СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРУТИНИНА ИЗ РАСТЕНИЙ РОДА FERULA Российский патент 2008 года по МПК A61K36/23 A61K31/21 B01D11/02 

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к растительным экстрактам из Ferula spp и способу выделения ферутинина из указанных экстрактов.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Многочисленные растения рода Ferula содержат терпены с эстрогенной активностью, известные также как фитоэстрогены, т.е. вещества, которые регулируют гормональные функции и, по всей вероятности, являются действенной альтернативой использованию синтетических гормонов при лечении предменструального синдрома и расстройств, связанных с менопаузой и старением. Экстракты некоторых типов Ferula использовались в прежние времена в качестве контрацептивов и для лечения импотенции и расстройств менопаузы. Недавно были описаны спиртовые экстракты из Ferula asafetida L. (WO 0230438) в качестве лекарств против рака.

Наиболее многочисленными соединениями в растениях рода Ferula являются производные ешкенадиола (II):

в частности сложные даукановые эфиры, имеющие общую формулу (I):

Даукановые эфиры являются известными соединениями и, например, описаны в Phytochemistry, vol. 37, n°3, страницы 597-623, 1994. В формуле (I) R представляет насыщенный или ненасыщенный алифатический ацильный остаток с прямой или разветвленной цепью или необязательно замещенный ароматический ацильный остаток. Примерами R групп являются изо-валероил, ангелоил, бензоил, п-гидроксибензил, вератроил или циннаммоил.

Даукановые эфиры из Ferula spp являются модуляторами эстрогена, сходными с SERM (селективными модуляторами рецептора эстрогена); среди них Ферутинин (Ia) показывает заметную эстрогенную активность, в то время как другие имеют довольно умеренную активность.

В частности, ферутинин является альфа-агонистом рецептора эстрогена (ERα) и бета-агонистом/антагонистом рецептора эстрогена (ERβ). Было также показано, что ферутинин имеет более высокое связывание с рецепторами эстрогена, чем тамоксифен.

Поэтому существует потребность в получении обогащенных ферутинином экстрактов или в оптимизации экстракции ферутинина в чистой форме из растительных материалов, содержащих его предшественников.

Способ, включающий гидролиз цельного экстракта даукановых эфиров для получения неочищенного ешкенадиола и последующую переэтерификацию ешкенадиола защищенной подходящим образом п-гидроксибензойной кислотой, например п-ацетоксибензойной кислотой, является известным из литературы (ЖОХ СССР (англ. перевод); EN; 28; 10; 1992; 1666-1673). Тем не менее, этот способ дает довольно небольшой выход (примерно 45%), главным образом, вследствие конкурентных реакций переэтерификации.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящее время было обнаружено, что использование п-пивалоилоксибензойной кислоты в качестве этерифицирующего агента позволяет избежать конкурентных реакций, ответственных за низкий конверсионный выход.

Поэтому целью настоящего изобретения является способ получения ферутинина (Ia),

который включает следующие стадии:

a) экстрагирование даукановых эфиров из Ferula spp;

b) основной гидролиз даукановых эфиров с получением ешкенадиола (II)

с) этерификацию ешкенадиола (II) п-пивалоилоксибензойной кислотой (III)

с получением п-пивалоилферутинина (IV)

d) гидролиз п-пивалоилферутинина (IV) в ферутинин.

Термин "Даукановые эфиры" означает соединения общей формулы (I), определенной выше; указанные сложные эфиры могут быть получены путем экстрагирования корней или надземных частей растения Ferula spp, предпочтительно Ferula communis и Ferula hermonis, общепринятыми способами, например экстракцией низшими спиртами. Исходя из корневищ Ferula hermonis, содержащих ферутинин и бензойный эфир ешкенадиола (недостаточно легко отделимого с помощью хроматографии) в соотношении 1:1, чистый ферутинин может быть выделен экстрагированием корней метанолом, обработкой экстракта 5% раствором КОН и обратной экстракцией омыленного экстракта алифатическими углеводородами, простыми эфирами, сложными эфирами или хлорированными растворителями.

