Способ определения парацетамола Советский патент 1984 года по МПК G01N21/64 

а

СЛ1

С 4

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения парацетамола (п -ацетиламинофенола), и может быть применено для качественного и количественного определения этого соединения в биохимических, токсикохимических и фармацевтических исследованиях.

Известен нитрометрический способ количественного определения параиуетамола, основанные на его гидролизе до аминофенола с последующим титрованием нитритом натрия ij .

Недостатками способа являются низкая чувствительность (40 мкг/мл) и селективность, так как подобную реакцию даю все первичные ариламины. Продолжительность анализа 1,5 ч..

Наиболее близким к предлагаемому ло техниче.ской сущности и достигаемому результату является колориметрический метод определения парац тамола, заключающийся в нагревании водного раствора анализируемой пробы в присутствии кислоты, добавлении щелочного фенольного раствора при рН 10,5 и измерении через некоторое оптической плотности при 637 нм 2.j,

Однако известный метод также малоселективен и недостаточно чувствителен (ЗО мкг/л) , что не позволяет его использовать для определения парацетамола в биологическом материале, особенно при токсикологических исследованиях.

Целью изобретения является повьвиение чувствительности, и селективности определения парацетамола.

Поставленная цель достигается способом, заключающимся в том, что анализируемую пробу обрабатывают 20-25%-ным раствором гидроксида калия и хлороформом, взятыми в объемном соотношении 1: (3-4) с последующим нагреванием, добавлением гидроксида аммония и изменением интенсивности флуоресценции полученного раствора.

Метод основан на образовании флуоресцирующего соединения, спектр возбуждения флуоресценции которого лежит в пределах 300-380 JIM с максимумом 355 нм, а спектр излучения флуоресценции - в пределах 380560 нм с максимумом 498 нм.

Прямолинейная зависимость между интенсивностью флуоресценции и.концентрацией парацетамола 0,1 45 мкг/MJi (табл. l) . Оптимальная концентрация хлороформа, щелочи, времени назгревания, температуры представлены в табл. 2-6. Чувствительность предлагаемого способа 0,1 мкг/мл, а известного 30 мкг/мл.

Установлено,что подобной реакции не дают адалин, аймалин, аллопуринол,. амидопирин, амизил, ампициллин, анабазин, анестезин, апрессин, аскорбиновг1,я кислота, , ацетилсалициловая кислота, атропин, барбитал, бензомон, бензилпенициллин, бензоат натрия, бенкаин, бетазин, биссекурин, бромизовал, бруфен, бутадийн, галазолин, галоперидол, гипо0 тиазид, глауцин, гомфотин, грамицидин, дезопимон, дикумарин, дипиридонол, дипразин, дитимин, дроперидол, из амин, изоптин, канамицин., карбидин, кватерон, клофеллин, ко5 тарнйн, левомецитин, леворин, медирил, мепробамат, меркозолил, метазид, метилпреднизолон, метициллин, милурйт, NMсклерон, налорфин, нафтизин, неаМицин, никотинамид, новокаин,

0 норсульфазол, папаверин гидрохлорид, пармидин, пенициллин, пиридоксин, пиромекаин, преднизалон, про тионамид, резорцин, рибофлавин, . рифампицин, салазодиметоксин, сала5 зопиридазин, салюзид, седуксен,

стрептомицин, суксилер, сульфадимезин, сульфа,цил, танин, тетрациклин, тиамин бромид, тримекаин, трифтазин, .фенилин, фентанил, фенолQ фталеин, френолон, фтивазид, хинин, хлорокон, хлорицин, циквалон, цистеин, цитизин, элениум, эритромицин, этазол, этаминал натрия, этионамид и зуфиллин - соединения, относящиеся к различным органическим соединениям, различной структуры и действия-; что говорит Q достаточно высокой избирательности способа.

Пример 1. Качественное определение парацетамола. .

К 1-2 кг препарата мелкоизмельчанных таблеток прибавляют 2 мл дистиллированной воды, 0,5 МП 20%-ного гидроксида калия, 1,5 мл хлороформа и нагревают, на кипящей.водяной бане при 20 мин. Затем доводят юр 10 МП 25%-ным раствором гидроксида аммония. В ультрафиолетовом свете со светофильтром УФС-3, наблюдают зеленую флуоресценцию.

П р и м е р. 2. Количественное определение парацетамола в таблет|ках по О,.2 г.

