ЦИТОСТАТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ С АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2009 года по МПК A61K31/282 A61K31/28 A61P35/00 

Изобретение относится к координационным химическим соединениям металлов, обладающим биологической активностью, и может быть использовано в онкологии для цитостатической химиотерапии.

Известна и широко используется в практике соль платины - цисплатин (цис-дихлордиаминплатина) [1].

Недостатком известного препарата является побочное токсическое действие на организм при использовании в чистом виде.

Известна композиция для антибластической терапии по патенту РФ №2192861, 2001 г., при получении которой используют координационные соединения платины, например цисплатин, а также 1,10-фенантролин и аскорбиновую кислоту при весовом соотношении 1:1:1-1:1:10 (композиция выбрана за прототип).

Недостатком этой композиции является высокая токсичность фенантролина, что ограничивает возможность терапевтического применения композиции для инъекций.

Техническая задача изобретения - получение композиции на основе координационных соединений металлов, обладающей высокой цитостатической и антиоксидантной активностью и низким побочным токсическим влиянием на организм. Для этого желательно освободиться от наличия токсичного компонента - 1,10-фенантролин или снизить его токсическое влияние.

Поставленная задача решается путем использования для приготовления композиции следующих известных компонентов: 1 - препарат платины цисплатин, 2 - аскорбатфенантролинатный комплекс платины с формулой [PtPhen₂]Asc и 3 - смешанно-лигандный комплекс редкоземельного элемента европия с фенантролином и аскорбиновой кислотой с формулой EuAscNO₃Phen·4H₂O при массовом соотношении 1:2:3.

Методы получения указанных солей редкоземельных элементов, а также цитостатическое действие [PtPhen₂]Asc известны и опубликованы нами ранее [3].

Примеры биологической активности композиции и ее компонентов.

Пример 1. Проведено тестирование антипролиферативного действия композиции на иммунокомпетентные клетки в реакции бластной трансформации лимфоцитов человека, стимулированных фитогемагглютинином (ФГА) после действия композиции в диапазоне концентраций 0,05-5,0 мг/мл. Оценка влияния препаратов на пролиферативную активность лимфоцитов в спонтанном и индуцированном ФГА тесте проведена в соответствии с методическими рекомендациями Фармкомитета Минздрава РФ [Ведомости фармакологического комитета, 1999, №1].

Результаты тестирования препаратов в реакции бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ) представлены на чертеже.

В результате тестирования установлено, что заявляемая композиция в указанном выше диапазоне концентраций оказывает ингибирующее влияние на индуцированную ФГА пролиферативную активность лимфоцитов, что свидетельствует о его цитостатическом действии, не уступающему прототипу. При концентрации композиции 1,0 мг/мл и более наступает тотальное разрушение клеток.

Пример 2. Проведена серия исследований цитотоксического действия заявляемой композиции на опухолевые клетки карциномы Эрлиха мышей в широком спектре концентраций (см. таблицу 1).

Таблица 1 Результаты определения цитотоксического действия заявляемой композиции на опухолевые клетки карциномы Эрлиха через 48 часов инкубации Дозы Процент жизнеспособных клеток (%) Контроль (без препарата) 0,05 10 87 0,5 0 87 5,0 0 87

Из материалов таблицы 1 видно, что заявляемая композиция практически полностью подавляет жизнеспособность опухолевых клеток. Анализ данных, полученных во всех сериях опытов, позволяет заключить, что при совместном применении цисплатина, аскорбатфенантролинатных комплексов платины и европия наблюдается выраженное проявление цитостатической активности композиции, что свидетельствует о наличии канцеростатического механизма действия заявленной композиции.

Пример 3. Сравнительное токсикологическое исследование компонентов заявленной композиции проведено на мышах линии BALB/c массой 18-20 г методом пробит-анализа при внутрибрюшинном введении его в физиологическом растворе. Величина LD₅₀ аскорбатфенантролинатного комплекса европия EuAscNO₃Phen·4H₂O составила 610 мг/кг, а его смеси с аскорбатфенантролинатным комплексом платины в соотношении 3:2 - 520 мг/кг, тогда как LD₅₀ 1,10-фенантролина составляет 82,5 мг/кг, т.е. острое токсическое влияние на организм заявляемых компонентов в несколько раз ниже, чем у фенантролина.

