СРЕДСТВО РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2009 года по МПК A61K36/185 A61P39/06 

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и может быть использовано для лечения и профилактики заболеваний, где основным патогенетическим фактором является нарушение процессов перекисного и свободнорадикального окисления, особенно липидов. Синдром пероксидации лежит в основе патогенеза практически всех заболеваний, в частности ишемической болезни сердца, инфаркта миокарда, атеросклероза, инсульта, токсических поражений печени, онкологических заболеваний.

Известны фармакологические препараты, являющиеся синтетическими аналогами природных антиоксидантов (α-токоферол, аскорбиновая кислота, пропиловый, октиловый и додециловый эфиры галловой кислоты), и большая группа искусственных антиокислителей на основе серосодержащих и фенольных соединений (дибунол, бутилоксианизол) (И.В.Сорокина и др. Роль фенольных антиоксидантов в повышении устойчивости органических систем к свободнорадикальному окислению. - Новосибирск, 1997, с.20-26). Перечень фармакопейных средств, используемых как антиоксиданты, весьма ограничен - это лишь аскорбиновая кислота (причем в единственной форме - L аскорбата), витамин Е (и, как правило, только α-токоферол), отдельные биофлавоноиды- кверцетин, рутин. Синтетические фенолы не нашли широкого применения в лечебной практике. Отчасти это связано с наличием у некоторых из них побочных действий и определенной токсичности.

Перспективными антиоксидантами являются препараты, изготовленные из природного сырья. Их действие обусловлено синергическим эффектом входящих в них биологически активных соединений.

Аналогами изобретения являются препараты на основе природных флавоноидов: рутин, кверцетин, пикногенол, кемпферол, диквертин. Известны такие их свойства, как капилляропротекторные, гиполипидемические, кардиотоноческие, гепатопротекторные. Механизм действия заключается в стабилизации клеточных и субклеточных мембран, обусловленной выраженными антиоксидантными свойствами биофлавоноидов за счет акцептирования радикальных и ионрадикальных частиц (регулируют скорость реакций перекисной деструкции липидной фракции мембран) (Ю.Ю.Гичев, Ю.П.Гичев Антиоксиданты для профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний // Руководство по биологически активным пищевым добавкам. - М.: «Триада», 2001. - С.86).

Наиболее близким аналогом является 5% водный экстракт из побегов багульника (патент RU №2302252, 2007 г.).

Задачей изобретения является расширение арсенала средств антиоксидантного действия и области применения препаратов из травы первоцвета весеннего.

Технический результат при использовании изобретения - получение нового средства с выраженным антиоксидантным действием.

Указанный технический результат достигается за счет применения густого экстракта из травы первоцвета весеннего (Primula veris L.) в качестве антиоксидантного средства.

Сущность изобретения заключается в применении густого экстракта из травы первоцвета весеннего (Primula veris L.) в качестве антиоксидантного средства.

Известны следующие фармакологические свойства препаратов из первоцвета: отхаркивающее, потогонное, мочегонное, спазмолитическое, седативное, противовоспалительное. Отмечена высокая антимикробная активность препаратов из первоцвета. Растение является богатым источником поливитаминов (В.К.Лавренов, Г.В.Лавренова. Важнейшие лекарственные растения. - Донецк: «Сталкер», 2004, с.324-325).

Данных об антиоксидантном воздействии препаратов из первоцвета в доступной научно-медицинской и патентной литературе не обнаружено.

Приготовление густого экстракта производят следующим образом: 100 г растительного сырья заливают 1000 мл 70% раствора этилового спирта, настаивают трое суток при комнатной температуре в экстракторе, процесс мацерации повторяют трижды. Полученные водно-спиртовые настойки объединяют, испаряют на роторном испарителе под вакуумом. Далее доводят до состояния густого экстракта в выпарительных чашах в сушильном шкафу при температуре 60°С.

Густые экстракты - это концентрированные извлечения из растительного сырья, сгущенные путем частичного или полного удаления экстрагента. Густые экстракты - вязкие массы, содержащие не более 25% влаги (Погорелов В.И. и др. Фармацевтическая технология. - Ростов-на-Дону: изд. «Феникс», 2002, с.426-428).

На фиг.1 изображена запись типичной картины хемилюминесценции модельной системы "Цитрат-фосфат-люминол" (активные формы кислорода) без добавления фитопрепарата (контрольный образец).

На фиг.2 изображена запись типичной картины хемилюминесценции модельной системы "Желточные липопротеиды" (перекисное окисление липидов) без добавления фитопрепарата (контрольный образец).

На фиг.3 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из травы первоцвета весеннего на хемилюминесценцию модельной системы "Цитрат-фосфат-люминол" (доза ФП 0,5 мг).

На фиг.4 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из травы первоцвета весеннего на хемилюминесценцию модельной системы "Цитрат-фосфат-люминол" (доза ФП 1 мг).

На фиг.5 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из травы первоцвета весеннего на хемилюминесценцию модельной системы "Цитрат-фосфат-люминол" (доза ФП 2 мг).

На фиг.6 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из травы первоцвета весеннего на хемилюминесценцию модельной системы "Цитрат-фосфат-люминол" (доза ФП 3 мг).

На фиг.7 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из травы первоцвета весеннего на хемилюминесценцию модельной системы "Цитрат-фосфат-люминол" (доза ФП 5 мг).

На фиг.8 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из травы первоцвета весеннего на хемилюминесценцию модельной системы "Цитрат-фосфат-люминол" (доза ФП 10 мг).

