СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОСТРЫХ И ХРОНИЧЕСКИХ НАРУШЕНИЙ МОЗГОВОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ, В ТОМ ЧИСЛЕ ИНСУЛЬТА, НА ОСНОВЕ ГИДРИРОВАННЫХ ПИРИДО[4,3-b]ИНДОЛОВ (ВАРИАНТЫ), ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО НА ЕГО ОСНОВЕ И СПОСОБ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2008 года по МПК A61K31/4427 A61K31/407 A61K31/404 A61P9/00 

Изобретение относится к области медицины, а именно к использованию химических соединений с целью создания лекарственных средств для лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, в том числе ишемических и геморрагических инсультов и их последствий.

Острая недостаточность мозгового кровообращения, ишемические и геморрагические инсульты относятся к наиболее распространенным сосудистым патологиям, которые часто приводят к инвалидизации и ощутимо повышают уровень смертности населения. Инсульт может вызывать поражение и гибель значительных участков головного мозга, вследствие чего у больных, перенесших инсульт, помимо неврологического дефицита (парезы, параличи), развивается нарушение когнитивных функций, депрессии, дезориентация (Е.И.Гусев, В.И.Скворцова в кн. «Ишемия головного мозга». М.: Медицина, 2001, 238 с.; R.G.Robinson. The clinical neuropsychiatry of stroke. Cognitive, behavioral and emotional disorders following vascular brain injury, Cambridge University Press, 1998, 563 p.).

Современная фармакология располагает довольно широким арсеналом средств, воздействующих на различные стадии каскада патологических процессов при инсульте. Терапия инсульта направлена на: восстановление проходимости артерии (тканевой активатор); предупреждение тромбообразования (фибринолитики, антикоагулянты, антиагреганты) и гибели жизнеспособных нейронов. Для предупреждения гибели нейронов в области "ишемической полутени" назначают церебролизин, холина альфосцерат, карнитина хлорид, мексидол, глицин. Протективным действием обладают и некоторые вазоактивные препараты (винпоцетин, ницерголин, циннаризин), которые назначают с целью увеличения кровоснабжения в ишемизированной ткани. Однако при этом нельзя исключить феномен "обкрадывания", проявляющийся уменьшением кровотока в зоне ишемии за счет усиления кровотока в здоровых тканях (Е.И.Гусев, В.И.Скворцова в кн. «Ишемия головного мозга». М.: Медицина, 2001, 238 с.). Вместе с тем, терапия этими препаратами недостаточно эффективна, особенно трудно поддаются лечению последствия геморрагического инсульта. Проводимый в настоящее время поиск эффективных лекарств для терапии инсульта среди антагонистов кальциевых и натриевых каналов, антагонистов NMDA рецепторов, позитивных модуляторов АМРА рецепторов, веществ, обладающих антирадикальной активностью пока к ощутимым результатам не привел (в основном из-за выраженных побочных эффектов и высокой токсичности соединений) (H.Brauner-Osborne, J.Egebjerg, E.Nielsen, U.Madsen, P.Krogsgaard-Larsen, Ligands for glutamate receptors. Design and therapeutic prosects. J.Med.Chemistry, 2000, v.48, №14, p.2609-2645; Hatton J. Pharmacological Treatment of Traumatic Brain Injury. Review of Agents in Development. CNS Drugs, 2001, v.15, №7, p.553-581).

Среди антагонистов кальциевых каналов часто, особенно при инсультах, используют блокатор кальциевых каналов L-типа нимодипин. Вместе с тем, препараты этой группы имеют существенные побочные эффекты и недостатки, одним из которых является наличие сердечно-сосудистых эффектов, приводящих к «обкрадыванию» мозга (Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств - 14 вып., ред. Г.Л.Вышковский. - М., РЛС-2006).

