СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ НООТРОПНЫМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 2009 года по МПК A61K36/28 A61P25/28 

Изобретение относится к медицине, конкретно к клинической фармакологии, и может быть использовано для фармакологической коррекции заболеваний ЦНС и касается лекарственных средств, обладающих ноотропным действием, получаемых из растительного сырья.

Применяемые для лечения данных заболеваний синтетические лекарственные средства имеют недостаточную терапевтическую эффективность, обладают рядом побочных эффектов, ограничивающих возможность их применения, особенно в условиях непрекращающейся трудовой деятельности [1]. Фитопрепараты могут сыграть существенную роль в решении этой проблемы.

Наиболее близким к предлагаемому решению является сухой экстракт корня шлемника байкальского Scutellaria baicalensis Georgi, обладающий ноотропным действием (прототип) [2].

Задачей данного изобретения является расширение арсенала средств защиты ЦНС, обладающих ноотропным действием, получаемых из растительного сырья.

Поставленную задачу решают применением в качестве средства, обладающего ноотропным действием, высушенных измельченных надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia), а также водных и водно-этанольных экстрактов надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia).

Новым является то, что впервые в качестве средства, обладающего ноотропным действием, используют высушенные измельченные надземную и подземную части видов рода альфредия (Alfredia), водные и водно-этанольные экстракты надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia).

В народной медицине альфредию поникшую (Alfredia cernua Cass.) используют при нервных заболеваниях, в качестве тонизирующего и болеутоляющего средства [3]. Ранее нами [4] обнаружена антиоксидантная активность экстрактов надземной и подземной частей альфредии поникшей (Alfredia cernua Cass.). В литературе отсутствуют данные о применении надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia), экстрактов надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia) в качестве средства, обладающего ноотропным действием.

Использование высушенной и измельченной надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia), экстрактов надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia) по предлагаемому назначению стало возможным благодаря выявлению экспериментально его новых свойств, а именно способности нормализовать функции ЦНС за счет ноотропного действия.

Новое свойство обнаружено в результате проведенного экспериментального изучения ноотропного действия высушенных измельченных надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia), водных и водно-этанольных экстрактов (25%, 40%, 70%, 95%) надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia).

Фармакологические исследования выполняли на белых беспородных крысах-самках массой 250-350 г. Все животные 1 категории (конвенциональные линейные крысы) получены из коллекционного фонда лаборатории экспериментального биологического моделирования ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН. Эксперименты проводили в осенне-зимний период. Работы в рамках экспериментальных методик выполняли с 10 ч утра и заканчивали к 15 ч. Животных содержали в виварии на обычном рационе кормления при свободном доступе к воде и пище (за исключением тех случаев, где иные условия оговариваются особо). Умерщвление животных осуществляли передозировкой эфирного наркоза.

Фармакологические эффекты высушенных измельченных надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia), экстрактов надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia) оценивали по влиянию на обучение и память при выработке и воспроизведении сложного условного питьевого рефлекса у нормальных животных в «Т-образном лабиринте».

Отличительные признаки проявили в заявляемой совокупности новые свойства, явным образом не вытекающие из уровня техники в данной области и неочевидные для специалиста. Впервые установлено, что в качестве средства, обладающего ноотропным действием, можно использовать высушенные измельченные надземную и подземную части видов рода альфредия (Alfredia), экстракты надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia).

Идентичной совокупности признаков не обнаружено в патентной и научно-медицинской литературе.

Предлагаемое средство с успехом может быть использовано в практическом здравоохранении для коррекции заболеваний ЦНС.

Исходя из вышеизложенного следует считать предлагаемое изобретение соответствующим условиям патентоспособности «новизна», «изобретательский уровень», «промышленная применимость».

Изобретение будет понятно из следующего описания.

