КОМПОЗИЦИЯ, ИСПОЛЬЗУЕМАЯ В КАЧЕСТВЕ РАДИОПРОТЕКТОРНОГО СРЕДСТВА Российский патент 2008 года по МПК A61K36/8968 A61K36/28 A61K36/484 A61P39/00 

Изобретение относится к ветеринарии и касается разработки композиции, обладающей радиопротекторным действием. Предлагаемая композиция может быть использована в качестве профилактического средства при комплексном лечении онкологических заболеваний для коррекции нарушений, вызванных радиационным облучением у животных.

В России известны аналоги заявляемого изобретения по совокупности существенных признаков. Известен способ получения средства, обладающего радиопротекторной активностью, на основе растительного сырья [Николаева М.Г., Асеева Т.А., Бураева Л.Б., Танхаева Л.М., Николаева Г.Г., Даргаева Т.Д., Николаев С.М., Пахолков Г.В. Способ получения средства, обладающего радиозащитной активностью (54). // Официальный бюллетень Комитета Российской Федерации по патентам и товарным знакам "ИЗОБРЕТЕНИЯ". 1999. № 1. С.22].

Недостатками данного аналога является использование специфического сырья - лишайника, для которого существуют определенные трудности связанные с его трудоемкой заготовкой.

Также известно средство с радиопротекторным свойством (патент RU № 2033154). Недостатком является - синтетическая природа используемого вещества, что обуславливает наличие побочных эффектов и жесткого действия на организм.

Также известно средство природного происхождения, которое по совокупности существенных признаков и достигаемому результату является наиболее близкими, поэтому выбран нами в качестве прототипа - настой омелы белой, обладающий радиопротективными свойствами [Наримов А.А. Изменение чувствительности мышей к действию гамма-радиации с помощью полисахаридов омелы белой (Viscum album). / Наримов А.А., Попова О.И., Муравьева Д.А. // Радиобиология. - 1992. - Т.32. - Вып.6. - С.868-872].

Технологической задачей настоящего изобретения является создание композиции, обладающей повышенным радиопротекторным действием. Поставленная цель достигается тем, что предлагаемая композиция, содержащая порошок побегов омелы белой, корней солодки голой и плодов расторопши пятнистой и за счет синергетического эффекта компонентов, обладает более высокой радиопротекторной активностью в сравнении с прототипом.

Поставленная задача достигается тем, что предлагается композиция следующего состава в килограммах на 100 кг композиции:

Побеги омелы белой33,0Плоды расторопши пятнистой33,0Корни солодки голой34,0

Отличительными признаками является применение порошка растительного сырья, что приводит к сохранению комплекса биологически активных веществ в составе композиции, отказу от использования дополнительных вспомогательных веществ и стадий извлечения биологически активных веществ из растительного сырья. Изобретение иллюстрируется следующим примерами.

Пример 1 на 100 кг композиции

Побеги омелы белой33,0 кгПлоды расторопши пятнистой33,0 кгКорни солодки голой34,0 кг

Пример 2 на 100 г композиции

Побеги омелы белой33,0 гПлоды расторопши пятнистой33,0 гКорни солодки голой34,0 г

Способ получения предлагаемых композиций заключается в следующем: сырье (побеги омелы белой, плоды расторопши пятнистой и корни солодки голой) измельчают до частиц размером от 0,25 мм до 0,5 мм и просеивают. Полученные порошки в рассчитанных количествах помещают в смеситель и смешивают до получения однородной массы.

Полученная композиция представляет собой однородный порошок коричневато-зеленого цвета, жирноватый на ощупь, со специфическим запахом.

Обоснованием состава предлагаемой композиции является то, что при радиационном облучении наблюдается изменение иммунного статуса организма и нарушение детоксикационных функций печени. Это может быть скорректировано применением корней солодки голой (иммуномоделирующее средство) и плодов расторопши пятнистой (универсальный гепатопротектор). Включение в состав композиции омелы белой обусловлено выраженными радиопротекторными свойствами водного настоя омелы белой [Наримов, А.А. Изменение чувствительности мышей к действию гамма-радиации с помощью полисахаридов омелы белой (Viscum album). / Наримов А.А., Попова О.И., Муравьева Д.А. // Радиобиология. - 1992. - Т.32. - Вып.6. - С.868-872].