Задачей, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, является расширение арсенала средств, которые могут быть использованы в качестве новых эффективных лекарств для лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, в том числе инсульта - одного из самых тяжелых и плохо поддающихся лечению сосудистых заболеваний мозга.

Поставленная задача решается применением гидрированных пиридо([4,3-b])индолов формулы (1) или формулы (2) в качестве средства для лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, в том числе инсульта.

В случае применения соединений формулы (1) R¹ выбирают из группы, содержащей: СН₃-, СН₃СН₂- или PhCH₂;

R² выбран из группы, содержащей: Н-, PhCH₂- или 6-СН₃-3-Ру-(СН₂)₂-

R³ выбран из группы, содержащей: Н-, СН₃- или Br-.

Указанные соединения могут представлять собой соли с фармацевтически приемлемыми кислотами.

Одним из соединений, которое можно применять в качестве средства для лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, в том числе инсульта, может быть соединение формулы (1), в котором R¹ соответствует СН₃-, R² - Н-, а R³- СН₃-

Это соединение может находиться в форме (±) цис-изомера.

В случае применения соединений формулы (2) R¹ выбирают из группы, содержащей СН₃-, СН₃СН₂- или PhCH₃-

R² выбирают из группы, содержащей Н-, PhCH₂- или 6-СН₃-3-Ру-(СН₂)₂ -, а

R³ выбирают из группы, содержащей Н-, СН₃- или Br-.

Указанные соединения могут представлять собой соли с фармацевтически приемлемыми кислотами.

Одним из соединений, которое можно применять в качестве средства для лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, в том числе инсульта, может быть соединение формулы (2), в котором R¹ соответствует СН₃СН₂- или PhCH₂-, R² соответствует Н-, а R³- Н-.

Или соединение, где R¹ соответствует СН₃-, R² соответствует PhCH₂-, a R³- СН₃-.

Или соединение, где R¹ соответствует СН₃-, R² соответствует 6-СН₃-3-Ру-(СН₂)₂-, а R³- Н-.

Или соединение, где R¹ соответствует СН₃-, R² соответствует 6-СН₃-3-Ру-(СН₂)₂-, а R³- СН₃-

Или соединение, где R¹ соответствует СН₃-, R² соответствует Н-, а R³- Н- или СН₃-.

Или соединение, где R¹ соответствует СН₃-, R² соответствует Н-, а R³- Br-. Любое из вышеуказанных соединений может применяться в качестве средства для лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, в том числе инсульта.

Соединения формулы (1) и (2) являются известными соединениями, широко применяемыми в фармакологической практике. Были проведены обширные исследования ряда известных соединений, представляющих производные тетра- и гексагидро-1Н-пиридо[4,3-b]индола и проявляющих широкий спектр биологической активности. В ряду 2,3,4,5-тетрагидро-1Н-пиридо[4,3-b]индолов были обнаружены следующие виды активности: антигистаминная (OS-DE N1813229 от 6 декабря 1968, № 1952800 от 20 октября 1969), центрально-депрессантная, противовоспалительная (USP № 3718657 от 13 декабря 1970), нейролептическая (Herbert C.A., Planner S.S., Wehch W.N., Mol. Pharm., 1980, v.17, № I, p.38-42) и другие. Производные 2,3,4,4а,5,9b-гексагидро-1Н-пиридо[4,3-b]индола проявляют психотропную (Welch W.H., Herbert C.A., Weissman А., Кое К.В., J. Med. Chem., 1986, vol.29, № 10, p.2093-2099), антиагрессивную, антиаритмическую и другие виды активности.