Изучение влияния экстракта на выработку и воспроизведение сложного условного питьевого рефлекса у нормальных животных проводили в Т-образном лабиринте [5]. Опыты выполняли на крысах на фоне водной депривации. Согласно существующим представлениям, поведение животных в условиях этой методики преимущественно отражает функциональное состояние интегративных механизмов, контролирующихся эмоциональной системой достижения цели или поведенческой активации и являющейся филогенетически самой молодой и сложной поведенческой системой мотивационного характера [6]. Лабиринт представляет собой установку, состоящую из одной стартовой камеры и двух систем коридоров, каждая из которых включает в себя по 3 Т-образных колена, спирально соединенных между собой и заканчивающихся целевыми камерами. Предварительно крыс оставляли без воды на одни сутки. Затем в течение 2 дней каждую крысу дважды в день на 20 мин с интервалом в 1 ч индивидуально помещали в лабиринт, где беспорядочно расставляли 6 поилок (первый этап обучения). На третий день животное помещали в стартовую камеру лабиринта, при этом все поилки из последнего убирали. Крыса начинала искать поилку, выходила из стартовой камеры и делала первый поворот в правую или левую часть лабиринта. Направление первого поворота фиксировали и считали предпочтительным направлением поворота для данного животного. Немедленно вслед за этим в целевую камеру, находящуюся в половине лабиринта противоположной, той в, которую крыса повернула в первый раз, ставили поилку. При всех последующих побежках поилку ставили для данной крысы именно в эту целевую камеру. Это делали для того, чтобы при становлении условного рефлекса исключить влияние предпочтительного направления поворота на процесс обучения. Каждое животное тестировали в лабиринте таким образом в течение 15 мин, если оно не находило поилку раньше. Если животное не находило поилки в течение 15 мин, его помещали в целевую камеру, чтобы крыса могла напиться. Крыс, отказавшихся искать поилку в течение первых 4 побежек, из дальнейших экспериментов исключали. В тот же день животное через 1 ч совершало вторую побежку. Таким образом, каждую крысу обучали в течение 5 дней (2 этап обучения - всего 10 побежек). При этом регистрировали: продолжительность питья, характеризующую силу питьевой мотивации, время достижения поилки, количество ошибок (заходы в неправильные рукава лабиринта и тупики), количество вертикальных стоек и груминг. Выделяли также периоды полной неподвижности продолжительностью более 15 с, которые расценивали как фризинговые реакции и их общую продолжительность регистрировали в качестве самостоятельного показателя. О качестве обучения судили по сокращению времени достижения поилки и количества ошибок. Груминг и вертикальные стойки характеризовали смещенную и ориентировочно-исследовательскую активность, соответственно. Отказ от поиска поилки, после двух успешных ее нахождений, отказ от питья после успешного обнаружения поилки оценивали как проявление невротической реакции [7] и считали самостоятельным показателем, характеризуемым величиной отношения числа невротических реакций, наблюдавшихся за время обучения, считая после 2 побежки, к общему числу побежек без двух первых. Об эффекте экстракта судили по усредненной разнице показателей 3-10 побежек, по динамике времени достижения поилки и динамике фризинговых реакций на протяжении второго этапа обучения. Введение экстракта начинали с момента лишения животных воды (всего 8 введений). Для дополнительной оценки условно-рефлекторной деятельности оценивали интенсивность двигательной активности, направленной на достижение поилки, т.е. горизонтальные перемещения по лабиринту в единицу времени (ИДА).

Полученные экспериментальные данные обрабатывали статистически. О достоверности различий судили методом проверки вероятности нулевой гипотезы с использованием t-критерия Стьюдента и критерия Вилкоксона. Различия считали достоверными при р≤0,05 [8].

Высушенные измельченные надземную и подземную части видов рода альфредия (Alfredia), экстракты надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia) и препарат сравнения вводили животным курсом ежедневно в течение пяти дней однократно через зонд в желудок в виде раствора или взвеси в воде, очищенной за 30 мин до тестирования. Высушенные надземную и подземную части видов рода альфредия (Alfredia) измельчали до мелкодисперсного порошка и вводили в дозе 500 мг/кг. Доза экстрактов составила 100 мг/кг. Данная доза соответствует количеству сырья (порошка альфредии) по содержанию экстрактивных веществ. Указанные дозы определены как наиболее активные в предварительных экспериментах. В качестве препарата сравнения (прототип) использовали сухой экстракт корня шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi) в дозе 50 мг/кг. Животные контрольных групп получали эквивалентное количество воды очищенной.