Омела белая (Viscum album L.), семейство ремнецветных (Loranthaceae), содержит комплекс биологически активных веществ: полисахариды, органические кислоты, аминокислоты, дубильные вещества, микроэлементы и др. [Попова, О.И. Омела белая как источник ценных фармакологически активных веществ. / Попова О.И., Муравьева Д.А. // Хим.-фарм. пр-во: Обзорн. информ. - М.: НИИЭМП. - 1996. - Вып.8. - 36 с.]. В медицине очищенный экстракт омелы белой применяют при неоперабельных формах рака в качестве симптоматического средства [Балицкий, К.П. Лекарственные растения в терапии злокачественных опухолей / Балицкий К.П., Воронцова А.П. - Ростов-на-Дону, 1984. - 386 с.]

Листья омелы белой применяют в Германии и Швейцарии для производства таких противоопухолевых препаратов, как «Искадор» и «Пленозол» [Leroi R. Chemical experience with mistletoe preparation Iscador./ Leroi R. - Frankfurt, 1975. - P.17]. В работе [Наримов А.А. Изменение чувствительности мышей к действию гамма-радиации с помощью полисахаридов омелы белой (Viscum album) / Наримов А.А., Попова О.И., Муравьева Д.А. // Радиобиология. - 1992. - Т.32. - Вып.6. - С.868-872.] приведены сведения о радиопротекторном действии полисахаридов омелы белой, что послужило основанием для более глубокого изучения радиопротекторных свойств полученной композиции в сравнении с омелой белой.

Солодка голая (Glyccyrrhiza glabra) сем. Бобовые (Fabaceae) содержит комплекс биологически активных веществ, отнесенных к различным химическим классам веществ с разнообразными фармакотерапевтическими свойствами [Соколов П.Д. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейства Hydrangeaceae - Haloragaceae. / Соколов П.Д. - Л.: Наука, 1987. - 450 с.]. Ценным является выявленное иммунотропное действие корня солодки, что делает возможным использования их в качестве стимулятора неспецифического иммунитета [Ильичева Т.Н. Иммуностимулирующая активность тритерпенов растительного происхождения и их производных. / Ильичева Т.Н. и др. // Журн. микробиол., эпидемиолог. и иммунологии. - 2001. - № 2. - С.53-56].

Плоды расторопши пятнистой - Silybum marianum Gaerth., сем. Астровых (Asteraceae). На их основе созданы лекарственные средства "Легален", "Карсил", "Силибор", обладающие уникальным гепатопротекторным действием [Куркин В.А. Фенилпропаноиды - перспективные природные биологически активные соединения. / В.А.Куркин. - Самара: СамГМУ, 1996. - 150 с.].

Исследования проводили на двух видах лабораторных животных - белых беспородных мышах-самцах массой 20±2 г и крысах-самцах линии Вистар массой 200-220 г. Количество животных в каждой опытных и контрольных группах - 10 животных.

Модель радиационного поражения для оценки выживаемости и средней продолжительности жизни воспроизводили путем облучения животных с помощью стандартной гамма-терапевтической установки типа «АГАТ-С» (мощность 0,0171, поле 20×20, РИП 75 мм, источник Со⁶⁰). Доза радиации составляла 6 Грей. Для оценки изменения биохимических показателей моделировали радиационное повреждение стандартными методами [Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике: В 2-х Т. / Камышников B.C. - Минск, 2000. - 450 с.]. Фагоцитарную активность нейтрофилов изучали по методу Иванова А.И. и Чухловина Б.А. [Иванов А.И. К методике определения поглотительной и переваривающей способности нейтрофилов. / Иванов А.И., Чухловин Б.А. // Лаб. Дело. - 1967. - № 10. - С.108-107].