Все указанные выше соединения являются известными из литературы и включают следующие конкретные соединения:

1. цис (±) 2,8-диметил-2,3,4,4а,5,9b-гексагидро-1Н-пиридо[4,3-b]индол и его дигидрохлорид;

2. 2-этил-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-пиридо/4,3-b/индол;

3. 2-бензил-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-пиридо/4,3-b/индол;

4. 2,8-диметил-5-бензил-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-пиридо/4,3-b/индол и его гидрохлорид;

5. 2-метил-5-/2-(6-метил-3-пиридил)этил/-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-пиридо/4,3-b/индол и его моногидрат сесквисульфата;

6. 2,8-диметил-5-/2-(6-метил-3пиридил)этил/-2,3,4,5-тетрагидро-1H-пиридо/4,3-b/индол и его дигидрохлорид (димебон).

7. 2-метил-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-пиридо/4,3-b/индол;

8. 2,8-диметил-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-пиридо/4,3-b/индол и его метилиодид;

9. 2-метил-8-бром-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-пиридо/4,3-b/индол и его гидрохлорид.

О получении и нейролептических свойствах соединения 1 известно, например, из публикации: Яхонтов Л.Н. и Глушков Р.Г. Синтетические лекарственные средства. / Под ред. А.Г.Натрадзе. - М.: Медицина, 1983, стр.234-237. Получение соединений 2, 8 и 9, а также сведения о том, что они обладают свойствами антагонистов серотонина, описываются, например, C.J.Cattanach, A.Cohen & B/H/Brown in J. Chem. Soc. (ser. C), 1968, 1235-1243. Синтез соединения 3 описывается, в частности, в статье N.P.Buu-Hoi, O.Roussel, P.Jacquignon, J. Chem. Soc., 1964, № 2, стр.708-711. Н.Ф.Кучерова и Н.К.Кочетков в "Общей химии", 1956, т.26, стр.3149-3154 описывают синтез соединения 4, а о получении соединений 5 и 6 известно, например, из статьи А.Н.Кост, М.А.Юровской, Т.В.Мельниковой в "Химии гетероциклических соединений", 1973, № 2, стр.207-212. В публикациях U.Horlein, Chem.Ber., 1954, Bd. 87, hft. 4, 463-472 описывается синтез соединения 7. М.А.Юровская, И.Л.Родионов в "Химии гетероциклических соединений", 1981, № 8, стр.1072-1078 описывают получение метилиодида соединения 8.

На основе производных тетра- и гексагидро-1Н-пиридо[4,3-b]индола выпускается несколько лекарственных препаратов: диазолин (mebhydroline), димебон, дорастин, карбидин (дикарбин), стобадин, гевотролин. Диазолин (2-метил-5-бензил-2,3,4,5-тетра-гидро-1Н-пиридо[4,3-b]индол) дигидрохлорид (Клюев М.А. Лекарственные средства, применяемые в медицинской практике СССР - М.: Медицина 1991, стр.512) и димебон (дигидрохлорид 2,8-диметил-5-(2-(6-метил-пиридил-3)этил)-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-пиридо[4,3-b]индола) (Машковский М.Д. Лекарственные средства. В 2 ч., ч.1, 12-е изд. - М.: Медицина, 1993, с.383), а также его близкий аналог дорастин (2-метил-8-хлор-5-(2-(6-метил-3-пиридил)этил)-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-пиридо[4,3-b]индол) дигидрохлорид (USAN and USP dictionary of drugs names (United States Adopted Names 1961-1988, current U.S. Pharmacopeia and National Formular for Drygs and other nonproprietary drug names), 1989, 26th Edition, p.196) известны как антигистаминные препараты. Карбидин (дикарбин) (дигидрохлорид цис(±)-2,8-диметил-2,3,4,4а,5,9b-гексагидро-1Н-пиридо[4,3-b]индола) является отечественным нейролептиком с антидепрессантным эффектом (Яхонтов Л.Н., Глушков Р.Г. Синтетические лекарственные средства. / Под ред. А.Г.Натрадзе. - М.: Медицина, 1983, с.234-237), а его (-)-изомер, стобадин, известен как антиаритмическое средство (Kitlova М., Gibela P., Drimal J., Bratisi. Lek. Listy, 1985, V.84, № 5, p.542-546); гевотролин (дигидрохлорид 8-фтор-2-(3-3-пиридил)пропил)-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-пиридо[4,3-b]индола) является антипсихотическим и анксиолитическим средством (Abou-Gharbi М., Patel U.R., Webb M.B., Moyer J.A., Ardnee Т.Н., J. Med. Chem., 1987, v.30, p.1818-1823).