При проведении экспериментальных исследований использовали порошок высушенных надземной и подземной частей альфредии поникшей Alfredia cernua Cass. (далее по тексту - ПАП); порошок высушенных надземной и подземной частей альфредии снежной Alfredia nivea Kar. et Kir. (далее по тексту - ПАС); экстракты надземной и подземной частей альфредии поникшей Alfredia cernua Cass. (далее по тексту - ЭАП); экстракты надземной и подземной частей альфредии снежной Alfredia nivea Kar. et Kir. (далее по тексту - ЭАС), полученных следующими способами:

Пример 1: надземную и подземную части альфредии поникшей (Alfredia cernua Cass.), высушенные воздушным способом, измельчают до мелкодисперсного порошка (влажность 8,3%) (ПАП).

Пример 2: надземную и подземную части альфредии поникшей (Alfredia cernua Cass.), высушенные воздушным способом, измельчают и просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 8,3%). 50 г измельченного сырья помещают в стеклянную колбу, заливают 700 мл воды очищенной и нагревают при температуре 85°С на водяной бане с обратным холодильником в течение 60 мин. Полученное извлечение фильтруют, сырье отжимают. Экстракт упаривают под вакуумом при температуре не выше 60°С досуха (Водный ЭАП).

Пример 3: надземную и подземную части альфредии поникшей (Alfredia cernua Cass.), высушенные воздушным способом, измельчают и просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 8,3%). 50 г измельченного сырья помещают в стеклянную колбу, заливают 700 мл 25% этанола и нагревают при температуре 85°С на водяной бане с обратным холодильником в течение 60 мин. Полученное извлечение фильтруют, сырье отжимают. Экстракт упаривают под вакуумом при температуре не выше 60°С досуха (ЭАП на 25% этаноле).

Пример 4: надземную и подземную части альфредии поникшей (Alfredia cernua Cass.), высушенные воздушным способом, измельчают и просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 8,3%). 50 г измельченного сырья помещают в стеклянную колбу, заливают 700 мл 40% этанола и нагревают при температуре 85°С на водяной бане с обратным холодильником в течение 60 мин. Полученное извлечение фильтруют, сырье отжимают. Экстракт упаривают под вакуумом при температуре не выше 60°С досуха (ЭАП на 40% этаноле).

Пример 5: надземную и подземную части альфредии поникшей (Alfredia cernua Cass.), высушенные воздушным способом, измельчают и просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 8,3%). 50 г измельченного сырья помещают в стеклянную колбу, заливают 700 мл 70% этанола и нагревают при температуре 85°С на водяной бане с обратным холодильником в течение 60 мин. Полученное извлечение фильтруют, сырье отжимают. Экстракт упаривают под вакуумом при температуре не выше 60°С досуха (ЭАП на 70% этаноле).

Пример 6: надземную и подземную части альфредии поникшей (Alfredia cernua Cass.), высушенные воздушным способом, измельчают и просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 8,3%), 50 г измельченного сырья помещают в колбу, заливают 700 мл 95% этанола и нагревают при температуре 80°С на водяной бане с обратным холодильником в течение 60 мин. Полученное извлечение фильтруют, сырье отжимают. Экстракт упаривают под вакуумом при температуре не выше 60°С досуха (ЭАП на 95% этаноле).

Пример 7: надземную и подземную части альфредии снежной (Alfredia nivea Kar. et Kir.), высушенные воздушным способом, измельчают до мелкодисперсного порошка (влажность 7,5%), (ПАС).

Пример 8: надземную и подземную части альфредии снежной (Alfredia nivea Kar. et Kir.), высушенные воздушным способом, измельчают и просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 7,5%). 50 г измельченного сырья помещают в стеклянную колбу, заливают 500 мл воды очищенной и нагревают при температуре 85°С на водяной бане с обратным холодильником в течение 60 мин. Полученное извлечение фильтруют, сырье отжимают. Экстракт упаривают под вакуумом при температуре не выше 60°С досуха (Водный ЭАС).

Пример 9: надземную и подземную части альфредии снежной (Alfredia nivea Kar. et Kir.), высушенные воздушным способом, измельчают и просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 7,5%). 50 г измельченного сырья помещают в стеклянную колбу, заливают 500 мл 25% этанола и нагревают при температуре 85°С на водяной бане с обратным холодильником в течение 60 мин. Полученное извлечение фильтруют, сырье отжимают. Экстракт упаривают под вакуумом при температуре не выше 60°С досуха (ЭАС на 25% этаноле).

