СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ, ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ Российский патент 2008 года по МПК A61K39/02 A61P31/04 

Описание патента на изобретение RU2329828C1

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и иммунологии и может быть использовано для профилактики и лечения некробактериоза животных.

Известен способ изготовления вакцины для профилактики и лечения некробактериоза, включающий выделение из местного очага эпизоотической культуры возбудителя некробактериоза, его выращивание, инактивацию, отделение биомассы от культуральной жидкости центрифугированием, извлечение антигена из биомассы путем последовательного трехкратного замораживания-оттаивания клеток и их гомогенизации с последующим центрифугированием и выделением из супернатанта протективного антигена, представляющего собой цитоплазматическую фракцию, содержащую эндотоксин, и параллельно - выделение экзотоксина осаждением желатином, объединение полученных антигенов в соотношении 1:3, повторное добавление инактиватора формалина и соединение с масляно-ланолиновым адъювантом в соотношении 1:1. Получают вакцину следующего состава: цитоплазматическая фракция, содержащая эндо- и экзотоксин, взятые в соотношении 1:3 - 450-550 мл, формалин - 3,5-5,0 мл, минеральное масло - 381-497 мл, ланолин - до 1 л. Вакцину водят подкожно однократно, в дозе 1-2 мл (см., например, RU 2043773 C1, 20.09.1995).

Известный способ предусматривает предварительный подбор местных штаммов для каждого конкретного хозяйства, что невозможно при промышленном производстве. Кроме того, нетехнологичны стадии разделения бактериальной суспензии и концентрирования экзотоксина, а также подкожный метод введения вакцины является очень трудоемким.

Известен способ изготовления вакцины для профилактики и лечения некробактериоза, включающий использование штамма B.necrophorum ВИЭВ, селекционированного по признаку максимальной иммуногенности и антигенной активности, после культивирования которого отделяют биомассу от культуральной жидкости центрифугированием, отделенную биомассу ресуспендируют в физиологическом растворе и из полученной суспензии извлекают эндотоксин многократным замораживанием и оттаиванием до полного разрушения бактериальных клеток и отделением от клеточного дейтрита центрифугированием, а из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, затем смешивают полученные эндотоксин и экзотоксин в равных объемных соотношениях и добавляют адъювант на основе минерального масла и ланолина. Полученную вакцину вводят подкожно двукратно в дозе 2 мл, а затем в дозе 3 мл (см., например, RU 2109519 C1, 27.04.1998).

Известный способ изготовления вакцины также нетехнологичен и трудоемок, а двукратное подкожное введение вакцины также трудоемко и приводит к образованию гранулем на месте введения.

Известен способ изготовления вакцины для профилактики и лечения некробактериоза, включающий использование модифицированного штамма F.necrophorum, после культивирования которого выделяют экзотоксин, причем получают три вида экзотоксина: «инактивированный» (с добавлением формалина), «сырой» и «полуочищенный», которые и используют в качестве вакцины (см., например, US 5455034 А, 03.10.1995). Вакцину также вводят подкожно двукратно в дозе 4,6-20 мл.

Известный способ очень длителен и трудоемок, используемые дозы вакцины очень высоки.

Задачей настоящего изобретения является разработка способа, позволяющего получить высокоиммуногенную безвредную вакцину, которую можно вводить животным внутрикожно, и при этом снизить дозу вводимого препарата.

Поставленная задача решается за счет того, что способ изготовления вакцины для профилактики и лечения некробактериоза включает культивирование штамма B.necrophorum «0-1» ВИЭВ на питательной среде, инактивирование формалином, отделение биомассы от культуральной жидкости центрифугированием, отделение центрифугата и концентрированно экзотоксина ультрафильтрацией до содержания белка 5,5-6,0 мг/мл (по Лоури), получение экзотоксина с молекулярной массой 18000-20000 Д, добавление раствора формалина до конечной концентрации 0,4%, инактивирование полученного экзотоксина B.necrophorum в течение 15 суток, смешивание инактивированного формалином экзотоксина с масляным адъювантом при следующем содержании компонентов (в мас.%):

Инактивированный формалином экзотоксин B.necrophorum60,0-67,0масляный адювант33,0-40,0,

гомогенизацию полученной суспензии и расфасовку готовой вакцины.

Поставленная задача решается также за счет того, что в процессе культивирования B.necrophorum через питательную среду периодически пропускают очищенный азот, концентрирование экзотоксина осуществляют на ультрафильтрационной установке с полыми волокнами, имеющими размер пор 1,5 кДа, а после смешивания инактивированного формалином экзотоксина B.necrophorum с масляным адъювантом гомогенизацию полученной суспензии осуществляют на коллоидной мельнице.