В последние годы было найдено, что производные гидрированных пиридо[4,3-b]индолов формулы (1) или (2), в частности димебон, способны действовать на два основных подтипа ионотропных глутаматных рецепторов ЦНС млекопитающих - АМРА- и NMDA-рецепторы, что позволяет использовать их в качестве средства для лечения Болезни Альцгеймера и геропротекторного средства. Димебон потенцирует трансмембранные токи, вызываемые активацией АМРА-рецепторов, и одновременно блокирует NMDA рецепторы (В.В.Григорьев, О.А.Драный, С.О.Бачурин. Сравнительное исследование механизма действия препаратов димебона и мемантина на АМРА- и NMDA-подтипы глутаматных рецепторов нейронов головного мозга крыс. // бюлл. Экспер. биол. мед., 2003, №11, с.535-538).

Авторами изобретения неожиданно было найдено, что соединения формулы (1) и формулы (2) обладают способностью значительно устранять последствия острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, в том числе как гемморрагического, так и ишемического инсультов, благодаря обнаружению у них новых свойств, которые не вытекают из химической структуры этих соединений и ранее известных свойств (в частности, положительных модуляторов АМРА-рецепторов или блокаторов NMDA-рецепторов), и могут быть использованы в качестве лекарственного средства для лечения инсульта.

Согласно изобретению фармакологическое средство для лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, в том числе инсульта, содержащее активное начало и фармацевтически приемлемый носитель в качестве активного начала, содержит эффективное количество гидрированного пиридо(4,3-b)индола формулы (1) или формулы (2).

Понятие «фармакологическое средство» подразумевает использование любой лекарственной формы, содержащей соединение формулы (1) или формулы (2), которые могли бы найти профилактическое или лечебное применение в медицине в качестве средства для лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, в том числе инсульта.

Понятие «эффективное количество», используемое в данной заявке, подразумевает использование того количества соединений формулы (1) или формулы (2), которое в соединении с его показателями активности и токсичности, а также на основании знаний специалиста должно быть эффективным в данной лекарственной форме.

Для получения фармакологического средства одно или несколько соединений формулы (1) или формулы (2) смешиваются как активный ингредиент с фармацевтически приемлемым носителем, известным в медицине согласно принятым в фармацевтике способам. В зависимости от лекарственной формы препарата носитель может иметь различные формы.

Согласно изобретению способ лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, в том числе инсульта, заключается во введении пациенту фармакологического средства, содержащего эффективное количество гидрированного пиридо(4,3-b)индолов формулы (1) или формулы (2), в дозе 0,01-10 мг/кг массы тела по крайней мере один раз в день в течение периода, необходимого для достижения терапевтического эффекта.

Соединения формулы (1) или формулы (2) могут вводиться в виде общепринятых оральных композиций, таких как таблетки, таблетки с покрытием, желатиновые капсулы с твердым и мягким покрытием, эмульсии или суспензии. Преимущество, однако, имеют жидкие формы, пригодные для внутривенных инъекций или для капельниц. Примерами носителей, которые могут использоваться для изготовления таких композиций, являются лактоза, кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновая кислота или ее соли и т.п. Приемлемыми носителями для желатиновых капсул с мягким покрытием являются, например, растительные масла, воски, жиры, полутвердые и жидкие полиолы и т.п. Кроме того, фармацевтические препараты могут содержать консерванты, солюбилизаторы, стабилизаторы, смачивающие агенты, эмульгаторы, подсластители, красители, корригенты, соли для изменения осматического давления, буферы, покрывающие агенты или антиоксиданты. Они могут также содержать и другие вещества, обладающие ценными терапевтическими свойствами. Препаративные формы могут представлять собой обычную стандартную дозу и могут быть приготовлены известными в фармации способами.