Альтернативно, даукановые эфиры могут получаться путем экстракции сверхкритическим СО₂ при температурах в интервале от 35 до 65°С, предпочтительно при 45°С, и давлении в интервале от 200 до 260 бар, предпочтительно при 245 бар. В сепараторе (или в сепараторах) температура варьирует от 25 до 45°С и давление составляет около 50 бар. В данных экспериментальных условиях смолистые вещества, которые затрудняют извлечение желательных соединений, не экстрагируются. Остаток может непосредственно подвергаться омылению в соответствии с тем, как описано в примерах.

Ешкенадиол этерифицируется п-пивалоилоксибензойной кислотой и обрабатывается в том же реакционном растворителе, основанием, предпочтительно первичным амином, более предпочтительно этилендиамином, давая чистый ферутинин. Согласно предпочтительному воплощению изобретения стадии с) и d) удобным образом осуществляются в последовательности без выделения промежуточного п-пивалоилферутинина.

Еще одним объектом настоящего изобретения является применение в косметических и дерматологических целях ферутинина, п-пивалоилферутинина и экстрактов Ferula spp, предпочтительно экстрактов Ferula communis и Ferula hermonis.

При нанесении на кожу ферутинин и экстракты Ferula spp неожиданно оказались способны увеличивать биосинтез коллагена и оказывать влияние на тонизирующее, трофическое и увлажняющее действие, обеспечивая таким образом плотность и эластичность. Более того, они снижают секрецию сальных желез и играют заметную роль в регулировании гирсутизма и вирилизации лица. Поэтому композиции, содержащие ферутинин или экстракты Ferula spp, могут использоваться в косметической и дерматологической области для лечения поверхностных или глубоких морщин или других неэстетизмов, а также для лечения различных форм воспаления сальных желез и себореи.

Ферутинин и экстракты Ferula spp могут быть приготовлены в виде кремов, гелей и лосьонов в смеси с общепринятыми наполнителями или эксципиентами, например, описанными в Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook, XVII ed., Mack Pub., N.Y., U.S.A., предпочтительно в присутствии соевого лецитина или фосфолипидов, таких как лауроилфосфатидилхолин и миристоилфосфатидилхолин, которые могут быть включены в состав водно/масляной или масляно/водной эмульсий или в трансдермальные пластыри.

Следующие примеры иллюстрируют изобретение более подробно.

ПРИМЕРЫ

Пример 1 - Выделение ешкенадиола из корней Ferula hermonis.

250 г тонко измельченных корней Ferula hermonis (распределение размера частиц: 2 мм) экстрагируются с помощью перколяции 1 л MeOH. После мацерации (вымачивания) в течение двух дней и перколяции растворителя операция повторяется (4×1 л), давая 112,2 г метанольного экстракта (45%). Вытяжка лекарства контролируется с помощью TLC (ТСХ тонкослойной хроматографии) (петролейный эфир/EtOAc 8/2, ферутинин R_f: 0,14).

Метанольный экстракт нагревается с обратным холодильником с 513 мл 10% метанольного раствора КОН. Через 1 час анализ ТСХ (петролейный эфир-EtOAc 8/2, ферутинин R_f: 0,14; R_f ешкенадиол: 0,31) показывает, что реакция завершилась. После охлаждения реакционная смесь разбавляется водой (500 мл) и экстрагируется петролейным эфиром (4×500 мл). Объединенные фазы петролейного эфира промываются соляным раствором, сушатся и выпариваются. Полученный в результате полукристаллический остаток промывается холодным петролейным эфиром (температура холодильника), давая 7,5 г кристаллического ешкенадиола. Маточные жидкости очищаются с помощью хроматографии (50 г силикагеля, петролейный эфир-EtOAc 95:5), давая α-бисаболол (870 мг), смесь α-бисаболола и ешкенадиола и чистыйешкенадиол (3,4 г после кристаллизации). Смесь ешкенадиола и α-бисаболола объединяется с маточной жидкостью и подвергается хроматографии (50 г силикагеля, петролейный эфир-EtOAc 95:5), давая 1,95 г кристаллического ешкенадиола (общий выход: 12,85 г, 5,1%).

Соединение имеет следующие физико-химические и спектроскопические свойства:

ИК-спектр (KBr, см^-1): 3339, 2965, 2905, 2875, 1470, 1375, 1047, 968, 858

Масс-спектр (C.I.)

