Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению перевиваемых линий клеток рыб, пригодных для выделения и изучения вирусов рыб разных таксономических групп, разводимых в условиях аквакультуры.
Вирусные болезни - один из главных факторов, тормозящих развитие мировой аквакультуры. На сегодня известны около 400 вирусов рыб, и число их продолжает расти. Десять вирусов выявлено у осетровых рыб за рубежом. Поэтому в настоящее время весьма актуальна задача получения постоянных (перевиваемых) линий клеток, чувствительных к широкому кругу вирусов культивируемых рыб. Сибирский осетр (Acipenser baeri) является одним из наиболее популярных объектов разведения в аквакультуре, однако проведение вирусологических исследований при его заболевании затрудняется острым недостатком клеточных линий, полученных от осетров этого вида.
Известна только одна клеточная линия сибирского осетра, полученная из клеток спинного плавника [1]. Однако чувствительность ее к вирусам рыб не была определена, что не позволяет использовать ее в работах по выделению и изучению вирусов, вызывающих опасные заболевания рыб.
Целью изобретения является получение постоянной линии клеток сибирского осетра, пригодной для проведения вирусологических исследований осетра данного вида и чувствительной к вирусам других видов рыб.
Поставленная цель достигается получением постоянной клеточной линии SSO-2 пула паренхиматозных органов сеголетков сибирского осетра, Acipenser baeri, используемая в вирусологических исследованиях и чувствительная к 7 вирусам разных видов рыб.
Постоянная клеточная линия SSO-2 получена путем многократного пассирования первично-трипсинизированной культуры клеток из пула паренхиматозных органов (почка, печень, селезенка) двух сеголетков сибирского осетра Acipenser baeri.
Постоянная клеточная линия SSO-2 характеризуется следующими признаками.
Культуральные свойства. Жизненный цикл клеточной линии SSO-2, при котором сохраняются ее основные биологические показатели составляет 197 пассажей. При посевной концентрации 35-60×103 клеток/см2 монослой формируется через сутки культивирования при 19-21°С и сохраняется без смены среды в течение 14-20 дней, если через 2-3 суток после его образования инкубацию продолжить при 15°С. Коэффициент пересева 1:4.
Клеточную линию SSO-2 культивируют в монослойных культурах в среде 199 с 10% сыворотки эмбрионов коров. Для диспергирования клеточного монослоя при пересевах используют смесь 0,25% раствора трипсина и 0,02% раствора версена в соотношении 1:1,5 при комнатной температуре. Урожай клеток с флакона площадью 20 см2 составляет около 1 млн клеток.
Для криоконсервирования при температуре -196°С применяют смесь, состоящую из 70% питательной среды 199, 20% сыворотки эмбрионов коров и 10% диметилсульфоксида, при концентрации клеток 1-2×106 в мл. Жизнеспособность клеток по тесту витального окрашивания трипановым синим после хранения в жидком азоте составляет 75-80%. Клетки восстанавливают исходные ростовые и морфологические свойства в течение 2-х пассажей.
Морфологические признаки. Культура SSO-2 растет в виде пучков крупных фибробластоподобных клеток типичной веретенообразной формы. Ядра крупные, овальные, число ядрышек 2-6, чаще 3-4.
Кариологическая характеристика (2n=248±5). Интервал варьирования хромосом от 190 до 371. Модальное число 363 хромосомы. Величина модального класса 38%.
Видовая идентичность подтверждена кариологическими методами.
Контроль клеточной линии SSO-2 на посторонние контаминанты. При исследовании клеточной линии SSO-2 на стерильность (наличие бактерий, грибов, микоплазм) получены отрицательные результаты.
Клеточная линия SSO-2 может быть использована для выделения, накопления, титрования и изучения следующих вирусов рыб: герпесвируса сибирского осетра (SSHV), вирусов весенней виремии карпа (SVCV), вирусной геморрагической септицемии (VHSV), инфекционного некроза гемопоэтической ткани (IHNV), рабдовируса европейского угря (Rhabdovirus anguilla), рабдовируса мальков щуки (PFRV) и рабдовируса европейской озерной кумжи (ELTV).
Постоянная клеточная линия SSO-2 депонирована в Специализированной коллекции перевиваемых соматических культур клеток сельскохозяйственных и промысловых животных Российской коллекции культур клеток при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии (СХЖ РАСХН) под №67.