Техническим результатом, который может быть получен при осуществлении изобретения, является значительное снижение летальности больных, ослабление тяжелых последствий острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, в том числе инсульта (параличей, парезов, снижение когнитивных функций).

Возможность осуществления изобретения с реализацией заявляемого назначения и получением технического результата подтверждается, но не исчерпывается, следующими примерами.

Пример 1. Изучение антиишемического действия димебона на модели ишемии мозга крыс, вызванной необратимой окклюзией сонных артерий.

В качестве представителя соединений общей формулы (1) и (2) был взят лекарственный препарат «Димебон», дигидрохлорид 2,8-диметил-5-[2-(6-метилпиридил-3-)этил]-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-пиридо[4,3-b]индола формулы (2):

Ишемию мозга крыс, вызываемую необратимой окклюзией сонных артерий, проводили согласно Методическим указаниям по экспериментальному изучению препаратов для лечения мозгового кровообращения и мигрени. - «Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ». Медицина, Москва, 2005, с.332-338.

Эксперименты проводились на белых беспородных самцах крыс весом 200-250 г, наркотизированных хлоралгидратом (350 мг/кг, в/б). Животным проводили необратимую одномоментную билатеральную перевязку общих сонных артерий. В группе ложнооперированных животных лигатуры подводили под сосуды, но не затягивали их.

После завершения операции животных случайным образом делили на группы: крысам первой группы вводили димебон в дозе 0,1 мг/кг внутрибрюшинно через 30 минут, затем каждый день в течение 14 дней после операции; крысам 2-й группы вводили нимодипин в дозе 0,1 мг/кг внутрибрюшинно через 30 минут, затем каждый день в течение 14 дней после операции. Животные контрольной группы и ложнооперированные в те же сроки получали физиологический раствор (0,9% хлористый натрий).

Статистическую обработку данных проводили с помощью программы "Биостат" с использованием параметрических и непараметрических методов. Регистрация гибели крыс показала, что через сутки после операции в группе ложнооперированых животных не наблюдалось гибели, а ишемия вызывала гибель 23,1% крыс в первые сутки и 30,8% - на 14-й день после операции.

В группе крыс, леченных димебоном, этот показатель составлял 7,7% в течение всего времени наблюдения, т.е. наблюдалось статистически достоверное уменьшение количества погибших крыс (таблица 1). Это свидетельствует о протективном действии димебона по жесткому показателю гибели крыс после необратимой окклюзии сонных артерий.

Нимодипин в аналогичной дозе 0,1 мг/кг обладал меньшей способностью уменьшать гибель животных. Через 14 дней после операции процент гибели крыс существенно не отличался от показателя контрольных животных (таблица 1).

Таким образом, димебон оказывал противоишемическое, противоинсультное действие в опытах на животных с ишемическим инсультом, вызванным необратимой окклюзией сонных артерий, способствуя выживанию крыс, что свидетельствует о его антиинсультном действии. По выраженности и глубине эффектов димебон значительно превосходит нимодипин.

Таблица 1Влияние димебона на выживаемость животных с ишемией мозга, вызванной окклюзией сонных артерий у крысГруппы животныхДозы, мг/кг1-е сутки после операции3-е сутки после операцииКоличество погибших животных в течение 14 суток после ишемии по отношению к общему количеству оперированных животных в абсолютных единицах и в %а.е.%а.е.%Ложнооперированные 0/1400/140Ишемия 3/1323,1^*4/1330,8^*Ишемия + димебон0,11/137,7^#1/137,7^#Ишемия + нимодипин0,11/1010^#2/1020

^* - Достоверность отличий между группой ложнооперированных животных и группой крыс с ишемическим инсультом - Р≤0,05; ^# - Достоверность между крысами с ишемическим инсультом (контроль) и животными с ишемическим инсультом, получавшими препараты - Р≤0,05. 