Пример 10: надземную и подземную части альфредии снежной (Alfredia nivea Kar. et Kir.), высушенные воздушным способом, измельчают и просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 7,5%). 50 г измельченного сырья помещают в стеклянную колбу, заливают 500 мл 40% этанола и нагревают при температуре 85°С на водяной бане с обратным холодильником в течение 60 мин. Полученное извлечение фильтруют, сырье отжимают. Экстракт упаривают под вакуумом при температуре не выше 60°С досуха (ЭАС на 40% этаноле).

Пример 11: надземную и подземную части альфредии снежной (Alfredia nivea Kar. et Kir.), высушенные воздушным способом, измельчают и просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 7,5%). 50 г измельченного сырья помещают в стеклянную колбу, заливают 500 мл 70% этанола и нагревают при температуре 85°С на водяной бане с обратным холодильником в течение 60 мин. Полученное извлечение фильтруют, сырье отжимают. Экстракт упаривают под вакуумом при температуре не выше 60°С досуха (ЭАС на 70% этаноле).

Пример 12: надземную и подземную части альфредии снежной (Alfredia nivea Kar. et Kir.), высушенные воздушным способом, измельчают и просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 7,5%). 50 г измельченного сырья помещают в колбу, заливают 500 мл 95% этанола и нагревают при температуре 80°С на водяной бане с обратным холодильником в течение 60 мин. Полученное извлечение фильтруют, сырье отжимают. Экстракт упаривают под вакуумом при температуре не выше 60°С досуха (ЭАС на 95% этаноле).

Проведенные исследования показали (табл.1, 2), что при введении изучаемых порошков высушенного растительного сырья и экстрактов видов рода альфредия (Alfredia) максимальные изменения в поведении животных наблюдали по показателям времени питья, количеству невротических реакций, продолжительности фризинговых реакций, индексу условнорефлекторной активности (ИДА) и латентному времени питья. Оценкой качества условнорефлекторной активности в инструментальных условных рефлексах как правило выступает время выполнения рефлекса (в данном случае - латентное время питья) [9]. В проведенных экспериментах наблюдали уменьшение данного показателя под влиянием исследуемых ПАП, ПАС и всех экстрактов в равной мере, что свидетельствует об улучшении выработки рефлекса под их влиянием. При изучении отмечали также существенное сокращение продолжительности фризинговых и количества невротических реакций, увеличение продолжительности питья. Последнее обстоятельство указывает на усиление питьевой мотивации. Экстракт корня шлемника байкальского (прототип) несколько уступал экстрактам и порошкам альфредии (Alfredia) по влиянию на латентное время рефлекса, хотя данное различие представлено лишь в виде тенденции. При этом экстракт шлемника байкальского (прототип) существенно уступал всем изучаемым порошкам высушенного растительного сырья и экстрактам видов рода альфредия (Alfredia) по влиянию на фризинговые реакции. Экстракт шлемника байкальского (прототип) в существенно большей степени повышал питьевую мотивацию, однако в сочетании с более медленным выполнением рефлекса и более высоким уровнем фризинговых реакций. Данный факт свидетельствует о том, что экстракт шлемника байкальского (прототип) уступает по влиянию на процесс выработки условного рефлекса порошкам высушенного растительного сырья и экстрактам видов рода альфредия (Alfredia).

Как показывают экспериментальные исследования, высушенные измельченные надземная и подземная части видов рода альфредия (Alfredia), экстракты надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia) обладают более выраженным ноотропным действием по сравнению с сухим экстрактом корня шлемника байкальского, что приведет к более высокому эффекту в клинической практике.

Положительный эффект достигнут благодаря использованию высушенных измельченных надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia), экстрактов надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia) в качестве ноотропного средства, что позволило расширить арсенал средств растительного происхождения, обладающих ноотропным действием, с повышенным специфическим действием.

Литература

1. Машковский М.Д. Лекарственные средства.- М.: Новая Волна, 2002. - Т.1. - С.86-142.

2. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Литвиненко В.И., Попова Т.П., Суслов Н.И. Шлемник байкальский. Фитохимия и фармакологические свойства. - Томск: Изд-во Томского ун-та, 1994. - С.151-180.

3. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейство Asteraceae (Compositae). - СПб.: Наука, 1993. - С.19-20.

4. Патент РФ №2292214 «Средство, обладающее антиоксидантной активностью» от 27.01.2007 г. / Шилова И.В., Краснов Е.А., Кувачева Н.В., Новожеева Т.П.

5. Азарашвили А.А. Исследование механизмов памяти с помощью физиологически активных соединений. - М.: Наука. - 1981. - 198 с.

6. Крушинский Л.В. Биологические основы рассудочной деятельности. - М.: Изд-во Московского ун-та, 1986. - 276 с.

7. Суслов Н.И. Патогенетическое обоснование психофармакологических эффектов препаратов природного происхождения (экспериментальное исследование): Дисс. докт. мед. наук. - Томск, 1995. - 406 с.

8. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. - Л.: Медицина, 1963. - С.81-147.

9. Мак-Фарленд Д. Поведение животных. Психобиология, этология и эволюция. Пер. с англ. - М.: Мир, 1988. - 520 с.

Таблица 1.Влияние высушенной измельченной надземной и подземной части альфредии поникшей (Alfredia cernua Cass.) и ее экстрактов на показатели побежек крыс при выработке питьевого рефлекса в сравнении с экстрактом корня шлемника байкальского (x±m, n=8)Группа наблюденияПродолжительность питья, сКоличество невротических реакцийПродолжительность фризинговых реакций, сИДАЛатентное время питья, сКонтроль18±71,12±0,22229±217,5±1,0398±45ПАП45±5*#0,45±0,08*68±5*#14,3±1,0*133±35*Водный ЭАП47±7*#0,53±0,09*64±4*#12,5±0,7*124±43*ЭАП на 25% этаноле56±8*#0,44±0,09*59±3*#13,0±0,7*140±32*ЭАП на 40% этаноле51±5*#0,54±0,10*58±3*#15,2±0,9*115±15*ЭАП на 70% этаноле46±8*#0,40±0,08*46±2*#11,3±0,9*145±30*ЭАП на 95% этаноле49±5*#0,39±0,77*40±2*#11,2±1,0*122±27*Прототип78±10*0,24±0,11*106±8*10,1±0,7*161±38*Примечание: * - различия достоверны в отношении контроля; # - различия достоверны по отношению к группе, получавшей прототип; достоверность различий оценивали при р≤0,05.

Таблица 2.Влияние высушенной измельченной надземной и подземной части альфредии снежной Alfredia nivea Kar. et Kir. и ее экстрактов на показатели побежек крыс при выработке питьевого рефлекса в сравнении с экстрактом корня шлемника байкальского (x±m, n=8)Группа наблюденияПродолжительность питья, сКоличество невротических реакцийПродолжительность фризинговых реакций, сИДАЛатентное время питья, сКонтроль18±71,07±0,16256±118,5±1,0420±48ПАС38±4*#0,46±0,09*63±7*#13,0±1,6*136±22*Водный ЭАС42±5*#0,34±0,15*62±9*#14,3±1,1*125±21*ЭАС на 25% этаноле39±4*#0,37±0,11*58±6*#16,5±2,2*118±18*ЭАС на 40% этаноле42±5*#0,44±0,08*78±9*#14,8±1,9*120±21*ЭАС на 70% этаноле45±5*#0,35±0,13*49±8*#13,5±1,1*101±12*ЭАС на 95% этаноле54±5*#0,33±0,09*45±15*#15,5±1,8*103±25*Прототип85±4*0,54±0,12*136±14*13,1±1,7*156±28*Примечание: * - различия достоверны в отношении контроля; # - различия достоверны по отношению к группе, получавшей прототип; достоверность различий оценивали при р≤0,05.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к ноотропному средству. Применение высушенных измельченных надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia), а также водных и водно-этанольных экстрактов их в качестве средства, обладающего ноотропным действием. Вышеописанные средства обладают эффективным ноотропным действием. 2 табл.

Применение высушенных измельченных надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia), а также водных и водно-этанольных экстрактов их в качестве средства, обладающего ноотропным действием.