СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОСТАВА ТАБЛЕТОК "ПЕНТАЛГИН ФС" Российский патент 2008 года по МПК G01N33/15 

Изобретение относится к высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), а именно к способам определения количественного состава многокомпонентных лекарственных препаратов жаропонижающего, аналгезирующего, противопростудного действия, и может быть использовано в практике контрольно-аналитических лабораторий фармацевтических предприятий и аптечной сети. Способ относится к числу массовых.

Многокомпонентные лекарственные препараты широко распространены в медицинской практике. В состав препарата жаропонижающего, аналгезирующего, противопростудного действия «Пенталгин ФС» входят наряду с анальгином (0,3 г), парацетамолом (0,3 г), кофеином (0,05 г) наркотические и сильнодействующие вещества - кодеина фосфат (0,008 г) и фенобарбитал (0,01 г). В связи с этим проблема обеспечения и контроля качества этого препарата чрезвычайно актуальна, а ее успешное решение невозможно без эффективных способов определения его количественного состава. В то же время задача разработки таких способов очень сложна, что обусловлено и комплексным составом анализируемого препарата, и большой разницей в содержании некоторых компонентов. Так, в таблетках «Пенталгин ФС» содержание анальгина превышает количество кодеина фосфата в 37 раз, а фенобарбитала - в 30 раз. Анализ таблеток затруднен также нестабильностью анальгина в водно-органических растворах. По этим причинам одновременное обнаружение и количественное определение всех действующих компонентов препарата является сложной задачей. Этим можно объяснить тот факт, что, несмотря на бурное развитие в последние годы новейших методов анализа сложных лекарственных препаратов и, прежде всего, ВЭЖХ, в научной литературе не описан способ количественного анализа таблеток «Пенталгин ФС».

Известен способ определения количественного состава сложных лекарственных препаратов, содержащих пропифеназон, методом обращенно-фазовой ВЭЖХ (Вергейчик Е.Н., Онегова Н.С. ВЭЖХ в анализе сложных лекарственных препаратов, содержащих пропифеназон. Фармация. - 2001. - Т.50, №3. - С.24-26). Авторы публикации предлагают способ определения количественного состава таблеток «Каффетин», содержащих 0,250 г парацетамола, 0,210 г пропифеназона, 0,050 г кофеина и 0,010 г кодеина фосфата в одной таблетке. Поскольку в анализируемых таблетках содержание кодеина фосфата по отношению к пропифеназону и парацетамолу в 21-25 раз меньше, разработчики проводят анализ в три стадии. На первой стадии раствор испытуемых таблеток и раствор рабочих стандартных образцов (РСО) хроматографируют в изократическом режиме с использованием в качестве подвижной фазы (ПФ) смесь ацетонитрил - вода - диэтиламин (3:2,2:0,2) и определяют парацетамол (время удерживания 3,08 мин), кофеин (4,0 мин) и пропифеназон (5,73 мин). На второй стадии раствор испытуемых таблеток в воде подкисляют 10% серной кислотой до рН 2,0, трижды проводят экстракцию порциями по 10 мл этилацетата, а экстракты, содержащие парацетамол, кофеин и пропифеназон, отбрасывают. На третьей стадии к водному раствору, содержащему кодеина фосфат, добавляют 25% раствор аммиака до рН 9-10 и трижды экстрагируют кодеин порциями по 10 мл хлороформа. Объединенные хлороформные экстракты выпаривают, сухой остаток растворяют в ацетонитриле и в полученном растворе определяют кодеин при описанных выше условиях хроматографирования (время удерживания 4,41 мин). Элюируемые вещества детектируют при 238 и 276 нм.

Недостатками способа являются его многостадийность, и, как следствие, трудоемкость, длительность и неудовлетворительная точность определения кодеина фосфата (степень извлечения кодеина из таблеток, по данным авторов способа, 89-93%).