M⁺+1 - H₂O=221; M⁺+1 - 2H₂O=203

Спектр ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ: Н9 5,43 м, Н2 3,9 м, Н14 1,78 с, Н15 1,00 с, Н12 0,95 д J 4,98, Н13 0,91 д J 5,13.

Пример 2 - Выделение ешкенадиола из корней Ferula communis.

250 г мелкоизмельченных корней Ferula communis (распределение размера частиц: 2 мм) экстрагируются с помощью перколяции с использованием 1 л MeOH. После мацерации в течение двух дней и перколяции растворителя операция повторяется (4 × 1л); метанольные экстракты концентрируются до объема, равного весу измельченных корней, и к экстракту добавляется 10% КОН (10 мл). Щелочной раствор нагревается с обратным холодильником в течение 2 часов, затем охлаждается и обратно экстрагируется три раза 200 мл н-гексана. Вытяжка лекарства контролируется с помощью ТСХ (петролейный эфир/EtOAc 8/2).

Объединенные гексановые фазы промываются соляным раствором, сушатся и выпариваются. Полученный в результате полукристаллический остаток промывается холодным петролейным эфиром (температура холодильника), давая 3,5 г кристаллического ешкенадиола. Маточная жидкость очищается по способу Примера 1. Выход: 0,8 г ешкенадиола, имеющего такие же физико-химические свойства, как в Примере 1.

Пример 3 - Выделение ешкенадиола из надземных частей Ferula communis.

1 кг мелкоизмельченных надземных частей Ferula communis экстрагируются диоксидом углерода при 45°С при давлении 245 бар в аппарате для экстрагирования сверхкритическими газами. В сепараторе (или в сепараторах) температура варьирует от 25 до 45°С, а давление составляет примерно 50 бар. В этих условиях смолистые вещества, которые затрудняют извлечение желаемых соединений, не экстрагируются. Остаток, который содержит только липофильные соединения и воду, берется с метанолом и обрабатывается основаниями для гидролиза ешкенадиольных эфиров, как представлено в примерах 1 и 2. После очистки получается 5,1 г чистого соединения, имеющего те же характеристики, что и продукт примера 1.

Пример 4 - Синтез п-пивалоилоксибензойной кислоты

4-Гидроксибензойная кислота (114,5 г, 829 ммоль) растворяется при перемешивании в пиридине (1,15 л) при охлаждении на ледяной бане до температуры менее 5°С. К полученному раствору добавляется 4-диметиламинопиридин (DMAP, 0,3 эквивалента, 248,8 ммоль, 30,4 г) и пивалоилхлорид (3 эквивалента, 2,487 моль, 300 г, 293,6 мл). Раствор оставляют подогреваться до комнатной температуры и оставляют при перемешивании в течение 2 часов, затем добавляют воду (2,29 л) (экзотермическая реакция: охлаждение раствора в ледяной бане) и оставляют при перемешивании в течение следующих 3 часов.

Раствор вливается в разделительную воронку и экстрагируется CH₂Cl₂ (3×750 мл). Объединенные метиленхлоридные фазы промываются 2М H₂SO₄ (4×750 мл) и насыщенным раствором NaCl (1×1150 мл), затем сушатся над Na₂SO₄ (60 г).

Раствор фильтруется через бумажный фильтр и растворитель выпаривается в вакууме, давая остаток, который растирается с петролейным эфиром при 30-50°С (3×400 мл), фильтруется с помощью отсасывания и сушится вакуумом в статической сушилке при 45°С в течение 15 часов. Получается 130,5 г продукта со следующими спектроскопическими характеристиками.

ИК-спектр (KBr, см^-1): 3680, 2978, 2361, 1753, 1686, 1603, 1427, 1289, 1204, 1163, 1103.

Масс-спектр (C.I.): M⁺+1=223

Спектр ¹Н ЯМР (300 МГц, D-DMSO) δ: Н3=7 8,00 д J=8,48, H4=6 7,23 д J=8,55, CH3 1,34 с.