Поставленная задача решается и за счет того, что изготовленная по изложенному выше способу вакцина содержит (в мас.%):

Инактивированный формалином экзотоксин B.necrophorum60,0-67,0масляный адювант33,0-40,0

Целесообразно в качестве масляного адъюванта использовать легкое минеральное масло или минеральное масло БГМ-6М.

Поставленная задача решается также за счет того, что полученную вакцину вводят животным одно-, двукратно внутрикожно в дозе 0,2-0,4 мл.

Целесообразно вводить вакцину с помощью безигольного инъектора. В качестве безигольного инъектора целесообразно использовать инъектор БИ-7 или БИ-7М.

Целесообразно для профилактики и лечения крупного рогатого скота в неблагополучном по некробактериозу хозяйстве вводить вакцину двукратно с интервалом 4-6 недель, а затем однократно через каждые 6 месяцев в дозе 0,4 мл.

Целесообразно для профилактики некробактериоза крупного рогатого скота вводить вакцину совместно с гипериммунной сывороткой.

Для профилактики и лечения некробактериоза оленей целесообразно вводить вакцину внутрикожно однократно в дозе 0,2 мл.

Техническим результатом заявленного изобретения является упрощение способа изготовления высокоэффективной вакцины с низкой реактогенностью, а также снижение прививочной дозы вакцины при повышении удобства ее введения.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Штамм B.necrophorum «0-1» ВИЭВ культивируют на среде Китт-Тароцци в бутылях в течение 2-х суток при температуре 37°С, затем пересевают во флаконы с той же средой. Выращенную матровую расплодку засевают в биореактор с предварительно простерилизованной питательной средой, изготовленной на основе перевара Хоттингера, и культивируют в течение 24-36 часов при 37°С. В процессе культивирования через среду периодически пропускают очищенный азот. По окончании выращивания культуру проверяют на чистоту и оптическую концентрацию. Инактивируют формалином до конечной концентрации 0,4%. Выросшую инактивированную культуру разделяют на биомассу и культуральную жидкость центрифугированием. Из культуральной жидкости выделяют и концентрируют экзотоксин на ультра-фильтрационной установке с полыми волокнами, имеющими размер пор 1,5 кДа, до содержания белка 6,0 мг/мл (по Лоури), затем добавляют формалин до конечной концентрации 0,4% и выдерживают при 42°С в течение 15 суток. Получают экзотоксин с молекулярной массой 18000-20000 Д. Для изготовления вакцины полученный инактивированный экзотоксин смешивают с масляным адъювантом при следующем соотношении компонентов (в мас.%): инактивированный экзотоксин - 60,0-67,0, масляный адъювант - 33,0-40,0. После чего вакцину гомогенизируют на коллоидной мельнице и расфасовывают. В качестве масляного адъюванта используют легкое минеральное масло или минеральное масло БГМ-6М.

Пример 2.

Вакцину, полученную по примеру 1 и имеющую следующий состав (в мас.%) инактивированный экзотоксин - 65,0, масляный адъювант (легкое минеральное масло) - 35,0, используют в неблагополучном по некробактериозу хозяйстве для профилактики и лечения крупного рогатого скота.

Вакцину вводят двукратно с интервалом 5 недель, затем однократно через каждые 6 мес. в дозе 0,4 мл внутрикожно при помощи безыгольного инъектора БИ-7. Всего было вакцинировано около 100 тысяч больного и условно здорового скота в 25 регионах Российской Федерации.

Эффективность вакцины составила 98±0,2%. На месте введения вакцины отсутствовали воспалительные явления. Вакцина создает иммунитет в течение 6 месяцев после вакцинации.

Пример 3.

Для профилактики некробактериоза крупному рогатому скоту вводят гипериммунную сыворотку, а затем вакцину, полученную по примеру 1 и имеющую следующий состав: инактивированный экзотоксин - 63,0 мас.%, масляный адъювант минеральное масло БГМ-6М - 37,0 мас.%. Вакцину вводят двукратно с интервалом 6 недель, а затем однократно через каждые 6 мес в дозе 0,3 мл внутрикожно при помощи безыгольного инъектора БИ-7.

Комиссионная проверка, проведенная в хозяйствах Московской области, показала, что применение вакцины совместно с гипериммунной сывороткой способствует полной ликвидации болезни в течение 1-1,5 лет.

Пример 4.