Известен также способ определения количественного состава таблеток «Спазмовералгин нео», содержащих бромизовал (0,250 г), парацетамол (0,150 г), кофеин (0,050 г), папаверина гидрохлорид (0,030 г), фенобарбитал (0,020 г), кодеина фосфат (0,008 г), эфедрина гидрохлорид и атропина сульфат (содержание в таблетке двух последних компонентов в публикации не указано), методом обращенно-фазовой ВЭЖХ в изократическом режиме элюирования с использованием колонки, заполненной сорбентом с привитыми нитрильными группами, подвижной фазы (ПФ) состава ацетонитрил - 0,05 М фосфатный буферный раствор (рН 4,0) в соотношении 15:85 и детектирования при 230 нм (Ларионова С.Г., Дементьева Н.Н., Нечаева Е.Б., Назаренко П.В., Нестерова Г.А. Оптимизация условий анализа таблеток сложного состава аналгезирующего и спазмолитического действия. Фармация. - 2002. - Т.51, №1. - С.16-19). В этой работе авторы одновременно определяют бромизовал, кодеина фосфат (соотношение содержаний 31:1), парацетамол, кофеин, фенобарбитал и папаверина гидрохлорид. Недостаток способа связан с особенностями изократического элюирования и заключается в неудовлетворительном разрешении пиков веществ, элюирующихся из колонки первыми (в интервале коэффициентов емкости k от 0,4 до 1,4 элюируются 7 веществ) и относительно высоком удерживании пика папаверина, элюирующегося последним (k=7,0). Неудовлетворительное разделение пиков определяемых веществ отрицательно влияет и на точность их количественного определения.

Наиболее близким к заявляемому изобретению по составу анализируемых препаратов, поставленной задаче, техническому решению и достигаемьм результатам является «Способ количественного анализа многокомпонентных лекарственных препаратов жаропонижающего, аналгезирующего, противопростудного действия» (Голубицкий Г.Б., Будко Е.В., Покровский М.В., Прохода Е.Ф. и Захарова Е.В. Патент RU 2267115 С2, 27.12.2005), в котором анализ проводят методом обращенно-фазовой ВЭЖХ в режиме линейного градиента, наклон и продолжительность которого определены свойствами компонентов анализируемого препарата. В качестве ПФ используют смеси ацетонитрила с буферным раствором (0,025 М раствор калия фосфата однозамещенного - КН₂PO₄, рН которого доводят до 3,0 добавлением концентрированной ортофосфорной кислоты); смеси ацетонитрила с водой; воды. В этом способе улучшение разделения анальгина, кодеина и кофеина основано на хроматографических свойствах кодеина: с применяемой в работе обращенной фазы Nova-Pak С 18 кодеин не элюируется смесями ацетонитрил - вода. В соответствии с этим хроматографическим свойством кодеина на начальном этапе градиента вводится ПФ, содержащая только ацетонитрил и воду, а фосфатный буферный раствор с рН 3,0 вводится в ПФ после выхода всех пиков, кроме кодеина. Недостатком способа является нестабильность хроматографических условий в течение одного анализа, что обусловлено изменением рН и ионной силы ПФ и снижает воспроизводимость количественных результатов.

Задачей настоящего изобретения является разработка одностадийного способа определения количественного состава таблеток «Пенталгин ФС», свободного от указанного недостатка.

Поставленная задача достигается методом обращенно-фазовой ВЭЖХ с помощью предлагаемого способа, который заключается в том, что в качестве ПФ используют смесь ацетонитрила с фосфатным буферным раствором, отличающегося тем, что анализ проводят в изократическом режиме при концентрациях ацетонитрила и калия фосфата однозамещенного в подвижной фазе 4÷6% (по объему) и 0,09÷0,12% (весо-объемных) соответственно.

Авторами данной заявки экспериментально установлено, что такой состав ПФ обеспечивает оптимальное разделение анальгина, парацетамола, кофеина, фенобарбитала, продукта разложения анальгина и кодеина (фиг.1). Увеличение содержания калия фосфата 1-замещенного в ПФ до 0,17% (весо-объемных) ухудшает разделение (фиг.2), а ее снижение до 0,08% (весо-объемных) - увеличивает время удерживания пика кодеина с одновременным возрастанием его «хвоста», что снижает точность расчета его площади (фиг.3). По этим данным рабочий интервал концентраций калия фосфата 1-замещенного в ПФ - 0,09÷0,12% (весо-объемных), так как нецелесообразно увеличивать концентрацию выше 0,12% (весо-объемных) в целях экономии реактива и снижения отрицательного влияния соли на хроматографическую колонку и коммуникации прибора.

