СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОСТАВА МНОГОКОМПОНЕНТНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА ЖАРОПОНИЖАЮЩЕГО, АНТИАЛЛЕРГИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ Российский патент 2008 года по МПК G01N33/15 G01N30/00 G01N30/34 G01N30/36 

Изобретение относится к высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), а именно к способам определения количественного состава многокомпонентных лекарственных препаратов жаропонижающего, антиаллергического действия, и может быть использовано в практике контрольно-аналитических лабораторий фармацевтических предприятий и аптечной сети. Способ относится к числу массовых.

В состав препарата жаропонижающего, антиаллергического действия «Максиколд» в качестве действующих веществ входят аскорбиновая кислота (АК) (0,06 г), парацетамол (0,750 г), фенилэфрина г/х (0,01 г) и вспомогательные вещества и наполнители (до 5 г). Количественный анализ этого препарата - сложная задача, что обусловлено как комплексным его составом, так и различием химических свойств компонентов (кислоты, основания, нейтральные соединения) и нестабильностью АК в водных растворах.

В литературе не описаны методы анализа препаратов, идентичных по составу порошку «Максиколд».

Наиболее близким к заявляемому изобретению по составу анализируемых препаратов, поставленной задаче, техническому решению и достигаемым результатам является способ определения количественного состава многокомпонентного лекарственного препарата «Пенталгин от простуды» (Г.Б.Голубицкий, Е.В.Будко, М.В.Покровский, Е.Ф.Прохода и Е.В.Захарова. Способ количественного анализа многокомпонентных лекарственных препаратов жаропонижающего, анальгезирующего, противопростудного действия. Патент РФ 2267115), в котором анализ проводят методом обращенно-фазовой ВЭЖХ в режиме линейного градиента, наклон и продолжительность которого определены свойствами компонентов анализируемого препарата. В качестве подвижной фазы используют смеси ацетонитрила с буферным раствором (0,025 М раствор калия фосфата однозамещенного - КН₂РО₄, рН которого доводят до 3,0 добавлением концентрированной ортофосфорной кислоты). В этом способе для повышения стабильности АК в качестве растворителя в испытуемом растворе используют 0,025 М фосфатный буферный раствор и добавляют 1,0 мг/мл сульфита натрия. Детектирование всех ведут при 216 нм, что обеспечивает оптимальную чувствительность для всех определяемых веществ, в том числе для кодеина фосфата, содержащегося в препарате в относительно малых количествах.

При воспроизведении описанного способа для препарата «Максиколд» было установлено, что указанные хроматографические условия не являются оптимальными, что связано с содержанием в «Максиколде» вспомогательного вещества, не разделяющегося с пиком парацетамола (фиг.1). Традиционные способы решения такой проблемы - изменение рН подвижной фазы и продолжительности градиента положительного результата в этом случае не дали. Так, удлинение градиента до 20, 30, 40, 50 и 60 мин не позволяет добиться разделения (фиг. 2-5). Повышение рН подвижной фазы до 4,7 позволяет разделить эти вещества при общей продолжительности градиента 60 мин, но при этом форма пика аскорбиновой кислоты и его разделение с соседними пиками становится неудовлетворительным (фиг.6).

Задачей настоящего изобретения является разработка способа определения количественного состава порошка «Максиколд» с обеспечением полного разделения пика парацетамола с пиком вспомогательного вещества и сохранением удовлетворительной формы и отделения пиков других действующих и вспомогательных веществ.

Поставленная задача достигается методом обращенно-фазовой ВЭЖХ с ультрафиолетовым спектрофотометрическим детектором с помощью предлагаемого способа, который заключается в том, что анализ ведут в режиме линейного градиента концентрации ацетонитрила в подвижной фазе в течение анализа с использованием в качестве подвижной фазы смеси ацетонитрила с фосфатным буферным раствором, отличающегося тем, что, при анализе препарата жаропонижающего, антиаллергического действия, содержащего АК, парацетамол, фенилэфрина г/х и вспомогательное вещество, в течение анализа состав подвижной фазы изменяется от фосфатного буферного раствора с рН 3,0 до смеси ацетонитрила с фосфатным буферным раствором с рН 6,8 в соотношении 1:4 по объему.