Точную навеску (0,1 г)мелкоизмельченных таблеток помещают в мерную колбу на 100 мл. Добавляют 70-80 мя этилового спирта 9б-ного, тщательно встряхивают и доводят до метки между э иловым спиртом,10 мл полученного раствора переносят в колбу на 100 мл и доводят до метки 9б-ным этиловым спиртом. К 1 мл данного раствора прибавляют 0,5 мл 20%-ного гидроксида калия, 1,5 мл хлороформа и нагревают на водяной бане при 5 90 С 20 мин, после чего доводят объем до 10 мл 25%-ным раствором гидроксида аммония и измеряют интенсивность флуоресценции по отношению кстандартному раствору с содержанием парацетамола 10 мкг/мл. Результаты количественного опред ления парацетамола в таблетках по 0,2 г представлены в табл 7. .Пример 3, Количественное определение парацетамолу в лекарственном препарате Скутамил G,содерж тем в одной таблетке 6,1 г парацетамола. Точную навеску .(0,1 г) мелкоиэмельченных таблеток помещают в мерную колбу на 100 МП, Добавляют 7080 мл этилового спирта 96 -ного, тщ тельно встряхивают и доводят до метки этиловым спиртом, 10 полученного раствора переносят в колбу f 100 Мл и доводят до метки этиловым спиртом. К 1 МП да ного раствора прибавляют 0,5 мл 20%-ного гидооксида калия, 1,5 мл хлороформа и нагревают на водяной бане при 90 С 20 мин, после чего до водят объем до 10 мл 25%-ным.гидроксидом аммония и измеряют интенсивность флуоресценции по отношению к стандартному раствору с содержанием парацетамола 10 мкг/мл, Резуль таты количественного определения па рацетамола в таблетках Скутамил С представлены в табл. 8, Пример 4. количественное ; определение парацетамола в биологических жидкостях (моче и крови). К 1 мл сыворотки крови или мочи прибавляют 5 мл этилацетата, встря.хивают 3 мин. Центрифугируют при 3000 об/мин 3 мин и слой этилацетата переносят -в выпарительную Чс1шк Экстрагирование повторяют еще раз, Остаток выпаривают до объема 0,1 мл ,0,05-0,1 мл данного раствсфа перено сят на пластинку Силуфол-254, . , .- г Пластинку с нанесенной каплей высушивают и помещают в камеру с системой растворителей хлороформ:диоксан:ацетон 80:10:10 и хроматографируют восходящим методом. После рлсушивания на воздухе в течение 5 мин в ультрафиолетовом свете с длиной волны 254 нм устанавливают локализацию пятна парацетамола. Пятно с Rf 0,27, отмеченное по стандарту парацетамола, количественно переносят в пробирку, прибавляют 1 мл дистиллированной водл 0,5 мл 20%-ного раствора гидроксида калия, 1,5 мл хлороформа и нагревают на водяной банепри 90С 20 мин. После этого раствор охлаждают до комнатной температуры и доводят объем до 10 мл 25%-ным раствором гидроксида аммония. Измеряют интенсивность флуоресценции по отношению к стандартному раствору с содержанием 0,5} 1,0} 5,0} 10 мкг/мл парацетамола. Пример 5, Количественное определение парацетамола в воздухе рабочей зоны производственных помещений. Фильтры из перхлорвинилевых волокон после продувки исследуемого воздуха при определении парацетамола в воздухе рабочей зоны проиэводственных помещений переносят в химические стаканы. Туда же прибавляют 5 мл этилового спирта, К 1 :мл. данного раствору прибавляют 0,5 мл J20%-Horo раствора гидроксида калия, 1,5 МП хлороформа и нагревают на водяной бане при мин. Затем охлаждают до комнатной температуры и доводят объем до 10 мл раствором гидроксида аммония, Измерения проводят против стандартных растворов, содержащих 1,0} 5,0} 10,0} 25,0 мгк/мл парацетамола. .Т а б л и ц а 1

Продолжение табл. 1

СПОС.ОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПАРАЦЕТАМОЛА С использованием о6ра€откц химическим реагентом, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повышения чувствительности и селективности способа, обрабатывают анализируемую пробу 20-25%-йым раствором гидроксида калия и хлорофор..Мом, взятыми а объемном соотношении 1:

Зависимость интенсивности флуоресценции от количества хлороформа (концентрация парацетамола 10 мкг/мл время нагревания 20 мин} дана в табл. 2. Таблица 2

Зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации гидроксида калия (концентрация парацетамола 10 мкг/мц, хлороформа 1,5 мл, время нагревания 20 мин) представлена в табл. 3. ,

ТаблицаЗ

Относительная интенсивность флуоре сценции

5

40 48 46 56 56

10 15 20 25

Зависимость интенсивности флуоресценции от времени нагревания на водяной бане при концентрации парацетамола 10 мкг/мл, хлороформа 1,5 мл и 20%-нрго гидроксида калия 0,5 мл показана в табл. 5

Т а

лица Зависимость интенсивности флуоресценции от количества 20%-ного гидроксида калия (концентрация парацетамола 10 мкг/мл, хлороформа 1,5 мл, время нагревания 20 мин приведена в табл. 4 Таблица 4

71065347

Продолжение табл. 5

рацетамопа 10 мкг/мп, хлороформа 1,5 мл, 20%-ного гидроксида калия 0,5 мл и времени нагревания 20 мин| дана в табл. 6.

Т а б л и ц а 6

Температура,С

Относительная интенсивность флуоре сценцин

58 60 76 80 74

60 70 80 90

10 а

, Результаты количественного определения парацетамола в таблетках по 0,2 г приведены в табл. 7.

Т а б л и ц а 7 .

Продолжение табл. 7

Результаты количественного определения парацетамола в лекарственном препарате Скутамил С, содержащем в одной таблетке 0,1 парацетамола, показаны в табл. 8.

т -а б л и ц а 8

20

25

0,1000

0,105 0,105 Q 0,1000

X 0,106 .0,105 0,1000

6 0,0016 0,105 0,1000

5

бх 0,0005 0,105 0,1000

Е 0,0011 0,105 0,1000 0,108 0,1000

0

А 1,03% 0,108 0,1000 0,108 0,1000