СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ДЕЗИНТОКСИКАЦИОННОЙ ТЕРАПИИ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ТОКСИНОВ РАЗЛИЧНОЙ ПРИРОДЫ Российский патент 2008 года по МПК G01N33/68 

Изобретешь относится к области медицины, в частности к исследованию полиморфноядерных нейтрофилов крови при интоксикации различной этиологии, и может быть использовано при оценки эффективности дезинтоксикационной терапии.

Традиционно качество дезинтоксикационной терапии оценивается по результатам биохимических исследований сыворотки крови, таких как определение содержания общего белка и мочевины, величине тимоловой пробы.

В ряде опубликованных работ отражена динамика цитохимических изменений в лимфоцитах и нейтрофилах крови при развитии различных форм дифтерии, при шигеллезах и сальмонеллезах (Шалыгина Н.Б., Шалыгина А.Ю. 1991 г., Нагоев Б.С. 1993, 2002). Однако все эти исследования относятся к различным бактериальным инфекциям.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ контроля эффективности антибиотика при лечении бруцеллеза (Малецкая О.В., Логвиненко О.В., Лямкин Г.И. и др. (Патент РФ №2206898, опубл. 20.06.03, Бюл. №17).

Недостатком данного способа является то, что он относится к инфекции бактериальной природы, при которой информативными считаются такие цитохимичесакие показатели как гликоген, сукцинат дегидрогеназа и катионные белки.

Технической задачей изобретения является повышение контроля за эффективностью действия лекарственных препаратов в процессе дезинтоксикационной терапии.

Сущность изобретения заключается в том, что заявляемый способ основан на постановке дополнительных тестов, используемых для контроля дезинтоксикационной терапии при интоксикации любой природы, основанный на определении к нейтрофилах крови цитохимических показателей, а именно в определении изменения активности миелопероксидазы и кислой фосфатазы.

Ряд исследователей рассматривает интоксикацию как синдром, который, прежде всего, характеризуется расстройством кровообращения с недостаточным снабжением кислородом и нарушением обмена веществ клеток различных органов. Вследствие развития гипоксии страдают кислородозависимые ферменты клетки. Достаточно информативным может быть кислородзависимый фермент. В нашем случае мы определяли активность миелопероксидазы в клетках крови белых мышей. Из литературных источников (Юлиу Щутеу, Траян Бэндинэ, Атансие Кафрицэ и др. «Шок, терминология и классификация». Бухарест, Военное издательство, 1987 г.) известно, что изменение активности кислой фосфатазы является одним из основных маркеров тяжести интоксикации организма. Изменение активности данного фермента в нейтрофилах крови так же учитывалось нами при проведении экспериментов. Исследование активности ферментов проводили по известным методикам (Сафронова В.М., Локтев Н.А., Руднев С.М. Практическое пособие по цитоэнзимохимическим методам исследований. Депонировано в ВИНИТИ, 1994, №1424 - В94, 49 с.)

Заявляемый способ осуществлялся следующим образом.

Беспородным белым мышам массой 18-20 г из питомника СтавНИПЧИ внутрибрюшинно однократно вводили сальмонеллезный токсин в дозе 0,2 мг (0,25LD50) на мышь. Другой группе животных вводили четыреххлористый углерод однократно в дозе 0,2 мл в 50% масляном растворе, что также составляло 0,25LD50. В качестве дезинтоксикационных препаратов при введении четыреххлористого углерода использовали смесь аскорбиновой кислоты, L-токоферола, эссенциале, силинита натрия и АТФ. При сальмонеллезной интоксикации - аскорбиновую кислоту, эссенциале, L-токоферол, селинит натрия и рибоксин. Препараты вводили ежедневно в течение 6 дней, липосомальнуто форму вводили шестикратно, через 2 дня на третий, что связано с пролонгированным действием комплекса. Кровь на исследование, в количестве 0,1 мл, брали из сердца умерщвленных хлороформированием животных на 3, 10, 20, 30 сутки после начала дезинтоксикационных мероприятий.

Об эффективности дезинтоксикационной терапии судили по результатам цитоэнзимохимических исследований, в процессе которых в нейтрофилах крови определяли активность кислой фосфатазы и миелопероксидазы. Параллельно в сыворотке крови определяли содержание общего белка и мочевины

У животных, которым вводили четыреххлористый углерод, на 3 сутки проведения дезитоксикационных мероприятий активность кислой фосфатазы повышалась по сравнению с контролем (1,74±0,01 ед. Кэплоу, 1,01±0,01 ед. Кэплоу), однако, была достоверно ниже, чем у животных, не получавших препараты (1,87±0,03 ед. Кэплоу). В эти же сроки отмечали угнетение миелопероксидазной активности в нейтрофилах крови (0,78±0,07 ед. Кэплоу) по сравнению с интактными животными (1,41±0,09 ед. Кэппоу).

На 10 сутки активность кислой фосфатазы составляла 1,72±0,04 ед. Кэплоу, а миелопероксиадазы 0,94±0,07 ед. Кэплоу.