Оценку радиопротекторного действия композиции проводили при ее лечебно-профилактическом введении в виде водной суспензии (на 100 мл суспензии в граммах: композиции - 25,0; воды очищенной - до 100 мл). В качестве препарата сравнения использовали водный настой омелы белой, контролем служили интактные (не облученные) и облученные животные, получавшие такой же объем физиологического раствора. Композицию и препарат сравнения вводили per os с помощью мягкого зонда за 30 минут до и после облучения, а также на протяжении всего периода наблюдения 2 раза в сутки в одно и то же время. Объем вводимых жидкостей составлял 10 мл/кг. Забой животных осуществляли путем декапитации, под эфирным наркозом, на 30 сутки после начала моделирования радиационного поражения. Одновременно проводили забой интактных животных, голодавших в течение 12-14 часов.

Радиопротекторное действие композиции оценивали по следующим показателям: средней продолжительности жизни животных (СПЖ) в течение 60 суток после облучения; изменению интегративных показателей: массы тела и относительной массы иммунокомпетентных органов (тимуса и селезенки) и массы надпочечников; фагоцитарной активности нейтрофилов (показателю фагоцитарной активности - ФАЛ; проценту завершенности фагоцитоза - ПЗФ; фагоцитарному индексу лейкоцитов - ФИЛ); изменению биохимических показателей в сыворотки крови (уровню белковых фракций, концентрации молекул средней массы) и в гомогенате печени (ТБК-активных продуктов).

В результате эксперимента было выявлено, что у не леченных (облученных) животных радиационное облучение приводило к уменьшению относительной массы селезенки, инволюции тимуса, гипертрофии надпочечников, развитию гепатоза, характеризующегося значительными нарушениями функционального состояния печени, резком замедлении роста массы животного и нарушениями со стороны иммунной системы.

Проведенные доклинические испытания показали, что заявленная композиция достоверно увеличивает выживаемость животных на 55% по сравнению с контрольной группой и на 11% в сравнении с настоем омелы (таблица 1). Так, в контроле констатировалась гибель 60% животных против 20% в группе животных, получавших композицию (таблица 1).

Исследуемая композиция способствовала сохранению динамики увеличения массы тела животных. Следует отметить, что прием композиции способствует более быстрому темпу роста облученных животных на 20 и 40 сутки, по сравнению с препаратом сравнения, так на 20 сутки разница в приросте массы составляла 40%, а на 40 день - 20%, что указывает на более быстрые темпы восстановления после радиационного повреждения. Это позволяет сократить сроки применения лекарственной композиции по сравнению с контрольным препаратом (таблица 2).

Экспериментально установлено, что у крыс, получавших композицию, наблюдалось ограничение гипопротеинемии, которое было зафиксировано у животных в контрольной группе (таблица 3). Кроме того, введение композиции ограничивало накопление ТБК-активных продуктов в печени на 28% по сравнению с контролем, что свидетельствует о способности композиции оказывать мембранопротекторное действие на клетки печени при моделировании радиационного поражения (таблица 3). Применение композиции оказывало влияние на концентрацию молекул средних масс, выявлено, что происходит ограничение процессов эндогенной интоксикации (таблица 3) на фоне радиационного облучения.

Известно, что фагоцитирующие мононуклеары селезенки захватывают ксенобиотики, а ее лимфоциты и плазматические клетки участвуют в иммунном ответе, способствуя выведению чужеродных для организма агентов. Кроме того, клетки селезенки продуцируют иммуноглобулины, ответственные за защиту организма от чужеродных агентов. При исследовании влияния композиции на массу иммунокомпетентных органов установлено, что ее введение препятствует уменьшению относительной массы селезенки, ограничивает снижение относительной массы тимуса - органа, участвующего в регуляции как клеточного (регулирует дифференцировку лимфоцитов), так и гуморального иммунитета (регулирует образование антител), что свидетельствует о менее выраженном истощении иммунной системы (таблица 4). Влияние композиции на суммарную массу надпочечников проявляется в том, не происходит увеличение данного показателя относительно контрольных животных и стабилизация его на уровне интактных животных (таблица 4).