Дополнительно исследована антиоксидантная активность заявленной композиции. Антиоксидантную активность определяли, используя метод катодной вольтамперометрии, в частности процесс электровосстановления кислорода (ЭВ O₂) [3]. Эффект оценивался по временному, или так называемому кинетическому критерию антиоксидантной активности К, который отражает эффективность взаимодействия образца с кислородными радикалами и определяется по формуле:

где К - критерий антиоксидантной активности, мкмоль/л мин;

Со₂ - концентрация кислорода в исходном растворе без вещества, мкмоль/л;

I_i - текущее значение тока электровосстановления О₂, мкА;

I_нач - предельное значение тока электровосстановления О₂ в отсутствие вещества в растворе, мкА;

Т - время протекания процесса, мин.

Антиоксидантная активность заявленной композиции представлена в таблице 2.

Таблица 2 Исследуемый препарат С_раб К (г/л) (мкмоль/л·мин) Аскорбиновая кислота 5·10^-4 1,4 Заявляемая композиция 5·10^-4 0,7

Здесь С_раб - рабочая концентрация препаратов, выбранная по аналогии с тестом ЭВ О₂ для аскорбиновой кислоты.

Из приведенных в таблице 2 значений С и К видно, что заявляемая композиция обладает антиоксидантной активностью, которая составляет сравнимую величину (50%) с показателем активности стандартного антиоксиданта - аскорбиновой кислоты.

В литературных источниках отсутствуют сведения о применении заявляемой композиции в клинической практике, что свидетельствует о новизне технического решения, а неочевидность цитостатической и антиоксидантной активности композиции при сравнительно низкой токсичности позволяет говорить о соответствии его критерию «изобретательский уровень».

Использованные источники информации

1. М.Д.Машковский. Лекарственные средства, т.2. М.: 2002, с.218.

2. Композиция для антибластической терапии. Патент РФ №2192861, МКИ А61К 31/4745, опубл. 2002.11.20.

3. Евтушенко Д.Н., Скорик Н.А., Плотников В.М. Изучение взаимодействия европия, самария и платины с аскорбиновой кислотой и 1,10-фенантролином. ЖНХ, 2002, т.47, №11, с.1877-1882.

4. E.I.Korotkova, Y.A.Karbainov, О.А.Avramchik, А.А.Bakibaev. New electrochemical sensor for antioxidant activity determination. / In book: "Instrumental Methods of Analysis. Modern Trends and Applications. Conference Proceedings of 3-rd International conference". ZITI, Greece, 2003, P.707-710.

Изобретение относится к фармакологии, ветеринарии и медицине и касается цитостатической композиции с антиоксидантной активностью, содержащей координационные соединения платины, производные аскорбиновой кислоты и фенантролина, где в качестве координационного соединения платины она содержит цисплатин, в качестве производных аскорбиновой кислоты и фенантролина - аскорбатфенантролинатный комплекс платины формулы [PtPhen₂]Asc и аскорбатфенантролинатный комплекс европия с формулой EuAscNO₃Phen·4H₂O при следующем массовом соотношении компонентов:

цисплатин 1 аскорбатфенантролинатный комплекс платины 2 аскорбатфенантролинатный комплекс европия 3.

2 табл., 1 ил.

Цитостатическая композиция с антиоксидантной активностью, содержащая координационные соединения платины, производные аскорбиновой кислоты и фенантролина, отличающаяся тем, что в качестве координационного соединения платины выбран цисплатин, а производные аскорбиновой кислоты и фенантролина представлены аскорбатфенантролинатным комплексом платины формулы [PtPhen₂]Asc и аскорбатфенантролинатным комплексом европия формулы EuAscNO₃Phen·4·H₂O при следующем массовом соотношении компонентов:
цисплатин 1 аскорбатфенантролинатный комплекс платины 2 аскорбатфенантролинатный комплекс европия 3