СПОСОБ КОМПЛЕКСНОЙ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА В, ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА С, ВИЧ-ИНФЕКЦИИ И СИФИЛИСА Российский патент 2008 года по МПК G01N33/569 G01N33/546 G01N33/53 

Изобретение относится к способам комплексной диагностики инфекционных заболеваний, таких как вирусный гепатит В, вирусный гепатит С, ВИЧ-инфекция 1-го и 2-го типов и сифилис на основе анализа сыворотки или плазмы крови, может использоваться в медицине для выявления названых болезней.

Выполнение анализов на наличие инфекционных маркеров вируса гепатита В, вируса гепатита С, вируса иммунодефицита человека 1-го и 2-го типов и сифилиса является обязательным для всех доноров крови и органов в России, США и многих других странах. Кроме того, в связи с широким распространением названных инфекций такие анализы в настоящее время являются наиболее востребованными и распространенными.

Известны способы диагностики вирусного гепатита В, вирусного гепатита С, ВИЧ-инфекции 1-го и 2-го типов и сифилиса путем выявления маркеров инфекционных агентов либо маркеров начавшегося инфекционного процесса в физиологических жидкостях пациентов. Причем исследование биологических проб для выявления этих заболеваний проводят отдельно для каждого из перечисленных заболеваний.

Например, диагностику осуществляют путем выявления ДНК или РНК инфекционного агента в физиологических жидкостях человека, в том числе в сыворотке крови, методом полимеразной цепной реакции или методом обратной транскрипции - полимеразной цепной реакции.

Существующая практика выявления этих заболеваний включает проведение скринингового и подтверждающего тестирования сыворотки или плазмы крови методом ИФА, а также методом иммунного блоттинга.

При проведении скрининговых тестов определяют наличие в сыворотке или плазме крови антител, специфичных к антигенам определенного инфекционного агента. Данные о наличии или отсутствии антител к тем или иным антигенам инфекционного агента в отдельности, а также данные о присутствии специфических антигенов в сыворотке крови являются незаменимыми для дифференциальной диагностики, оценки тяжести и прогноза течения заболевания, выбора способа лечения болезни.

В настоящее время для выявления антител к различным антигенам инфекционного агента применяют подтверждающие иммуноферментные тест-системы, в которых необходимо осуществлять отдельные анализы для каждого из исследуемых параметров.

Иммуноферментные тест-системы последних поколений позволяют определять наличие специфических антител и антигенов инфекционных агентов в крови одновременно, но без возможности дискриминировать полученный сигнал.

Метод иммунного блоттинга позволяет получить информацию о спектре антител к различным антигенам, но остается низкочувствительным, дорогим и низкопроизводительным, что резко ограничивает его использование в повседневной практике.

Наиболее близким аналогом предлагаемого решения является способ диагностики, который осуществляют путем выявления в сыворотке или плазме крови специфических иммуноглобулинов против антигенов инфекционных агентов методом твердофазного иммуноферментного анализа [патент РФ № 2137138]. При этом антигены инфекционных агентов иммобилизуют на твердой поверхности в лунках планшета. В названные лунки планшета затем вносят клинический образец сыворотки или плазмы крови. После этого иммунохимически определяют антитела, связавшиеся с иммобилизованными на твердой поверхности антигенами. Этот способ принят за прототип изобретения. К его недостаткам относится невозможность одновременной диагностики всех перечисленных заболеваний, большая длительность проведения анализов и высокие трудозатраты.

Изобретение решает задачу создания такого способа проведения комплексной диагностики вирусного гепатита В, вирусного гепатита С, ВИЧ-инфекции 1-го и 2-го типов и сифилиса, который позволял бы одновременно выявлять инфекционные маркеры всех названных заболеваний, был простым в исполнении, позволял многократно понизить общие трудозатраты на его осуществление и при этом пропорционально увеличить информационную плотность диагностики.