Из Табл.1 следует, что имеются достоверные отличия между показателями группы крыс ложнооперированных и группой крыс с ишемическим инсультом (^* - Р≤0,05), а также между группой крыс с ишемическим инсультом и группой крыс, получавших димебон (^# - Р≤0,05). Т.е. димебон достоверно предупреждает гибель крыс от ишемического инсульта.

Неврологический дефицит у животных с ишемией мозга, вызванной перевязкой сонных артерий, определяли по шкале Stroke-index McGrow в модификации И.В. Ганнушкиной (Функциональная ангиоархитектоника головного мозга, Москва, Медицина, 1977, 224 стр.). Тяжесть состояния определялась по сумме соответствующих баллов. Отмечалось количество крыс с легкой симптоматикой до 2,5 баллов по шкале Stroke-index (вялость движений, слабость конечностей, полуптоз, тремор, манежные движения) и тяжелыми проявлениями неврологических нарушений (от 3 до 10 баллов) - парезы конечностей, паралич нижних конечностей, боковое положение.

Показано, что в группе животных с ишемическим инсультом почти у всех крыс отмечались неврологические отклонения, характеризующиеся вялостью и слабостью движений, полуптозом, особенно ярко выраженные в первые сутки и ослабевающие к седьмому дню наблюдения (таблица 2). Димебон в дозе 0,1 мг/кг предупреждал у крыс с ишемией развитие неврологического дефицита, статистически достоверно уменьшая количество животных с замедленностью движений и двусторонним полуптозом при регистрации показателей через сутки и семь дней после операции. Нимодипин в дозе 0,1 мг/кг проявлял свое протективное действие в основном на седьмой день наблюдения (таблица 2).

Таким образом, димебон оказывает позитивный протективный эффект, ослабляя проявления неврологического дефицита у крыс в первые и седьмые сутки после ишемии мозга, вызванной перевязкой сонных артерий, и по этому эффекту превосходит действие нимодипина.

Таблица 2Влияние димебона (0,1 мг/кг) на неврологический дефицит у крыс после ишемического инсульта по шкале Mc GrowГруппа животныхКоличество животных с неврологическим дефицитом, %вялость, замедленность движенийслабость конечностейодност. полуптоздвуст. полуптозодност. птоз1-е сутки Ложнооперированные10000 Инсульт60,020,020,050,0 Инсульт + димебон33,3*16,716,733,3* Инсульт + нимодипин50202050 3-е сутки Ложнооперированные00000Инсульт33,322,211,144,411,1инсульт + димебон33,316,7025,0* Инсульт + нимодипин3002020* 7-е сутки Ложнооперированные0000 Инсульт22,211,111,144,4 инсульт + димебон9,1*9,109,1* Инсульт + нимодипин010020* 

* - Достоверность отличий между крысами с ишемией (контроль) и животными с ишемией, получавшими препараты (Р≤0,05). 

Из Табл.2 следует, что димебон достоверно уменьшает неврологический дефицит у крыс после ишемического инсульта, превосходя по этим параметрам нимодипин.

Пример 2. Изучение противоинсультного действия димебона на модели интрацеребральной посттравматической гематомы (геморрагического инсульта).

Исследование проводили согласно Методическим указаниям по экспериментальному изучению препаратов для лечения мозгового кровообращения и мигрени. - «Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», Медицина, Москва, 2005, с.332-338 в модификации Макаренко А.Н. и соавторов (Метод моделирования локального кровоизлияния в различных структурах головного мозга у экспериментальных животных. Ж. высш. нервн. деят., 2002, т.52, №6, стр.765-768).