Полученную по примеру 1 вакцину и имеющую следующий состав: инактивированный экзотоксин - 60,0 мас.%, масляный адъювант (легкое минеральное масло) - 40,0 мас.% применяют для профилактики и лечения некробактериоза северных оленей. Широкое производственное испытание вакцины было проведено в оленеводческих хозяйствах республики Саха (Якутия). Было вакцинировано около 110 тыс. оленей, заболеваемость которых после вакцинации составила 1±0,4%. Вакцину вводили однократно внутрикожно при помощи безигольного инъектора БИ-7М в дозе 0,2 мл.

Испытания показали, что вакцина высокоиммуногенна, безвредна, предохраняет от заболевания некробактериозом 98-99% привитых оленей и создает иммунитет продолжительностью 6 месяцев.

Таким образом, заявленное изобретение позволяет упростить способ изготовления высокоэффективной вакцины против некробактериоза животных, получить вакцину с низкой реактогенностью, а также снизить прививочную дозу вакцины и повысить удобство ее введения.

Похожие патенты RU2329828C1

название год авторы номер документа
ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ И СПОСОБ ЕЁ ПОЛУЧЕНИЯ 2015
  • Мельник Николай Васильевич
  • Самуйленко Анатолий Яковлевич
  • Тройнин Анатолий Серафимович
  • Голдина Вера Фредовна
  • Крюкова Елена Николаевна
  • Ельников Василий Викторович
  • Литенкова Ирина Юрьевна
  • Макарова Лариса Ивановна
  • Мельник Роман Николаевич
RU2636454C2
ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ И СПОСОБ ЕЁ ПОЛУЧЕНИЯ 2015
  • Самуйленко Анатолий Яковлевич
  • Мельник Николай Васильевич
  • Левкович Николай Григорьевич
  • Барсуков Юрий Иванович
  • Макарова Лариса Ивановна
  • Мельник Роман Николаевич
  • Гринь Светлана Анатольевна
  • Албулов Алексей Иванович
  • Сусский Евгений Владимирович
  • Ярцев Сергей Николаевич
RU2590596C1
СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ 1997
  • Мельник Николай Васильевич
  • Караваев Юрий Дмитриевич
  • Скичко Николай Данилович
  • Семенова Эльвира Николаевна
RU2109519C1
ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ И НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЕЕ 2013
  • Мельник Николай Васильевич
  • Макарова Лариса Ивановна
  • Трифан Валерий Никандрович
  • Мельник Роман Николаевич
  • Руденко Наталия Николаевна
  • Быков Вячеслав Иванович
RU2524430C1
АССОЦИИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ И НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ 2001
  • Караваев Ю.Д.
  • Селиверстов В.В.
  • Мельник Н.В.
  • Скичко Н.Д.
  • Гаврилов В.А.
  • Семенова И.Н.
  • Числов Ю.В.
  • Зенов Н.И.
RU2191599C1
ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ И НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЕЁ 2015
  • Самуйленко Анатолий Яковлевич
  • Мельник Николай Васильевич
  • Трифан Валерий Никандрович
  • Макарова Лариса Ивановна
  • Мельник Роман Николаевич
  • Винокуров Иван Егорович
  • Гринь Светлана Анатольевна
  • Левкович Николай Григорьевич
  • Барсуков Юрий Иванович
  • Литенкова Ирина Юрьевна
RU2590598C1
АССОЦИИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ И НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ 2011
  • Мельник Николай Васильевич
  • Соболев Виктор Васильевич
  • Захарченко Олег Сергеевич
  • Крюков Сергей Вениаминович
  • Макарова Лариса Ивановна
RU2480237C1
ГИПЕРИММУННАЯ СЫВОРОТКА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ 2001
  • Караваев Ю.Д.
  • Мельник Н.В.
  • Скичко Н.Д.
  • Зенов Н.И.
  • Пышкина Т.Н.
  • Семенова И.Н.
RU2195318C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ НЕКРОБАКТЕРИОЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ 2015
  • Самуйленко Анатолий Яковлевич
  • Мельник Николай Васильевич
  • Гринь Светлана Анатольевна
  • Мельник Роман Николаевич
  • Сусский Евгений Владимирович
  • Дадасян Артур Яшарович
  • Беленко Артур Викторович
  • Ярцев Сергей Николаевич
RU2622746C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ НЕКРОБАКТЕРИОЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ 2015
  • Самуйленко Анатолий Яковлевич
  • Мельник Николай Васильевич
  • Гринь Светлана Анатольевна
  • Мельник Роман Николаевич
  • Сусский Евгений Владимирович
  • Дадасян Артур Яшарович
RU2629861C2

Реферат патента 2008 года СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ, ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ

Группа изобретений относится к области ветеринарной микробиологии и иммунологии. Способ изготовления вакцины включает культивирование штамма B.necrophorum «0-1» ВИЭВ на питательной среде, инактивирование формалином, отделение биомассы от культуральной жидкости центрифугированием, отделение центрифугата и концентрирование экзотоксина ультрафильтрацией до содержания белка 5,5-6,0 мг/мл (по Лоури). Получают экзотоксин B.necrophorum с молекулярной массой 18000-20000 Д. Добавляют к нему раствор формалина до конечной концентрации 0,4%. Инактивируют в течение 15 суток и смешивают инактивированный формалином экзотоксин с масляным адъювантом при следующем содержании компонентов (в мас.%): инактивированный формалином экзотоксин B.necrophorum - 60,0-67,0, масляный адювант - 33,0-40,0. Затем гомогенизируют полученную суспензию и расфасовывают готовую вакцину. Вакцину животным вводят внутрикожно одно-, двукратно в дозе 0,2-0,4 мл. Изобретение позволяет упростить способ изготовления высокоэффективной вакцины, получить вакцину с низкой реактогенностью, а также снизить прививочную дозу вакцины и повысить удобство ее введения. 3 н. и 7 з.п. ф-лы.

Формула изобретения RU 2 329 828 C1

1. Способ изготовления вакцины для профилактики и лечения некробактериоза животных, включающий культивирование штамма B.necrophorum «0-1» ВИЭВ на питательной среде, инактивирование формалином, отделение биомассы от культуральной жидкости центрифугированием, отделение центрифугата и концентрирование экзотоксина ультрафильтрацией до содержания белка 5,5-6,0 мг/мл (по Лоури), получение экзотоксина B.necrophorum с молекулярной массой 18000-20000 Д, добавление раствора формалина до конечной концентрации 0,4%, инактивирование полученного экзотоксина в течение 15 сут, смешивание инактивированного формалином экзотоксина с масляным адъювантом при следующем содержании компонентов, мас.%: инактивированный формалином экзотоксин B.necrophorum - 60,0-67,0; масляный адъювант 33,0-40,0, гомогенизацию полученной суспензии и расфасовку готовой вакцины.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в процессе культивирования B.necrophorum через питательную среду периодически пропускают очищенный азот, концентрирование экзотоксина осуществляют на ультрафильтрационной установке с полыми волокнами, имеющими размер пор 1,5 КДа, а после смешивания инактивированного формалином экзотоксина B.necrophorum с масляным адъювантом гомогенизацию полученной суспензии осуществляют на коллоидной мельнице.3. Вакцина для профилактики и лечения некробактериоза животных, изготовленная по способу по п.1, содержащая, мас.%: инактивированный формалином экзотоксин B.necrophorum - 60,0-67,0; масляный адъювант 33,0-40,0.4. Вакцина по п.3, отличающаяся тем, что в качестве масляного адъюванта содержит легкое минеральное масло или минеральное масло БГМ-6М.5. Способ профилактики и лечения некробактериоза животных, включающий введение вакцины, отличающийся тем, что животным вводят внутрикожно вакцину по любому из пп.3 и 4 одно- двукратно в дозе 0,2-0,4 мл.6. Способ по п.5, отличающийся тем, что вакцину вводят с помощью безигольного инъектора.7. Способ по п.6, отличающийся тем, что в качестве безигольного инъектора используют инъектор БИ-7 или БИ-7М.8. Способ по п.5, отличающийся тем, что для профилактики и лечения крупного рогатого скота в неблагополучном по некробактериозу хозяйстве вакцину вводят внутрикожно в дозе 0,4 мл двукратно с интервалом 4-6 нед, а затем однократно через каждые 6 мес.9. Способ по п.5, отличающийся тем, что для профилактики некробактериоза крупного рогатого скота вакцину вводят совместно с гипериммунной сывороткой.10. Способ по п.5, отличающийся тем, что для профилактики и лечения некробактериоза оленей вакцину вводят внутрикожно однократно в дозе 0,2 мл.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2008 года RU2329828C1

US 5455034 А, 03.10.1995
US 2004037851 А, 26.02.2004
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ НЕКРОБАКТЕРИОЗА РОГАТОГО СКОТА 1994
  • Камалов Глеб Хафизович
  • Алексеева Ирина Ивановна
  • Хузин Дамир Абдулхаевич
RU2043773C1
СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ 1997
  • Мельник Николай Васильевич
  • Караваев Юрий Дмитриевич
  • Скичко Николай Данилович
  • Семенова Эльвира Николаевна
RU2109519C1

RU 2 329 828 C1

Авторы

Караваев Юрий Дмитриевич

Семенова Ильвира Николаевна

Мельник Николай Васильевич

Плохова Анна Александровна

Даты

2008-07-27Публикация

2007-03-02Подача