Поставленная задача решается тем, что предлагается способ комплексной диагностики вирусного гепатита В, вирусного гепатита С, ВИЧ-инфекции 1-го и 2-го типов и сифилиса, по которому на твердой поверхности микрочастиц иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита С, вируса иммунодефицита человека 2-го типа и бактерии Treponema Pallidum, а также белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита В, а также белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита В и/или иммуноглобулины, специфичные к антигену HBsAg названного вируса гепатита В, и белки, несущие антигенные детерминанты вируса иммунодефицита человека 1-го типа и/или иммуноглобулины специфичные к антигену р24 названного вируса иммунодефицита человека 1-го типа, причем каждый из названных белков иммобилизуют на поверхности микрочастиц определенного типа, после чего названные микрочастицы смешивают между собой с образованием суспензии, в которую вводят сыворотку или плазму исследуемой крови с получением рабочей смеси, которую инкубируют при температуре 20-42°C в течение по меньшей мере 10 минут, затем вводят раствор, содержащий люминесцентные метки, способные присоединяться к белкам, связавшимся с названными иммобилизованными на поверхности микросфер белками, затем полученную смесь инкубируют при температуре 20-42°C в течение по меньшей мере 10 минут, после чего определяют тип каждой микрочастицы и люминесценцию метки, присоединившейся к белку, связавшемуся с иммобилизованным на поверхности микрочастицы белком.

Микрочастицы могут быть выполнены одинаковой формы, например, в виде микросфер диаметром 1-50 мкм или микроцилиндров диаметром 1-50 мкм имеющих достаточную площадь для иммобилизации на их поверхности белков. В таком случае тип микрочастицы определяется ее размером. Для иммобилизации каждого белка выбирают микрочастицы определенного размера, отличного от других микрочастиц, предназначенных для иммобилизации других белков.

Микрочастицы могут быть выполнены одинаковой формы и размеров, но иметь разный профиль люминесценции. Для этого их либо изготавливают из материала, изначально содержащего люминесцентные вещества с разными спектрами поглощения и испускания или включения комбинации различных люминесцентных соединений, либо подвергают отдельной обработке уже после их изготовления из вещества, изначально не обладающего люминесценцией. В этом случае тип микрочастицы определяется ее профилем люминесценции, и для иммобилизации каждого белка подбираются микрочастицы, отличающиеся от других профилем люминесценции.

Для диагностики гепатита В на поверхности микрочастиц иммобилизуют иммуноглобулины, специфичные к антигену HBsAg названного гепатита В и/или белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита В, входящие в состав его белковых структур: HBcoreAg и/или HBeAg и/или HBsAg.

Для диагностики гепатита С на поверхности микрочастиц иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита С, входящие в состав его белковых структур, например: Ns 3, и/или Ns 4, и/или Ns 5, и/или Core.

Для диагностики ВИЧ-инфекции 1-го типа на поверхности микрочастиц иммобилизуют иммуноглобулины, специфичные к антигену р24 названного вируса иммунодефицита человека 1-го типа и/или белки, несущие антигенные детерминанты вируса иммунодифицита человека 1-го типа, входящие в состав его белковых структур: gp41, и/или gp120, и/или р24.

Для диагностики ВИЧ-инфекции 2-го типа на поверхности микрочастиц иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты вируса иммунодифицита человека 2-го типа, входящие в состав его белковой структуры gp36.

Для диагностики сифилиса на поверхности микрочастиц иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты бактерии Treponema pallidum, входящие в состав ее белковых структур, например р17 и/или р47.

Целесообразно сыворотку или плазму исследуемой крови разбавлять в рабочей смеси в соотношении (1:10)-(1:500).

Для сокращения времени инкубирования целесообразно рабочую смесь во время инкубирования постоянно перемешивать.

Перед введением раствора, содержащего люминесцентные метки, способные присоединяться к белкам из исследуемого образца, связавшимся с иммобилизованными на поверхности микросфер белками, микрочастицы можно выделить из рабочей смеси фильтрованием и промыть их 2-6 раз с целью освобождения от несвязавшихся компонентов рабочей смеси.

Также перед определением типа каждой микрочастицы они могут быть выделены из рабочей смеси фильтрованием и промыты 2-6 раза с целью освобождения от несвязавшихся компонентов рабочей смеси.

Люминесцентной меткой может быть смесь конъюгата антивидовых антител против иммуноглобулинов человека с люминесцентным соединением и коньюгата стрептавидина или авидина или их производных с люминесцентным соединением.

Также люминесцентной меткой может быть смесь конъюгатов белков, несущих антигенные детерминанты вируса гепатита В, вируса гепатита С, вируса иммунодефицита человека 1-го типа, вируса иммунодефицита человека 2-го типа и бактерии Treponema Pallidum с люминесцентным соединением, и коньюгата стрептавидина или авидина или их производных с люминесцентным соединением.