Пример 5 - Синтез ферутинина из ешкенадиола

Ешкенадиол (100 г, 419,5 ммоль) растворяется в CH₂Cl₂ (600 мл) при перемешивании при комнатной температуре. К полученному в результате раствору добавляют п-пивалоилоксибензойную кислоту (1,4 эквивалента, 587,3 ммоль, 130,5 г) и DMAP (0,3 эквивалента, 125,9 ммоль, 15,4 г). Раствор оставляют при перемешивании на 10 минут для завершения растворения реагентов, затем добавляется N,N'-дициклогексилкарбодиимид (DCC, 1,8 эквивалентов, 755,1 ммоля, 155,8 г). Реакция завершается через 2 часа.

Раствор концентрируется до 2 объемов (200 мл) и разбавляется 5 объемами CH₃CN (500 мл), после этого дициклогексилмочевиновый осадок отфильтровывается и промывается еще 5 объемами CH₃CN (2×250 мл). Объединенные органические фазы вливаются в разделительную воронку, экстрагируются 10% вес/объем Na₂CO₃ (2×250 мл) и насыщенным раствором NaCl (1×250 мл), затем сушатся над Na₂SO₄ (100 г). Na₂SO₄ отфильтровывается и растворитель выпаривается в вакууме, давая 360 г соединения (IV), имеющего следующие спектроскопические характеристики:

Спектр ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ: 8,09 (д, J=9,0 Гц, Н3'-H5'), 7,20 (д, J=8,7 Гц, H2'-H6'), 5,60 (шир.т, J=4,7 Гц, Н9), 5,35 (тд, J=10,4-2,9 Гц, Н6), 2,58 (дд, J=13,1-10,9 Гц, Н7b), 2,34 (дд, J=14,1-2,3 Гц, Н7а), 2,07 (м, Н10), 2,04 (д, J=2,7 Гц, Н5), 1,97 (д, J=9,7 Гц, Н2а), 1,89 (м, Н11), 1,86 (с, Н14), 1,63 (м, Н2b), 1,57 (м, Н3а), 1,41 (с, С(СН3)3), 1,30 (м, Н3b), 1,14 (с, Н15), 0,99 (д, J=6,9 Гц, Н12), 0,89 (д, J=6,7 Гц, Н13).

Соединение (IV) растворяется при перемешивании при комнатной температуре в 2 л CH₂Cl₂. К получающемуся раствору добавляется этилендиамин (10 эквивалентов, 280 мл). Через 3 часа реакция завершается. Раствор охлаждается до 0°С, вливается в разделительную воронку, затем промывается 3М H₂SO₄ при 0°С (2×750 мл, экзотермическая реакция) и насыщенным раствором NaCl (1×500 мл). Органическая фаза сушится над Na₂SO₄ (100 г), фильтруется и выпаривается до высыхания. Остаток (230 г) наносится на силикагельную колонку (2,5 кг), уравновешенную 5,8 л смеси гексан:AcOEt = 9:1 и элюируется 70 л той же смеси. Фракции, содержащие продукт, объединяются, растворитель выпаривается в вакууме и продукт сушится в статической сушилке при 45°С в течение 24 часов.

Получается 139 г (92,4%) продукта, имеющего следующие спектроскопические характеристики:

ИК-спектр (KBr, см^-1): 3410, 1686, 1655, 1608, 1593, 1560, 1279, 1165, 1099, 771.

Масс-спектр (C.I.)

M⁺+1 - H₂O=341

Спектр ¹Н ЯМР (200 МГц, CDCl₃) δ: Н3'=7' 7,94 д J=8, 4'=6' 6,88 д J=8, Н9 5,56 м, Н2 5,23 дт J=11, Н14 1,80 шир.с, Н15 1,10 с, Н13 0,94 д J=6,5, Н12 0,82 д J=6,5.

Пример 6 - Получение экстракта Ferula hermonis

1 кг целого растения Ferula hermonis экстрагируется три раза 5 объемами ацетона. Объединенные ацетоновые экстракты концентрируются до 0,5 частей в сравнении с весом исходной биомассы и разбавляются 2 частями воды. Водный раствор доводится до рН 7,8 разбавленной КОН в присутствии гексана при сильном перемешивании. Гексановая фаза отбрасывается, а водная фаза подкисляется до рН 5 и обратно экстрагируется н-гексаном. Гексановая фаза, которая содержит ферутинин, концентрируется досуха, давая 52 г экстракта, содержащего примерно 35% ферутинина.