При оценке влияния препаратов на клеточный иммунитет у животных опытных групп отмечены существенные отличия относительно животных контрольной группы. Так, курсовое введение композиции активирует фагоцитарную активность лейкоцитов, оказывает статистически значимое влияние на показатель «процент завершенности фагоцитоза». Позитивные отличия при использовании композиции с целью коррекции нарушений, вызванных радиацией, выявлены и при анализе показателя «фагоцитарный индекс лейкоцитов» (таблица 4).

Сопоставляя эффективность использования композиции с использованием препарата сравнения следует отметить, что предлагаемая композиция более эффективно способствует коррекции изменения в организме при радиационном облучении.

Таблица 1Влияние композиции на выживаемость и среднюю продолжительность животных (СПЖ)Группы животныхКоличество мышей, погибших за 60 суток, %СПЖ, днейИнтактная060,0±0,0Контрольная6011,5±0,6Композиция2017,9±0,5*Настой омелы3016,1±0,7*Примечание: обозначены достоверные сдвиги (р<0,05)* по сравнению с контрольными животными.

Таблица 2Влияние композиции на изменение массы тела животных относительно исходных показателей (%)Группы животныхДни наблюдения204060Интактная+21,2±3,3+51,7±4,0+58,7±4,2Контрольная+7,2±2,1+23,5±2,5+25,2±5,5Композиция+17,6±4,4*+42,6±3,9*+45,2±3,0*Настойомелы+12,4±3,0*+35,7±2,8*+41,3±3,2*Примечание: обозначены достоверные сдвиги (р<0,05)* по сравнению с контрольными животными.

Таблица 3Влияние композиции на изменение концентрации средних молекул и общего белка в сыворотке крови и ТБК-активных продуктов в печениГруппы животныхОбщий белок, моль/лТБК-активные продукты Мкмоль/гСредние молекулы, ОТИнтактная82,4±0,68,4±0,20,043±0,002Контрольная53,1±1,013,6±0,30,066±0,011Композиция71,3±0,6*х9,8±0,11*х0,053±0,007*Настой омелы65,6±1,2*11,9±0,20,057±0,008Примечание: 1. обозначены достоверные сдвиги (р<0,05)* - по сравнению с контрольными животными;
2. обозначены достоверные сдвиги (р<0,05)*х относительно группы животных, получавших омелу.

Таблица 4
Влияние композиции на относительную массу органов и показатели фагоцитарной активностиГруппа животныхСелезенка, гТимус, гСуммарная масса надпочечников, гФАЛ,%ПЗФ,%ФИЛ, едИнтактная423,1±10,770,7±0,7714,1±0,0543,7±3,335,2±2,00,57±0,01Контрольная319,0±12,232,8±2,219,8±0,0229,4±1,121,1±1,60,32±0,01Композиция387,2±9,8*х44,0±1,8х14,6±0,03*х36,2±2,6*28,8±1,5*х0,42±0,01*хНастой омелы344,0±10,4*38,9±1,5*15,5±0,02*42,5±3,9*27,5±2,0*0,37±0,01*Примечание: 1. ФАЛ - фагоцитарная активность лейкоцитов; ПЗФ - процент клеток с завершенным фагоцитом на 100 нейтрофилов, ФИЛ - фагоцитарный индекс лейкоцитов;
2. обозначены достоверные сдвиги (р<0.05): * - по сравнению с контрольными животными; х - относительно группы животных, получавших омелу.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к созданию композиции, обладающей способностью повышать устойчивость к радиационному повреждению путем ограничения иммунных и метаболических нарушений в организме. Композиция содержит порошок побегов омелы белой, корней солодки голой и плодов расторопши пятнистой. Композиция эффективно способствует коррекции изменения в организме при радиционном облучении. 4 табл.

Композиция, обладающая радиопротекторным действием, содержащая побеги омелы белой, отличающаяся тем, что дополнительно содержит корни солодки голой и плоды расторопши пятнистой при их соотношении, % на 100 кг:

побеги омелы белой33.0плоды расторопши пятнистой33.0корни солодки голой34.0