Также люминесцентной меткой может быть смесь из конъюгатов белков, несущих антигенные детерминанты вируса гепатита В, вируса гепатита С, вируса иммунодефицита человека 1-го типа, вируса иммунодефицита человека 2-го типа и бактерии Treponema Pallidum с биотином, или его производными, и конъюгата стрептавидина или авидина или их производных с люминесцентным соединением.

Также люминесцентной меткой может быть смесь конъюгата антивидовых антител против иммуноглобулинов человека с биотином или его производными, и коньюгата стрептавидина или авидина или их производных с люминесцентным соединением.

В том случае, если на поверхность микрочастиц определенного типа иммобилизованы иммуноглобулины, специфичные к антигену HBsAg вируса гепатита В, и/или иммуноглобулины, специфичные к антигену р24 вируса иммунодефицита человека 1-го типа, люминесцентная метка содержит, например, биотинилированные иммуноглобулины против антигенов HBsAg вируса гепатита В и/или р24 вируса иммунодефицита человека 1-го типа.

Люминесцентным соединением в люминесцентной метке может служить, например, R-фикоэритрин или его производные.

При получении суспензии к перемешанным между собой микрочастицам разных типов добавляют, например, буферный раствор разведения сыворотки или плазмы крови.

Во время инкубации специфические антитела, содержащиеся в образце, могут связаться с соответствующими антигенами, иммобилизованными на разных микрочастицах, аналогично свободные антигены при их наличии в образце также могут связаться с соответствующими антителами, иммобилизованными на микрочастицах. После добавления люминесцентной метки из названной рабочей смеси выделяют микрочастицы и определяют тип каждой микрочастицы - ее размер, или профиль люминесценции, а также люминесценцию молекул, связавшихся на поверхности микрочастиц в иммунные комплексы. При наличии люминесценции молекул, связавшихся с поверхностью микрочастиц, выше определенного уровня, делают вывод о наличии того или иного маркера (антител и/или антигенов) в исследуемой крови.

Возможны другие варианты детекции связавшихся антител и антигенов из клинического образца с микрочастицами, в частности, с применением системы биотин-авидин/стрептавидин и аналогичных ей. В любом случае, на этапе детекции образовавшихся иммунных комплексов должны быть использованы люминесцентные метки.

Как правило, связанные с антигенами на поверхности микрочастиц антитела относятся к классам: IgG, и/или IgA, и/или IgM.

Микрочастицы могут быть выполнены из любого нейтрального в химическом отношении вещества, например полистирола. Микрочастицы должны иметь плотность, близкую к плотности воды для обеспечения медленного оседания в водных растворах.

Способ осуществляют следующим образом.

Микрочастицы, выполненные, например, в форме микросфер из полимерного материала (полистирола, или модифицированного полистирола, или другого материала, пригодного для осуществления иммобилизации белков на его поверхности), выбирают разных типоразмеров, преимущественно в диапазоне 1-50 мкм, в зависимости от количества видов белков, которые должны быть иммобилизованы для выполнения анализов. Таких типоразмеров может быть не менее пяти, так как способ предназначен для одновременной диагностики четырех заболеваний, из которых ВИЧ-инфекция 2-х типов. Например, микросферы выбирают диаметром 1 мкм, 4 мкм, 8 мкм, 10 мкм и 15 мкм. Однако для диагностики каждого заболевания может использоваться несколько белков - антигенов или антител, например, для диагностики сифилиса одновременно могут использоваться два белка, несущие соответствующие антигенные детерминанты бактерии Treponema pallidum, входящие в состав ее белковых структур: р17 и/или р47. В таком случае каждому из них должен соответствовать свой типоразмер микросфер, например 15 мкм и 17 мкм.

Также микрочастицы могут быть выполнены одного размера, но различаться по профилю собственной люминесценции. В этом случае микросферы либо предварительно обрабатываются специальным образом, либо изначально изготавливаются из материала, в который добавлены люминесцентные компоненты, обеспечивающие собственный люминесцентный профиль микросферы. Таким образом, при иммобилизации белков на поверхности люминесцентных микросфер каждому их типу соответствуют микросферы определенного профиля люминесценции, отличного от других.