На фиг.9 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из травы первоцвета весеннего на хемилюминесценцию модельной системы " Желточные липопротеиды " (доза ФП 0,05 мг).

На фиг.10 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из травы первоцвета весеннего на хемилюминесценцию модельной системы " Желточные липопротеиды " (доза ФП 1 мг).

На фиг.11 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из травы первоцвета весеннего на хемилюминесценцию модельной системы " Желточные липопротеиды " (доза ФП 2 мг).

На фиг.12 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из травы первоцвета весеннего на хемилюминесценцию модельной системы " Желточные липопротеиды " (доза ФП 3 мг).

На фиг.13 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из травы первоцвета весеннего на хемилюминесценцию модельной системы " Желточные липопротеиды " (доза ФП 5 мг).

На фиг.14 изображена запись типичной картины влияния густого экстракта из травы первоцвета весеннего на хемилюминесценцию модельной системы " Желточные липопротеиды " (доза ФП 10 мг).

Метод исследования основан на регистрации хемилюминесценции биологического материала с использованием аппаратно-программного комплекса ХЛМ-003. Комплекс состоит из портативного хемилюминомера, процессорного блока и монитора.

Для оценки влияния густого экстракта из травы первоцвета весеннего на процессы свободнорадикального перекисного окисления липидов использовали модельные системы. Для их приготовления использовали фосфатно-солевой буферный раствор следующего состава: 20 мМ КН₂РО₄, 105 мМ KCl (рН 7,45). Инициировали процесс добавлением 1 мл соли FeS0₄ (конечная концентрация ионов Fe²⁺ в среде инкубации составила 2,5 мМ).

Были созданы следующие модельные системы:

1) система, где имитируется генерация активных форм кислорода (АФК) - на основе фосфатно-солевого буферного раствора с цитратом натрия (2,5% раствор) с добавлением люминола (10^-5 М), который резко повышает активность свечения;

2) система, где протекают реакции перекисного окисления липидов, состоящая из суспензии желточных липопротеидов, обладающая высокой окисляемостью.

На исследование ХЛ отбирали 1 мл пробы (20 мг/мл белка), разводили в 19 мл охлажденного буфера с цитратом натрия); растворы ФП добавляли в исследуемую модельную систему за 1 мин до введения FeSO₄. В качестве контроля служили модельные системы без добавления фитопрепарата (в тех же объемах добавляли физиологический раствор).

В 20 мл модельных систем вносили 1% растворы густого экстракта в различных дозах (0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,5 и 1,0 мл, что в пересчете на густой экстракт соответствует: 0,5 мг; 1 мг; 2 мг; 3 мг; 5 мг и 10 мг). Число опытов для каждой модельной системы составляло 6.

Оценивали интегральный показатель хемилюминесценции светосумму свечения, которая выражалась в условных единицах (1 у.е.=3.06×10⁵ квантов в сек). Результаты исследований подвергались статистической обработке методом критерия Фишера-Стьюдента. Достоверными считались различия при р <0,05; 0,001. Показатели выражены в процентах от контрольного значения (табл.).

Анализ представленных в таблице и фиг.3-14 результатов показывает, что при добавлении в модельные системы, имеющие различный антиоксидантный статус, 1% раствора густого экстракта из травы первоцвета весеннего происходит угнетение основного параметра хемилюминесценции - светосуммы свечения. Во всех модельных системах отмечался статистически значимый антиоксидантный эффект при введении 1% раствора экстракта во всех дозах по сравнению с контрольными образцами, при этом с увеличением доз антиоксидантный эффект усиливался.

Таким образом, на основании полученных результатов следует, что в различных модельных системах густой экстракт из травы первоцвета весеннего оказывал прямое антиоксидантное действие, что обосновывает применение густого экстракта из травы первоцвета в качестве эффективного антиоксидантного средства для профилактики и лечения свободнорадикальных патологий.

Таблица.Анализ антиоксидантного действия густого экстракта из травы первоцвета весеннего на хемилюминесценцию модельных системДоза 1% раствора густого экстракта (количество сухого вещества мг)Модельная система
Цитрат-фосфат-люминолМодельная система
Желточные липопротеиды0,05 мл (0,5 мг)106,58%±1,57%**85,99±3,99%**0,1 мл (1 мг)96,12±2,25%**79,34±4,36%**0,2 мл (2 мг)68,39±1,39%**75,13±4,94%*0,3 мл (Змг)67,81±1,7%**72,93±3,91%**0,5 мл (5 мг)65,25±1,72%**46,65±1,99%**1 мл (10 мг)74,94±1,02%**26,57±0,55%**Контроль (модельные системы без ФП100±1,24%**100±0,50%**

Результаты (светосумма свечения) выражены в процентах от контрольных образцов.

Наличие статистически достоверного различия между контролем и опытом (* р<0,05; ** р<0,001).

Изобретение относится к фармакологии и может быть использовано для лечения и профилактики заболеваний, где основным патогенетическим фактором является нарушение процессов перекисного и свободнорадикального окисления, особенно липидов. В качестве антиоксидантного средства предложен густой экстракт травы первоцвета весеннего (Primula veris L.). Средство расширяет арсенал лекарственных средств для профилактики и лечения свободнорадикальных патологий. 14 ил., 1 табл.

Применение густого экстракта травы первоцвета весеннего (Primula veris L.) в качестве антиоксидантного средства.