Оптимальную концентрацию ацетонитрила установили по разрешению «критической пары» пиков: кофеин - фенобарбитал. Снижение концентрации до 4% (по объему) ухудшает разрешение (фиг.4); при снижении до 3% (по объему) разрешение еще хуже (фиг.5). При возрастании до 5% (по объему) разрешение улучшается (фиг.6), но дальнейшее увеличение до 6% (по объему) практически не улучшает картину (фиг.7). Таким образом, рабочий интервал концентраций ацетонитрила в ПФ - 4÷6% (по объему).

По отношению к указанным результатам следует отметить, что широко изучена зависимость удерживания разнообразных классов веществ от концентрации ацетонитрила в подвижной фазе и, следовательно, прогнозирование соответствующих закономерностей можно отнести к очевидным. Однако, в рассматриваемой системе эта зависимость имеет аномальный характер: как правило, снижение концентрации ацетонитрила улучшает разрешение, а в данном случае - наооборот. Кроме того, зависимость хроматографических свойств веществ от концентрации солей в подвижной фазе, используемая нами при разработке заявляемых способов, исследована значительно хуже, чем влияние ацетонитрила. Эта зависимость значительно сложнее и имеет индивидуальный характер для каждого отдельного вещества. Так, при увеличении концентрации калия фосфата 1-замещенного в ПФ удерживание кодеина снижается, в напроксена - возрастает. Поэтому предсказания в соответствии с этой зависимостью не носят очевидный характер, тем более, когда речь идет о разделении группы веществ, как в рассматриваемом нами случае.

Указанные факты позволяют утверждать, что предлагаемый способ обладает новизной и соответствующим изобретательским уровнем.

Способ осуществляется следующим образом. Раствор испытуемого препарата и раствор рабочего стандартного образца (РСО) последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе с ультрафиолетовым (УФ) детектором и обращенно-фазовой хроматографической колонкой в изократическом режиме элюирования смесью ацетонитрила (4÷6% по объему) с водным раствором калия фосфата однозамещенного (0,09÷0,12% весо-объемных).

Способ иллюстрируется следующим примером.

Количественное определение анальгина, парацетамола, кофеина, кодеина фосфата и фенобарбитала в таблетках «Пенталгин ФС»

Для приготовления испытуемого раствора около 0,160 г (точная навеска) тщательно растертых таблеток и 0,12 г натрия сульфита хч помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 10 мл воды и перемешивают в течение 3 минут. Прибавляют 5 мл ацетонитрила и перемешивают еще 3 мин. Полученный раствор доводят до метки водой, перемешивают и фильтруют через гидрофильный мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (например, фирмы «Миллипор»), отбрасывая первые 5 мл фильтрата.

Для приготовления раствора РСО около 0,060 г анальгина, около 0,060 г парацетамола (точные навески) и 0,12 г натрия сульфита хч помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 10 мл воды и перемешивают. Прибавляют 5 мл ацетонитрила и перемешивают до растворения веществ. Прибавляют 5,0 мл раствора кофеина, кодеина фосфата и фенобарбитала, доводят водой до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм, отбрасывая первые 5 мл фильтрата.

Для приготовления раствора РСО-2 около 0,2000 г кофеина, около 0,0320 г кодеина фосфата, высушенных до постоянной массы при температуре 105°С, и около 0,0400 г фенобарбитала (точные навески) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 10 мл воды и 5 мл ацетонитрила и перемешивают до растворения веществ. Доводят водой до метки и перемешивают. Срок годности раствора 7 суток.

По 5,0 мкл испытуемого раствора и раствора РСО последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-детектором и колонкой 3,9×150 мм с сорбентом Nova-Pak CN HP с размером частиц 4 мкм в изократическом режиме с использованием в качестве ПФ смеси ацетонитрила 5% (по объему) и водного раствора калия фосфата однозамещенного с концентрацией 0,1% (весо-объемных). Получают не менее 3 хроматограмм каждого раствора.

Расход подвижной фазы 1,0 мл/мин. Длина волны детектирования 212 нм.