На поверхности каждой микросферы иммобилизуют известными способами белки, несущие антигенные детерминанты белковых структур инфекционных агентов ВГВ, ВГС, ВИЧ 1-2, Treponema Pallidum: HBcAg, и/или HBeAg, и/или HBsAg, Ns 3, и/или Ns 4, и/или Ns 5, и/или core, gp 41, и/или gp 120, и/или р24, и/или gp 36, р17 и/или р47, и/или иммуноглобулины, специфичные к антигену р24 вируса иммунодефицита человека 1-го типа и/или к антигену HBsAg вируса гепатита В, причем каждый из названных белков имимобилизуют на поверхность микросфер, имеющих определенный диаметр или профиль люминесценции. Названные белки могут использоваться в любом сочетании, однако в любом случае должны присутствовать белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита В, вируса гепатита С, вируса иммунодефицита человека 1-го и 2-го типа и Treponema Pallidum, причем, как уже упоминалось ранее, каждый из названных белков иммобилизуют на твердую поверхность микросфер определенного диаметра или определенного профиля люминесценции.

Иммобилизация белков на поверхности микросфер может быть осуществлена, например, химически с образованием ковалентных связей между белком и материалом микросферы или пассивно за счет гидрофобных и/или ионных взаимодействий материала микросферы с иммобилизуемым белком.

Микросферы всех типов с иммобилизованными на их поверхности белками-антигенами и антителами смешивают, например, в равном числовом соотношении между собой и с буферным раствором разведения сыворотки или плазмы крови с образованием суспензии. Образец сыворотки либо плазмы крови человека вносят в суспензию микросфер, при этом конечное разбавление образца составляет 1:100. Полученную таким образом рабочую смесь инкубируют при температуре 20-42°C в течение 10-60 минут при непрерывном перемешивании (шейкировании), в результате чего присутствующие в исследуемом образце антитела связываются с соответствующими им антигенами, иммобилизованными на поверхности микросфер. Аналогично, свободные антигены при их наличии в образце также могут связаться с соответствующими антителами, иммобилизованными на микросферах.

Для выявления целевых молекул, связавшихся в иммунные комплексы на поверхности микросфер, используются различные схемы с использованием люминесцентных меток. Например, для выявления связавшихся антител различных классов могут применяться конъюгаты антивидовых иммуноглобулинов с люминесцентными метками либо с биотином. Во втором случае необходимо использование дополнительного конъюгата авидина (или аналогичного по функции соединения) с флуоресцентными соединениями. Для выявления связавшихся на поверхности микросфер антигенов могут использоваться конъюгаты иммуноглобулинов против этих антигенов с флуоресцентными соединениями либо с биотином. Во втором случае необходимо использование дополнительного конъюгата авидина (или аналогичного по функции соединения) с флуоресцентными соединениями.

После инкубации с образцами сывороток из рабочей смеси выделяют микросферы известными способами, например фильтрацией для отделения микросфер от несвязавшихся компонентов рабочей смеси с последующей их одно- или многократной промывкой на фильтре. Микросферы далее ресуспендируют в растворе, содержащем соответствующий люминесцентный конъюгат или смесь конъюгатов для выявления целевых молекул, связавшихся в иммунные комплексы на поверхности микросфер. Смесь инкубируют от 10 до 30 минут при постоянном перемешивании (шейкировании) при температуре 20-42°C. После этого рабочую смесь подвергают анализу, для чего используются специальные проточные цитометры или иное оборудование, способное определять размер или люминесценцию микрочастиц и люминесценцию связавшихся на поверхности конъюгатов. Полученные данные люминесценции молекул, связавшихся в иммунные комплексы на поверхности микросфер соотносят с профилем флуоресценции микросфер, либо с их размером, после чего делают выводы о наличии или отсутствии антител к тому или иному антигену (который был иммобилизован на соответствующий тип микросферы) и/или антигенов р24 ВИЧ1 и HBsAg ВГВ в исследуемом образце сыворотки крови.

В результате проведенного таким образом анализа сыворотки или плазмы крови определяют наличие или отсутствие в ней инфекционных маркеров вирусного гепатита В, вирусного гепатита С, ВИЧ-инфекции 1-го и 2-го типа, сифилиса.