Литература
1. Fontana F., Rossi R., Lanfredi M., Arlati G., Bronzi P. Cytogenetic characterization of cell lines from three sturgeon species. // Caryologia. - 1997. - V. 50. - N 1. - P. 91-95.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
ПОСТОЯННАЯ ЛИНИЯ КЛЕТОК SSO-3 ПУЛА ПАРЕНХИМАТОЗНЫХ ОРГАНОВ СИБИРСКОГО ОСЕТРА ACIPENSER BAERI | 2007 |
|
RU2348688C1 |
ПОСТОЯННАЯ ЛИНИЯ КЛЕТОК ИЗ ПЛАВНИКОВ СИБИРСКОГО ОСЕТРА (Acipenser baeri), ИСПОЛЬЗУЕМАЯ ДЛЯ ВИРУСОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ РЫБ | 2012 |
|
RU2488632C1 |
Способ культивирования биомассы миобластов, полученных из мышц стерляди | 2022 |
|
RU2794773C1 |
ЛИНИЯ КЛЕТОК ICO ЯИЧНИКОВ НЕПОЛОВОЗРЕЛОГО КАРПА (CYPRINUS CARPIO) ДЛЯ ВИРУСОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ | 2007 |
|
RU2353650C1 |
ПОСТОЯННАЯ ЛИНИЯ КЛЕТОК OMG ИЗ ГОНАД РАДУЖНОЙ ФОРЕЛИ (ONCORHYNCHUS MYKISS) | 2012 |
|
RU2495120C1 |
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ИХТИОВИРУСОВ ИЗ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ОТ РЫБ ДЛЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И МОНИТОРИНГОВЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ | 2009 |
|
RU2402774C1 |
СПОСОБ КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЯ СПЕРМЫ ОСЕТРОВЫХ РЫБ | 2006 |
|
RU2317703C1 |
ШТАММ ДИПЛОИДНЫХ КЛЕТОК СИНОВИАЛЬНОЙ МЕМБРАНЫ ПОРОСЕНКА Sus scrofa, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ВИРУСОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ | 2012 |
|
RU2506310C1 |
ШТАММ КЛОНАЛЬНОЙ ПЕРЕВИВАЕМОЙ ЛИНИИ КЛЕТОК ПОЧКИ САЙГИ Saiga tatarica ПС/с4, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ВИРУСОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ | 2007 |
|
RU2339693C1 |
ШТАММ ДИПЛОИДНЫХ КЛЕТОК СИНОВИАЛЬНОЙ МЕМБРАНЫ ЯГНЕНКА Ovis aries, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ВИРУСОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ | 2012 |
|
RU2507255C1 |
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению перевиваемых линий клеток рыб, пригодных для выделения и изучения вирусов рыб разных таксономических групп. Постоянная клеточная линия SSO-2 пула паренхиматозных органов сеголетков сибирского осетра, Acipenser baeri, депонирована в Специализированной коллекции перевиваемых соматических культур клеток сельскохозяйственных и промысловых животных Российской коллекции культур клеток при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии (СХЖ РАСХН) под №67. Линия может быть использована как тест-культура для выделения, накопления, титрования и изучения герпесвируса сибирского осетра (SSHV), вирусов весенней виремии карпа (SVCV), вирусной геморрагической септицемии (VHSV), инфекционного некроза гемопоэтической ткани (IHNV), рабдовируса европейского угря (Rhabdovirus anguilla), рабдовируса мальков щуки (PFRV) и рабдовируса европейской озерной кумжи (ELTV).
Постоянная клеточная линия SSO-2 пула паренхиматозных органов сеголетков сибирского осетра, Acipenser baeri, используемая в вирусологических исследованиях и чувствительная к 7 вирусам разных видов рыб, депонирована в Специализированной коллекции перевиваемых соматических культур клеток сельскохозяйственных и промысловых животных Российской коллекции культур клеток при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии (СХЖ РАСХН) под № 67.
FONTANA F | |||
et al., "Cytogenetic characterization of cell lines from three sturgeon species", Caryologia | |||
Электрическое сопротивление для нагревательных приборов и нагревательный элемент для этих приборов | 1922 |
|
SU1997A1 |
Авторы
Даты
2009-03-10—Публикация
2007-08-28—Подача