Авторами данной заявки экспериментально установлено, что такая подвижная фаза, с одной стороны, обеспечивает оптимальную форму пика АК и ее отделение от соседних пиков, с другой - наблюдается полное разделение пика парацетамола с пиком вспомогательного вещества. Это объясняется тем, что вспомогательное вещество является также кислотой и при повышении рН происходит диссоциация его молекул. Диссоциированная форма кислот обладает меньшим удерживанием в связи с эксклюзионным эффектом, обусловленным взаимодействием с отрицательно заряженными диссоциированными силанольными группами сорбента (см., например, Influence of mobile phase acid-base equilibria on the chrornatographic behavior of protolytic compounds. Marti Roses, Elizabeth Bosch. J. chromatogr. A, 982 (2002) 1-30.).

Таким образом, в предлагаемом способе в одной инжекции совмещены как традиционные для анализа кислот условия (рН подвижной фазы < рК_кисл), обеспечивающие их перевод в молекулярную форму, так и противоположные (рН подвижной фазы > рК_кисл) для ионизации кислоты с соответствующим снижением удерживания образующейся формы. Дополнительно авторами было найдено, что для разделения пиков вспомогательного вещества и парацетамола достаточно установить конечное значение рН подвижной фазы, равным 4,7 (смесь ацетонитрила с фосфатным буферным раствором в соотношении 1:4 по объему без добавления щелочи). Однако, учитывая различие свойств хроматографических колонок, для обеспечения устойчивых результатов разделения было принято решение повысить это значение до 6,8 (рН 7÷8 - верхняя граница устойчивости традиционных сорбентов на основе силикагеля). Такой режим обеспечивает четкое разделение пиков всех действующих и вспомогательных веществ препарата (фиг.7).

Найденные авторами настоящей заявки условия анализа порошка «Максиколд» не являются заранее определенными и не вытекают с очевидностью из существующего уровня техники. Так, установленные ранее оптимальные условия анализа пяти - компонентного препарата «Пенталгин от простуды» оказались неприемлемыми для данного трех - компонентного. Для их поиска требовалось провести систематическое исследование, что и было выполнено в данной работе. Это позволяет утверждать, что предлагаемый способ обладает новизной и соответствующим изобретательским уровнем.

Способ осуществляется следующим образом: раствор испытуемого препарата и раствор рабочего стандартного образца (РСО) последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе с ультрафиолетовым (УФ) детектором и обращенно-фазовой хроматографической колонкой, заполненной сорбентом Zorbax SB C8, в режиме линейного градиента концентрации ацетонитрила в подвижной фазе в течение анализа с использованием в качестве подвижной фазы смеси ацетонитрила с фосфатным буферным раствором, с последующим расчетом содержания определяемых компонентов по площади пиков на хроматограммах испытуемого раствора и раствора рабочих стандартных образцов, отличающийся тем, что при анализе препарата жаропонижающего, антиаллергического действия, содержащего аскорбиновую кислоту, парацетамол, фенилэфрина гидрохлорид и вспомогательное вещество, в течение анализа состав подвижной фазы изменяется от фосфатного буферного раствора с рН 3,0 до смеси ацетонитрила с фосфатным буферным раствором с рН 6,8 в соотношении 1:4 по объему.

Способ иллюстрируется следующим примером.

Пример 1.

Количественное определение аскорбиновой кислоты, парацетамола и фенилэфрина г/х в порошке «Максиколд».

Для приготовления испытуемого раствора около 1,000 г (точная навеска) анализируемого порошка помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 10 мл 0,1% раствора Н₃РО₄ и 5 мл CH₃CN и перемешивают в течение 3 минут. Полученный раствор доводят до метки 0,1% раствором Н₃PO₄, перемешивают и фильтруют через гидрофильный мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (например, фирмы «Миллипор»), отбрасывая первые 5 мл фильтрата.

Для приготовления раствора РСО около 0,300 г парацетамола и 0,025 г АК (точные навески) помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл, добавляют 5,0 мл CH₃CN, 20 мл 0,1% раствора Н₃PO₄, 5,0 мл раствора РСО-2 и перемешивают до растворения веществ. Полученный раствор доводят до метки 0,1% раствором Н₃PO₄, перемешивают и фильтруют через гидрофильный мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (например, фирмы «Миллипор»), отбрасывая первые 5 мл фильтрата.