Пример 7 - Готовая форма, содержащая ферутинин, для лечения поверхностных морщин

Ферутинин вводится в крем, имеющий следующий состав:

Ферутинин0,20 гКарбомер 934 (Carbopol 934 P - Goodrich)0,60 гПропиленгликоль3,00 гИмидазолинилмочевина0,30 гКатон CG0,05 гДинатрий EDTA0,10 гPEG-5 соевые стеролы (Generol 122 E5 - Henkel)2,00 гОктилдодеканол (Eutanol G - Henkel)4,00 гМасло из зародышей пшеницы4,00 гСиликоновое масло 350 cps0,50 гГлицерилстеарат (Cutine GMS - Henkel)7,00 гПолисорбат 60 (Tween 60 - ICI)5,00 гТокоферол0,20 гАскорбилпальмитат0,10 г10% раствор NaOH2,00 гОтдушка (186909 - Dragoco)0,20 гОчищенная водадо 100,00 г

Пример 8 - Готовая форма, содержащая чистый экстракт Ferula hermonis с содержанием ферутинина 30% и содержанием бензойного эфира ешкенадиола 20%

Экстракт Ferula hermonis0,5 гКарбомер 934 (Carbopol 934 P - Goodrich)0,60 гПропиленгликоль3,00 гИмидазолинилмочевина0,30 гКатон CG0,05 гДинатрий EDTA0,10 гPEG-5 соевые стеролы (Generol 122 E5 - Henkel)2,00 гОктилдодеканол (Eutanol G - Henkel)4,00 гМасло из зародышей пшеницы4,00 гСиликоновое масло 350 cps0,50 гГлицерилстеарат (Cutine GMS - Henkel)7,00 гПолисорбат 60 (Tween 60 - ICI)5,00 гТокоферол0,20 гАскорбилпальмитат0,10 г10% раствор NaOH2,00 гОтдушка (186909 - Dragoco)0,20 гОчищенная водадо 100,00 г

Пример 9 - Гельсодержащий ферутинин

Ферутинин0,30 гИмидазолинилмочевина0,30 гМетилпарабен0,20 гГидроксиэтилцеллюлоза (Natrosol 250 HHX-Aqualon)2,00 гОчищенная водадо 100 мл

Пример 10 - Косметическая готовая форма, содержащая экстракт Ferula spp

Экстракт Ferula hermonis0,5 гИмидазолинилмочевина0,30 гМетилпарабен0,20 гГидроксиэтилцеллюлоза (Natrosol 250 HHX-Aqualon)2,00 гОчищенная водадо 100 мл

ЭКСПЕРИМЕНТИРОВАНИЕ

Эффективность продукта

Эффективность крема из примера 7 определялась в двойном слепом анализе с 40 женщинами-добровольцами в возрасте от 39 до 56 лет с оценкой действий на эластичность и плотность кожи и на морщины и складки. Анализ проводился при семидневном периоде подготовки, в котором пациент воздерживался от использования увлажняющих продуктов, солнечных кремов (от загара) и косметических жидкостей, избегал загара и чрезмерного воздействия ультрафиолетовых (UV) лучей.

Пациентам разрешалось пользоваться стандартными очками и губной помадой, пудрой для лица и неувлажняющими мылами.

Пациентов произвольно разделяли на две группы, в одной использовали крем плацебо, а в другой - крем из Примера 7. Крем наносили на лицо в стандартизированном количестве (0,5 г, т.е. из тюбика выдавливалось 0,5 см крема) дважды в день утром и на ночь. До и после пяти недель применения проводились следующие измерения.

Перед каждой измерительной сессией все пациенты в течение тридцати минут находились в климатической камере при 23°С и 50% относительной влажности. Каждая сессия включала три измерения прибором для измерения содержания воды в поверхностных слоях кожи, три измерения прибором, измеряющим эластичность кожи и силиконовый слепок окологлазничной области на участках кожи, обозначенных далее.

Испытания прошли все 40 пациентов.

Измерение эластичности кожи

Прибор для измерения эластичности кожи представляет собойпромышленно доступное изделие (Cutometer SEM 575, Courage & Khazaka, Germany) для измерения механических свойств кожи неинвазивным путем. Более подробно, он измеряет вертикальную деформацию поверхности кожи, когда она подвергается воздействию отрицательного давления 500 мм ртутного столба через 2 мм отверстие зонда. Длина кожного проникновения (подъема) в зонд измеряется оптически с точностью до 0,01 мм. Зонд соединен с компьютером, который регистрирует деформацию кожи в течение определенного времени. По полученной кривой могут экстраполироваться многочисленные переменные величины для оценки эластичности кожи, вязкостно-эластичного ивязкостногоповедения.