Таким образом предлагаемое изобретение позволяет одновременно выполнять комплексную диагностику гепатита В, гепатита С, ВИЧ-инфекции 1-го и 2-го типов, сифилиса, что сокращает время и трудозатраты на проведение анализов. Способ может быть полностью автоматизирован.

Пример 1

Для выполнения комплексной диагностики вирусного гепатита В, вирусного гепатита С, ВИЧ-инфекции 1-го и 2-го типа, сифилиса на поверхность микросфер, выполненных из полистирола иммобилизуют:

- на микросферы диаметром 1 мкм иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита В, входящие в состав ее белковой структуры HBcAg;

- на микросферы диаметром 8 мкм иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита С, входящие в состав ее белковой структуры Core;

- на микросферы диаметром 12 мкм иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты ВИЧ-1, входящие в состав его белковых структур gp 41;

- на микросферы диаметром 15 мкм иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты ВИЧ-2, входящие в состав его белковых структур gp 36;

- на микросферы диаметром 20 мкм иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты бактерии Treponema pallidum, входящие в состав ее белковых структур: р17.

Микросферы в равном количестве смешивают между собой в буферном растворе разведения образца с получением суспензии. Сыворотку анализируемой пробы крови добавляют к суспензии в конечном разведении 1:50. Полученную таким образом смесь в течение 30 мин при непрерывном перемешивании выдерживают при 20°С. После этого рабочую смесь фильтруют, отделяя микросферы от жидкости. Далее микросферы три раза промывают на фильтре.

Промытые микросферы ресуспендируют в растворе, содержащем конъюгат антивидовых антител против иммуноглобулинов класса IgG человека с R-фикоэритрином. Полученную таким образом реакционную смесь инкубируют при 25°C в течение 20 минут при непрерывном перемешивании. Затем смесь рабочую смесь подвергают анализу.

Для проведения анализа микросферы помещают в проточный цитометр, который фиксирует размер микросферы и люминесценцию связавшегося на его поверхности конъюгата.

При проведении анализа выявлено, что на микросферах диаметром 20 мкм имеется уровень флуоресценции, указывающий на наличие специфических антител класса IgG против антигена р17 Treponema Pallidum в образце исследуемой сыворотки.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается способа комплексной диагностики инфекционных заболеваний, таких как вирусный гепатит В, вирусный гепатит С, ВИЧ-инфекция 1-го и 2-го типов и сифилис на основе анализа сыворотки или плазмы крови, и может использоваться в медицине для выявления названных болезней. Способ заключается в том, что на твердой поверхности микрочастиц иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты вирусов гепатита В и С, вирусов иммунодефицита человека 1-го и 2-го типа и бактерии Treponema Pallidum, причем каждый из названных белков иммобилизуют на поверхности микрочастиц определенного размера, после чего названные микрочастицы смешивают между собой с образованием суспензии, в которую вводят сыворотку или плазму исследуемой крови. Способ позволяет одновременно выявлять инфекционные маркеры всех названных заболеваний и является простым в исполнении. 20 з.п. ф-лы.

