваются в окружающую среду и мечутся из стороны в сторону. Культура считается подвижной, если в 10-12 полях зрения обнаруживают хотя бы одну активно движущуюся бактериальную клетку. Видовую принадлежность выделенной культуры определяют по термофильности (рост при температуре 37°С) и по способности к быстрому гидролизату гиппурата натрия и резистентности к налидиксовой кислоте. Тесты на чувствительность к налидиксовой кислоте и цефалотину проводят с использованием соответствующих дисков с концентрацией 30 мкг (обычные диски для постановки антибиотикорезистентности бактерий). Методика выполнения данных тестов полностью соответствует методике определения антибиотикорезистентности бактерий. Применяют кампилобакагар, содержащий селективную смесь антибиотиков. Посевы инкубируют при 37°С в течение 48 часов в микроаэрофильных условиях. Наличие роста свидетельствует о резистентности культуры к налидиксовой кислоте, отсутствие роста - о ее чувствительности.

5) Параллельно проводят посев на среду Китта-Тароцци (регенерированная - без кислорода) для проведения чистой культуры кампилобактерий. Инкубация в тех же условиях, 48 часов.

Положительный результат бактериологического исследования позволяет назначить адекватную антибиотикотерапию, направленную на элиминацию возбудителя из организма женщины вне и во время беременности, что позволит предотвратить осложнения беременности.

Для иллюстрации результата обследования на кампилобактер приводим пример.

Б-я А.А., 26 лет, на момент осмотра беременность 9-10 недель, по данным УЗИ - анембриония; жалоб нет. Соматический анамнез не отягощен. Из гинекологического анамнеза: эктопия шейки матки, хронический левосторонний аднексит с обострениями 2-3 раза в год, рецидивирующий кандидозный кольпит до 2-3 раз в год.

Первая беременность - неразвивающаяся на сроке 7 недель.

Обследована на наличие факторов прерывания беременности:

ИППП, резус - АВО - конфликт, истмико-цервикальная недостаточность, генетические факторы, антифосфолипидный синдром - данных не обнаружено.

Проведено обследование на наличие кампилобактерной инфекции в половых путях по описанной выше схеме. При бактериоскопии нативного мазка из цервикального канала обнаружены микроорганизмы, морфологически сходные с кампилобактером.

Далее произведен посев на кампилагар содержимого цервикального канала, выявлен рост специфических колоний кампилобактера.

Тест на подвижность со среды Китта-Тароцци положителен.

Проведена специфическая антибиотикотерапия джозамицином и метронидазолом, витаминотерапия.

При контрольном обследовании через месяц после окончания лечения кампилобактер выявлен не был.

Б-я П.Г., 28 лет, на момент осмотра предъявляла жалобы на ноющие боли внизу живота, поясничной области в середине менструального цикла. Из соматического анамнеза - хронический гастрит с частыми обострениями. Гинекологический анамнез: эктопия шейки матки выявлена в 1995 г, произведена диатермопунктура. Первая беременность завершилась срочными родами, ребенок здоров; течение беременности осложнялось длительной клиникой угрозы прерывания беременности. Вторая беременность прервалась на сроке 14-15 недель, также протекала с клиникой угрозы прерывания. Обследована на наличие факторов прерывания беременности - данных не выявлено.

Произведено обследование на наличие кампилобактерной инфекции в цервикальном канале по описанной методике. Кампилобактер выявлен при посеве содержимого цервикального канала на среды кампилагар и Китта-Тароцци.

Б-я Г.З., 24 года, на момент осмотра жалобы на умеренные боли внизу живота после самопроизвольного прерывания беременности.

Соматический анамнез не отягощен. Гинекологический анамнез: эктопия шейки матка 3 года, не беспокоит; хронический 2-сторонний аднексит. Первая беременность завершилась самопроизвольным абортом на сроке 20 недель, вторая - срочными родами, ребенок здоров. Во время третьей беременности беспокоили постоянные боли внизу живота, на сроке 16 недель произошло самопроизвольное прерывание беременности.