На 30 сутки сохранялась тенденция к снижению уровня кислой фосфатазы до значения 1,35±0,02 ед. Кэплоу, а миелопероксидазы повышалось до 1,39±0,02 ед. Кэплоу.

Аналогичной была и динамика изменения биохимических показателей в сыворотке крови. На 3 сутки отмечали резкое угнетение содержания общего белка и мочевины (20,0±3,1 г/л, 1,2±0,27 ммоль/л). Использование дезинтоксикационных препаратов сопровождалось повышением уровня исследуемых показателей. Данные представлены в таблице.

К концу эксперимента активность миелопероксидазы в группе животных, получавших стабилизирующую терапию, достоверно не отличалась от данных, полученных в контрольной группе. Активность кислой фосфатазы в нейтрофила крови была выше контрольных величин, однако, прослеживалась тенденция к нормализации исследуемого цитохимического показателя.

При введении белым мышам сальмонеллезного токсина в процессе стабилизирующей терапии были получены следующие результаты.

На третьи сутки наблюдали повышение активности кислой фосфатазы 1,95±0,03 ед. Кэплоу (норма 1,01±0,01 ед. Кэплоу) и угнетение активность миелопероксидазы до 0,75±0,01 ед. Кэплоу (норма - 1,41±0,09 ед. Кэплоу).

На 10 сутки цифровые величины цитохимической активности кислой фосфатазы составляли 1,63±0,05 ед. Кэплоу, миелопероксидазы - 1,02±0,07 ед. Кэплоу.

На 30 сутки сохранялась тенденция к понижению активности кислой фосфатазы (1,43±0,05 ед. Кэплоу) и повышению активности миелопероксидазы (1,39±0,09 ед. Кэплоу).

Изучение биохимических показателей сыворотки крови показало, что низкое содержание мочевины и общего белка (1,0±0,14 ммоль/л, 19,0±4,2 г/л) на 3 сутки наблюдения постепенно увеличивалось и на 30 сутки составляло - общий белок 58±4,2 г/л, мочевина 3,9±0,37 ммоль/л. Наблюдалась тенденция к нормализации данных показателей при проведении дезинтоксикационной терапии.

В результате эксперимента установлено, что дезинтоксикационная терапия способствовала восстановлению активности исследуемых цитохимических показателей крови белых мышей. Изменение уровня ферментов в клетках крови коррелировало с результатами биохимических исследований.

Достоинствами предлагаемого способа является простота постановки цитохимических реакций, возможность быстро оценить эффективность проводимой дезинтоксикационной терапии.

Таким образом использование цитохимических показателей крови может служить как дополнительным, так и самостоятельным тестом для оценки эффективности стабилизирующей терапии при действии токсинов различной природы.

Таблица 1
Обоснование использования активности кислой фосфатазы и миелопероксидазы в нейтрофилах крови для оценки эффективности стабилизирующих препаратов при интоксикации различной этиологии.Группы животныхКФМПООбщий белокМочевина3 сут10 сут30 сут3 сут10 сут30 сут3 сут10 сут30 сут3 сут10 сут30 сутКонтроль1,01±0,011,01±0,011,01±0,011,41±0,091,41±0,091,41±0,0998,0±2,198,0±2,198,0±2,19,3±1,09,3±1,09,3±1,0Четыреххлористый углерод1,87±0,031,79±0,011,59±0,10,27±0,040,38±0,031,15±0,0720,0±3,119±3,445±31,2±0,271,4±0,161,8±0,17Стабилизирующий препарат1,74±0,011,71±0,041,35±0,020,78±0,070,94±0,071,39±0,0319,0±4,246±6,558±4,21,0±0,141,6±0,53,9±0,37Сальмонеллезный токсин2,13±0,012,23±0,081,64±0,030,19±0,070,36±0,071,1±0,0371,0±7,374,0±4,786,0±8,73,0±0,43,5±0,444,9±0,81Стабилизирующий препарат1,95±0,031,61±0,051,43±0,050,75±0,011,02±0,081,39±0,0483±8,483,0±3,990,0±6,33,5±0,523,7±0,475,0±0,98

Изобретение относится к области медицины, в частности к исследованиям нейтрофилов крови при действии токсинов различной природы, и может быть использовано для оценки эффективности дезинтоксикационных мероприятий. Сущность изобретения заключается в том, что эффективность дезинтоксикационной терапии оценивают по результатам цитохимического исследования периферической крови в процессе дезинтоксикационных мероприятий. В качестве биохимического показателя используют состояние ферментных систем, а именно активность кислой фосфатазы и миелопероксидазы в нейтрофилах. Использование способа позволяет быстро оценить эффективность проводимой дезинтоксикационной терапии. 1 табл.

Способ оценки эффективности дезинтоксикационной терапии при воздействии токсинов различной природы в эксперименте путем исследования периферической крови, отличающийся тем, что в процессе дезинтоксикационных мероприятий цитохимически определяют активность кислой фосфотазы и миелопероксидазы в нейтрофилах периферической крови и препарат считают эффективным, если в процессе терапии прослеживается тенденция к нормализации исследуемых цитохимических показателей.