1. Способ комплексной диагностики вирусного гепатита В, вирусного гепатита С, ВИЧ-инфекции 1-го и 2-го типов и сифилиса, по которому на твердой поверхности иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты инфекционных агентов или иммуноглобулины, специфичные к антигенам инфекционных агентов, затем сыворотку или плазму исследуемой крови вводят в контакт с названной твердой поверхностью и выявляют наличие специфических антител против иммобилизованных на твердой поверхности белков, отличающийся тем, что на твердой поверхности микрочастиц иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита С, вируса иммунодефицита человека 2-го типа и бактерии Treponema Pallidum, а также белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита В и/или иммуноглобулины, специфичные к антигену HBsAg названного вируса гепатита В, и белки, несущие антигенные детерминанты вируса иммунодефицита человека 1-го типа и/или иммуноглобулины специфичные к антигену р24 названного вируса иммунодефицита человека 1-го типа, причем каждый из названных белков иммобилизуют на поверхности микрочастиц определенного типа, после чего названные микрочастицы смешивают между собой с образованием суспензии, в которую вводят сыворотку или плазму исследуемой крови с получением рабочей смеси, которую инкубируют при температуре 20-42°С в течение по меньшей мере 10 мин, затем вводят раствор, содержащий люминесцентные метки, способные присоединяться к белкам, связавшимся с названными иммобилизованными на поверхности микросфер белками, затем полученную смесь инкубируют при температуре 20-42°С в течение по меньшей мере 10 мин, после чего определяют тип каждой микрочастицы и люминесценцию метки, присоединившейся к белкам, связавшимися с иммобилизованным на поверхности микрочастицы белком.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что тип микрочастицы определяется ее размером.3. Способ по п.1, отличающийся тем, что тип микрочастицы определяется ее профилем люминесценции.4. Способ по п.1, отличающийся тем, что микрочастицы выполнены в форме микросфер диаметром 1-50 мкм.5. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что микрочастицы выполнены в форме микроцилиндров диаметром 1-50 мкм.6. Способ по п.1, отличающийся тем, что на поверхности микрочастиц иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита В, входящие в состав его белковых структур: HBcoreAg, и/или HBeAg, и/или HBsAg.7. Способ по п.1, отличающийся тем, что на поверхности микрочастиц иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты вируса гепатита С, входящие в состав его белковых структур: Ns 3, и/или Ns 4, и/или Ns 5, и/или Core.8. Способ по п.1, отличающийся тем, что на поверхности микрочастиц иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты вируса иммунодифицита человека 1-го типа, входящие в состав его белковых структур: gp41, и/или gp120, и/или р24.9. Способ по п.1, отличающийся тем, что на поверхности микрочастиц иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты вируса иммунодифицита человека 2-го типа, входящие в состав его белковых структур gp36.10. Способ по п.1, отличающийся тем, что на поверхности микрочастиц иммобилизуют белки, несущие антигенные детерминанты бактерии Treponema pallidum, входящие в состав ее белковых структур: р17 и/или р47.11. Способ по п.1, отличающийся тем, что сыворотку или плазму исследуемой крови разбавляют в рабочей смеси в соотношении (1:10)-(1:500).12. Способ по п.1, отличающийся тем, что рабочую смесь инкубируют при постоянном ее перемешивании.13. Способ по п.1, отличающийся тем, что перед введением раствора, содержащего люминесцентные метки, микрочастицы выделяют из рабочей смеси фильтрованием и промывают 2-6 раз.14. Способ по п.1, отличающийся тем, что перед определением типа каждой микрочастицы, из рабочей смеси выделяют микрочастицы фильтрованием и промывают их 2-6 раза.15. Способ по п.1, отличающийся тем, что люминесцентной меткой является смесь конъюгата антивидовых антител против иммуноглобулинов человека с люминесцентным соединением и конъюгата стрептавидина или авидина или их производных с люминесцентным соединением.16. Способ по п.1, отличающийся тем, что люминесцентной меткой является смесь конъюгатов белков, несущих антигенные детерминанты вируса гепатита В, вируса гепатита С, вируса иммунодефицита человека 1-го типа, вируса иммунодефицита человека 2-го типа и бактерии Treponema Pallidum с люминесцентным соединением, и конъюгата стрептавидина или авидина или их производных с люминесцентным соединением.17. Способ по п.1, отличающийся тем, что люминесцентной меткой является комбинация из конъюгатов белков, несущих антигенные детерминанты вируса гепатита В, вируса гепатита С, вируса иммунодефицита человека 1-го типа, вируса иммунодефицита человека 2-го типа и бактерии Treponema Pallidum с биотином, или его производными, и конъюгата стрептавидина или авидина или их производных с люминесцентным соединением.18. Способ по п.1, отличающийся тем, что люминесцентной меткой является комбинация из конъюгатов антивидовых антител против иммуноглобулинов человека с биотином, или его производными, и конъюгата стрептавидина или авидина или их производных с люминесцентным соединением19. Способ по п.1, или 15, или 16, или 17, или 18, отличающийся тем, что люминесцентная метка содержит биотинилированные иммуноглобулины, специфичные к антигенам HBsAg вируса гепатита В.20. Способ по п.1, или 15, или 16, или 17, или 18, отличающийся тем, что люминесцентная метка содержит биотинилированные иммуноглобулины, специфичные к антигенам р24 вируса иммунодефицита человека 1-го типа.21. Способ по п.15, или 16, или 17, отличающийся тем, что люминесцентным соединением в люминесцентной метке является R-фикоэритрин, или его производные.