Для приготовления раствора РСО-2 около 0,080 г фенилэфрина г/х (точные навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 5 мл CH₃CN и 20 мл воды и перемешивают до растворения веществ. Полученный раствор доводят водой до метки и перемешивают.

По 5,0 мкл испытуемого раствора и раствора РСО последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-детектором и колонкой 4,6×150 мм с защитной предколонкой 4,6×12,5 мм, заполненными сорбентом Zorbax SB C8 с размером частиц 3,5 мкм в режиме линейного градиента с использованием в качестве подвижных фаз элюентов А (0,025 М фосфатный буферный раствор, рН которого доведен до 3,0 добавлением Н₃РО₄) и В (смесь СН₃CN и 0,025 М фосфатного буферного раствора, рН которого доведен до 6,8 добавлением КОН, в объемном соотношении 1:4). Получают не менее 3 хроматограмм каждого раствора.

Состав подвижной фазы в течение анализа изменяется по следующей программе:

Таблица 1Время, минЭлюент А, %Элюент В, %0,0100,00,010,00,0100,011,00,0100,012,0100,00,015,0100,00,0

Расход подвижной фазы 1,0 мл/мин. Длина волны детектирования - 216 нм.

Рассчитывают площади пиков определяемых компонентов и находят количество каждого компонента в анализируемом порошке по формуле:

,

где S_к и S_ст - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и РСО соответственно;

m_ст, m_с и m_н - массы стандарта определяемого вещества в растворе РСО, масса дозы порошка и масса навески порошка, взятой для приготовления испытуемого раствора, соответственно, в граммах.

В таблице 1 представлены результаты анализа порошка (опытные лабораторные работы) и их метрологические характеристики. Образцы соответствуют требованиям нормативной документации по содержанию действующих веществ, за исключением двух результатов содержания АК, превышающих верхний предел. Это объясняется преднамеренной избыточной загрузкой относительно нестойкой АК перед закладкой образцов на хранение. Воспроизводимость результатов анализа высокая.

Результаты анализа порошка «Максиколд» (опытные лабораторные работы).

Изобретение относится к аналитической химии, а именно, к способам определения количественного состава многокомпонентных лекарственных препаратов жаропонижающего, антиаллергического действия методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым спектрофотометрическим детектором и хроматографической колонкой, заполненной сорбентом Zorbax SB C8, в режиме линейного градиента концентрации ацетонитрила в подвижной фазе в течение анализа. В качестве подвижной фазы используют смесь ацетонитрила с фосфатным буферным раствором. Далее рассчитывают содержание определяемых компонентов по площади пиков на хроматограммах испытуемого раствора и раствора рабочих стандартных образцов. С целью эффективного разделения пиков всех действующих и вспомогательных веществ состав подвижной фазы в течение анализа изменяется от фосфатного буферного раствора с рН 3,0 до смеси ацетонитрила с фосфатным буферным раствором с рН 6,8 в соотношении 1:4 по объему. 2 табл., 7 ил.

Способ определения количественного состава многокомпонентного лекарственного препарата жаропонижающего, антиаллергического действия методом обращенно-фазовой ВЭЖХ с ультрафиолетовым спектрофотометрическим детектором и обращенно-фазовой хроматографической колонкой, заполненной сорбентом Zorbax SB C8, в режиме линейного градиента концентрации ацетонитрила в подвижной фазе в течение анализа, с использованием в качестве подвижной фазы смеси ацетонитрила с фосфатным буферным раствором, с последующим расчетом содержания определяемых компонентов по площади пиков на хроматограммах испытуемого раствора и раствора рабочих стандартных образцов соответственно, отличающийся тем, что при анализе препарата жаропонижающего, антиаллергического действия, содержащего аскорбиновую кислоту, парацетамол, фенилэфрина гидрохлорид и вспомогательное вещество, в течение анализа состав подвижной фазы изменяется от фосфатного буферного раствора с рН 3,0 до смеси ацетонитрила с фосфатным буферным раствором с рН 6,8 в соотношении 1:4 по объему.