Произведено обследование на кампилобактер по описанной выше методике. Кампилобактер выделен из цервикального канала при посеве на кампилагар и среду Китта-Тароцци.

Преимущества предлагаемого способа выявления кампилобактера у женщин с потерей плода в анамнезе состоят в ряде факторов:

1) выделение женщин с самопроизвольным прерыванием беременности предположительно инфекционного генеза в особую группу по по риску кампилобактерной инфекции;

2) двухэтапное обследование женщин последовательно бактериоскопическим и бактелиологическим методами с использованием указанной выше методики;

3) назначение антибиотикотерапии должно быть обосновано выявлением кампилобактера бактериологическим методом в посевах на кампилагар и на среду Китта-Тароцци.

Предлагаемый нами способ обследования на наличие кампилобактерной инфекции в цервикальном канале позволит выявить причинный фактор прерывания беременности у женщин с привычными выкидышами, ранее не рассматривающийся в гинекологии как инфекция из группы передаваемых половым путем. Адекватно назначенное лечение позволит устранить причину потери желанной беременности.

Предлагаемый нами способ можно рекомендовать для широкого использования в акушерско-гинекологической практике.

Источники информации

1. Клинико-бактериологическая диагностика острых кишечных инфекций. Методические рекомендации для микробиологов, инфекционистов, эпидемиологов. Казань 2003 г. С.87-93.

2. Приказ №50 от 10.02.2003 г. МЗ РФ «О совершенствовании акушерско-гинекологической помощи в амбулаторно-поликлинических учреждениях». Москва. 2003 г.

3. А.Н.Трубицкий. Эпизоотология, эпидемиология, средства диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней, общих для человека и животных. Материалы Всесоюзной конференции, Львов. 1988. С.428-429.

4. А.А.Воробьев, Л.А.Сичинский, С.А.Дратвин. Возможности лабораторной диагностики инфекций, вызванных бактериями рода Campylobacter. Журнал микробиологии 2000, №1. С.95-103.

5. З.У.Темирханова, П.Ш.Гашимова, Н.В.Сафонова, А.Ф.Мороз, Л.В.Хазенсон. Питательная среда для выделения и культивирования кампилобактерий. НПО «Питательные среды», Махачкала; НИИ эпидемиологии и микробиологии им Н.Ф.Гамалеи, Москва., 1999 г.

6. Rams Т.Е., F eik D., S tots J. // J. Oral. Microb. Immunol. - 1993. - Vol.8. - P.44-48.

Предложенное изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике. Сущность способа заключается в том, что исследуют содержимое цервикального канала, при этом сначала проводят микроскопию мазков из цервикального канала, окрашенных по Граму, карболовым фуксином Циля 1:5, затем содержимое цервикального канала у женщин с обнаруженными бактериями, морфологически схожими с кампилобактериями, засевают на селективный агар и чашки с посевом помещают в микроаэростат, после помещения в них посевов производят откачивание воздуха до - 1 атм, затем загружают специальной газовой смесью, содержащей 83-85% азота, 15-13% углекислого газа, 2% кислорода, откачку и загрузку газовой смесью повторяют 2 раза, инкубируют при 37°С в течение 48 часов, с последующим изучением роста для выявления специфических колоний кампилобактерий. Использование способа позволяет повысить качество бактериологического обследования, наблюдения и лечения женщин с самопроизвольными абортами в анамнезе.

Способ обследования женщин на наличие кампилобактерий, отличающийся тем, что исследуют содержимое цервикального канала, при этом сначала проводят микроскопию мазков из цервикального канала, окрашенных по Граму, карболовым фуксином Циля 1:5, затем содержимое цервикального канала у женщин с обнаруженными бактериями, морфологически схожими с кампилобактериями, засевают на селективный агар и чашки с посевом помещают в микроаэростат, после помещения в них посевов производят откачивание воздуха до -1 атм., затем загружают специальной газовой смесью, содержащей 83-85% азота, 15-13% углекислого газа, 2% кислорода, откачку и загрузку газовой смесью повторяют 2 раза, инкубируют при 37°С в течение 48 ч с последующим изучением роста для выявления специфических колоний кампилобактерий.