Регистрировались следующие параметры:

непосредственное растяжение (Ue), измерялось за 0,1 секунды;

замедленное растяжение (Uv);

конечное растяжение (Uf), измерялось за 10 секунд; и

непосредственное сокращение (Ur).

Испытание проводилось с применением прибора для измерения эластичности кожи на обеих щеках.

Существенных вариаций в плацебо-группе не наблюдалось. Показатель замедленного растяжения (Uv) в подвергаемой обработке группе значительно уменьшался (16%, р<0,05) после 5 недель лечения. Данный параметр отражает вязкостно-эластичные свойства и поведение дермиса. Через 5 недель также наблюдалось значительное изменение (-12%, р<0,05) в Ue, на которые значительно влияла гидратация и механические свойства поверхностного слоя. Уменьшение показателей Uv и Ue вместе со стабильностью Ur показывает увеличенную плотность кожи.

Измерение содержания воды в поверхностных слоях кожи

Нежный и гладкий вид кожи зависит главным образом от присутствия адекватного количества воды в поверхностном слое.

Прибор для измерения содержания воды в поверхностных слоях кожиявляется промышленно доступным изделием (Corneometer CM 825 Combi 3, Courage & Khazaka, Germany), который измеряет изменения емкостного сопротивления, возникающего в результате изменения гидратации кожи.

Испытание проводилось с применением прибора для измерения содержания воды в поверхностных слоях кожи на обеих щеках.

Через 5 недель наблюдалось значительное изменение у подвергаемой обработке группы, в частности, гидратация кожи повышалась на 17,5%, в то время как в плацебо-группе она понизилась на 3%.

Измерение морщинистости

Снятие силикон-слепков проводилось у пациентов, находящихся в сидячем положении. Слепки (2×5 см) получались в начале и после 5 недель с использованием "Silflo silicon Impression material" (материал для силсконовых слепков Silflo) (производства Flexico, UK). Слепки затем анализировались системой Анализатора изображения кожи с использованием программного обеспечения Quantirides - Monaderm, которое распознает кожный микрорельеф от средних морщин и глубокие морщины и подсчитывает их количество и глубину; окончательно получается величина общей области морщин.

Через 5 недель наблюдались значительные изменения у подвергаемой обработке группы. В частности, наблюдалось 21,3% (р<0,05) уменьшение области морщин, в то время как у плацебо-группы уменьшение составило 0,4%.

Статистически значительное уменьшение наблюдалось главным образом в количестве и глубине средних и глубоких морщин.

Заключение

Исследование позволило сделать вывод, что крем примера 7 обладает хорошей косметической активностью при лечении кожи с признаками старения от времени и света, так как это повышает плотность кожи и гидратацию и понижает среднюю область морщин, в частности глубоких микро- и макроморщин. Кожа заметно становилась более плотной и более гладкой.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу получения ферутинина и его применению. Способ получения ферутинина, включающий экстракцию даукановых эфиров из Ferula spp, основной гидролиз даукановых эфиров с получением ешкенадиола, этерификацию ешкенадиола п-пивалоилоксибензойной кислотой с получением п-пивалоилферутинина, далее гидролиз п-пивалоилферутинина в ферутинин. Применение ферутинина для получения косметических и/или дерматологических композиций. Применение п-пивалоилферутинина для получения косметических и/или дерматологических композиций. Вышеописанный способ позволяет исключить конкурентные реакции и повысить выход ферутинина для получения косметических и дерматологических композиций. 3 н. и 6 з.п.ф-лы.

1. Способ получения ферутинина (Ia)

который включает следующие стадии:

a) экстракцию даукановых эфиров из Ferula spp;

b) основной гидролиз даукановых эфиров с получением ешкенадиола (II)

с) этерификацию ешкенадиола (II) п-пивалоилоксибензойной кислотой (III)

;

с получением п-пивалоилферутинина (IV)

d) гидролиз п-пивалоилферутинина (IV) в ферутинин.