Рассчитывают площади пиков определяемых компонентов и находят количество каждого компонента в анализируемых таблетках по формуле

где S_к и S_ст - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и РСО соответственно;

m_ст, m_с и m_н - массы стандарта определяемого вещества в растворе РСО, средняя масса таблетки и масса навески растертых таблеток, взятой для приготовления испытуемого раствора, соответственно, в граммах.

Результаты анализа таблеток (промышленные серии) представлены в таблице 1. В таблице 2 представлены сравнительные результаты анализа, полученные по градиентной (прототип) и изократической методикам.

Таблица 1
Результаты анализа таблеток «Пенталгин ФС»КомпонентыСодержание в одной таблетке, г (n=9; Р=0,95)Норма по НДX_срSS_хсрΔХε, %с.21052004Анальгин0,28500-0,315000,294400,002940,000980,002350,80Парацетамол0,28500-0,315000,296090,001610,000540,001300,44Кофеин0,04675-0,053250,049650,000620,000210,000501,01Кодеина фосфат0,00720-0,008800,008180,000060,000020,000050,61Фенобарбитал0,00900-0,011000,010050,000130,000040,000101,00с.22052004Анальгин0,28500-0,315000,288910,001820,000610,001460,51Парацетамол0,28500-0,315000,291180,001600,000530,001270,44Кофеин0,04675-0,053250,048690,000400,000130,000310,64Кодеина фосфат0,00720-0,008800,008000,000060,000020,000050,62Фенобарбитал0,00900-0,011000,009610,000100,000030,000070,73с.23052004Анальгин0,28500-0,315000,288350,001570,000520,001250,43Парацетамол0,28500-0,315000,290210,000930,000310,000740,25Кофеин0,04675-0,053250,049030,000680,000230,000551,12Кодеина фосфат0,00720-0,008800,008030,000090,000030,000070,87Фенобарбитал0,00900-0,011000,009530,000020,000010,000020,21

Таблица 2
Результаты анализа таблеток «Пенталгин ФС» (промышленная серия 2004 г.), полученные по а) градиентной б) изократической методикамКомпонентыСодержание в одной таблетке, г (n=9; Р=0,95)Норма по НДХ_срSS_xсрΔХε, %Анальгин0,2850-0,3150а) 0,29330,00100,00030,00070,24б) 0,29440,00290,00100,00240,82Парацетамол0,2850-0,3150а) 0,29460,00030,00010,00020,07б) 0,29610,00040,00010,00020,07Кофеин0,04675-0,05325а) 0,050430,000450,000150,000350,69б) 0,049650,000620,000210,000501,01Фенобарбитал0,0090-0,0110а) 0,009750,000170,000060,000141,44б) 0,010050,000130,000040,000090,90Кодеина фосфат0,0072-0,0880а) 0,008250,000320,000110,000263,15б) 0,008180,000060,000020,000050,61

Изобретение относится к высокоэффективной жидкостной хроматографии, а именно к способам определения количественного состава многокомпонентных лекарственных препаратов жаропонижающего, аналгезирующего, противопростудного действия, и может быть использовано в практике контрольно-аналитических лабораторий фармацевтических предприятий и аптечной сети. С целью одновременного количественного определения всех компонентов препаратов анализ проводят в обращенно-фазовом изократическом режиме при концентрациях ацетонитрила и калия фосфата однозамещенного в подвижной фазе 4÷6% (по объему) и 0,09÷0,12% (весо-объемных) соответственно. Изобретение обеспечивает увеличение воспроизводимости количественных результатов при оптимальном разделении пиков анальгина, парацетамола, кофеина, фенобарбитала, продукта разложения анальгина и кодеина при одностадийности способа. 7 ил., 2 табл.

Способ определения количественного состава многокомпонентного лекарственного препарата жаропонижающего, аналгезирующего, противопростудного действия, содержащего анальгин, парацетамол, кофеин, кодеин фосфат, фенобарбитал, заключающийся в том, что определение проводят методом обращенно-фазовой ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектором в изократическом режиме с использованием в качестве подвижной фазы смеси ацетонитрила с водным раствором калия фосфата однозамещенного при концентрациях ацетонитрила и калия фосфата однозамещенного в подвижной фазе 4÷6% (по объему) и 0,09÷0,12% (весо-объемных) соответственно.