Эксперименты осуществляли на беспородных белых крысах-самцах весом 200-250 г, содержавшихся в виварии при свободном доступе к пище (стандартный брикетированный корм) и воде, при естественной смене дня и ночи. Крысам, наркотизированным нембуталом (40 мг/ кг, в/м) при помощи специального устройства (мандрен-нож) и стереотаксиса, осуществляли деструкцию мозговой ткани в области capsule interna с последующим (через 2-3 минуты) введением в место повреждения крови, взятой из-под языка крысы (0,02-0,03 мл). Ложнооперированным животным проводили скальпирование и трепанацию черепа.

Животные были разделены на 4 группы: ложнооперированные, группа животных с геморрагическим инсультом, животные с геморрагическим инсультом, получавшие димебон в дозе 0,1 мг/кг, и животные с геморрагическим инсультом, получавшие нимодипин в дозе 0,1 мг/кг. Регистрацию эффектов веществ проводили через 24 часа, 3, 7 и 14 суток после операции.

Димебон и нимодипин вводили животным с инсультом в одинаковой дозе 0,1 мг/кг внутрибрюшинно через 3-3,5 часа после операции, а затем ежедневно в течение 14 дней после операции. Контрольным группам животных вводили физиологический раствор. Каждая группа в начале эксперимента состояла из 9-18 животных.

Неврологический дефицит у животных определяли по шкале Stroke-index McGrow в модификации И.В. Ганнушкиной (Функциональная ангиоархитектоника головного мозга. Москва, Медицина, 1977, 224 стр.). Тяжесть состояния определялась по сумме соответствующих баллов. Отмечалось количество крыс с легкой симптоматикой до 2,5 баллов по шкале Stroke-index (вялость движений, слабость конечностей, односторонний полуптоз, тремор, манежные движения) и тяжелыми проявлениями неврологических нарушений (от 3 до 10 баллов) - парезы конечностей, паралич нижних конечностей, боковое положение.

Регистрацию гибели крыс проводили в течение всего времени наблюдения (14 дней).

Статистическую обработку данных проводили с помощью программы "Биостат" с использованием параметрических и непараметрических методов. В качестве эталона использовался нимодипин (в дозе 0,1 мг/кг) по описанной выше схеме.

При регистрации гибели животных показано, что в группе ложнооперированных крыс к 14-му дню наблюдалась гибель лишь 6,2% животных, а в группе с геморрагическим инсультом этот показатель составил 55,6%, при этом в первые трое суток погибло более 33,3% животных (таблица 3).

Димебон в дозе 0,1 мг/кг почти полностью предупреждал гибель животных на протяжении всего времени наблюдения и к 14-му дню погибло только 22,2% (2 из 9) животных.

В группе крыс, получавших нимодипин в дозе 0,1 мг/кг, уже в первые сутки погибло 20% крыс, а к 14-му дню этот показатель составлял 40%.

Полученные результаты свидетельствуют о высокой защитной активности димебона по основному жесткому показателю противоинсультного действия - предупреждению гибели животных после геморрагического инсульта. По способности предупреждать гибель животных после инсульта димебон превосходит нимодипин.

Исследование неврологического статуса выживших животных с использованием шкалы Stroke-index McGrow показало, что в группе животных с геморрагическим инсультом в первый день наблюдения тяжелая симптоматика отмечалась у 50%, а легкая - у 87% (таблица 4).

Димебон ослаблял у животных неврологический дефицит, уменьшая почти в 2 раза количество животных с парезами. Сходным эффектом обладал нимодипин.

Таким образом, димебон оказывал позитивный эффект в отношении динамики развития неврологического дефицита у крыс в первые сутки после поражения геморрагическим инсультом и по этому эффекту не уступал нимодипину.

Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что у крыс с геморрагическим инсультом наблюдается выраженный неврологический дефицит и гибель животных. При этом отмечается углубление патологической симптоматики к 14-му дню наблюдения. Динамика ухудшения состояния и гибели крыс с геморрагическим инсультом свидетельствует о скрытой недостаточности компенсаторных реакций организма, нарастающих в определенные критические дни (3, 7, 14 сутки) послеоперационного периода и развитии сопутствующих осложнений (отек, набухание тканей, нарушение интрацеребральной гемодинамики, повышенного внутричерепного давления, ишемии мозга). Димебон при введении животным через 3 часа после инсульта и затем в течение 14 дней после создания геморрагического инсульта обладает отчетливым противоинсультным действием, предотвращая гибель крыс и ослабляя нарушения неврологического статуса животных с посттравматической гематомой. Димебон превосходит нимодимин по глубине и выраженности эффекта.

Таблица 3Влияние димебона на выживаемость животных после геморрагического инсульта (ГИ)Группы животныхДозы, мг/кг1-е сутки после операции3-е сутки после операции7-е сутки после операции14-е сутки после операцииКоличество погибших животных в течение 14 суток после геморрагического инсульта по отношению к общему количеству оперированных животных в абсолютных единицах и в %а.е.%а.е.%а.е.%а.е. %Ложнооперированные 0/1600/1600/1601/166,2Геморр. инсульт 2/1811,1*6/1833,3*6/1833,3*10/1855,6*Геморр. инсульт + Димебон0,10/901/911,1^#1/911,1^#2/922,2^#Геморр. инсульт + нимодипин0,12/10202/10203/10304/1040* (Р≤0,05) - Достоверность отличий между группой ложнооперированных животных и крыс с ГИ;^# (Р≤0,05) - достоверность отличий между крысами с ГИ контролем и получавшими препараты.

Из Табл.3, следует, что димебон достоверно (^# - P≤0,05) предупреждает гибель крыс от геморрагического инсульта.

Таблица 4Влияние димебона на неврологический дефицит у крыс после геморрагического инсульта (ГИ) по шкале Mc GrowПоказатели неврологического дефицитаКоличество животных с неврологическим дефицитом через 24 часа после операции, %Геморр. инсультГеморр. инсульт + димебонГеморр. инсульт + нимодипинЛожнооперированныеВялость, замедленность движений87,5885033Слабость конечностей65665033Манежные движения12,533250Парез 1-4 конечностей503325*0* - Достоверность отличий между крысами с ГИ (контроль) и животными, получавшими препараты (Р≤0,001).

Из Табл.4, следует, что димебон достоверно уменьшает неврологический дефицит у крыс после геморрагического инсульта, не уступая по этим параметрам нимодипину.

Полученные результаты свидетельствуют, что димебон наряду с его описанными ранее свойствами может быть использован для эффективного лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, в том числе инсульта.

Настоящее изобретение относится к области лекарственных средств, в частности к применению гидрированных пиридо[4,3-b]индолов формулы (1) или формулы (2) (в частности, димебона), для лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, в том числе инсульта. Кроме того, настоящее изобретение относится в фармакологическому средству, включающему указанные соединения, и способу лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения. Технический результат заключается в расширении арсенала средств для лечения нарушений мозгового кровообращения. 4 н. и 12 з.п. ф-лы, 4 табл.

1. Применение гидрированных пиридо (4,3-b)индолов формулы (1) в качестве средства для лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения,

в которой R¹ выбран из группы, содержащей СН₃-, СН₃СН₂- или PhCH₂;

R² выбран из группы, содержащей Н-, PhCH₂- или 6-СН₃-3-Ру-(СН₂)₂-

R³ выбран из группы, содержащей Н-, СН₃- или Br-.

в которой R¹ выбран из группы, содержащей СН₃-, СН₃СН₂- или PhCH₂-

R² выбран из группы, содержащей Н-, PhCH₂- или 6-СН₃-3-Ру-(СН₂)₂-, а R³ выбран из группы, содержащей Н-, СН₃- или Br-.