СПОСОБ ГИСТОХИМИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛЮМИНИЯ В ОРГАНАХ И ТКАНЯХ ЖИВОТНЫХ Российский патент 2009 года по МПК G01N33/84 

Изобретение относится к судебно-ветеринарной экспертизе и может быть использовано для посмертной диагностики отравлений животных соединениями алюминия.

В настоящее время алюминий и его соединения широко используются в медицине и ветеринарии (в качестве антисептических, антацидных, сорбирующих и эрготропных средств, в составе минеральных добавок, фунгицидов и зооцидов), для очистки питьевой воды, в пищевой промышленности. В организм животных алюминий поступает в основном с кормами, водой и лекарственными препаратами.

Признаки отравления соединениями алюминия включают нарушение двигательной активности, судороги, снижение или потерю памяти, психотические реакции, нарушение обмена фосфора, кальция, магния, железа и, как следствие, развитие рахита, анемии. В экспериментах на животных было подтверждено нейротоксическое и мутагенное действие алюминия. Кроме того, растет число побочных токсических эффектов при использовании алюминия в составе лекарственных препаратов, что также ставит под сомнение безопасность этого металла.

Для контроля содержания алюминия предложен ряд методов, из которых наиболее широко используются фотометрические, так как они довольно просто осуществимы в условиях областных и районных ветеринарных лабораторий, а также в лабораториях санитарно-эпидемиологического надзора. Также алюминий выявляют гистохимическими методами.

Известен гистохимический метод для выявления алюминия по Ирвину с аурином. Для окраски необходимо изготовить гистологические срезы, провести их через ксилол и спирты до воды, окрашивать в забуференном растворе алюминона при 75°С в течение 5-10 минут, сполоснуть в дистиллированной воде, затем необходимо дифференцировать в растворе карбоната аммония в течение 3-5 секунд, промыть дистиллированной водой, дополнительно окрасить 1% водным раствором метиленового синего, сполоснуть дистиллированной водой, обезводить в спиртах, просветлить в ксилоле и заключить в подходящую постоянную среду. В результате алюминий окрашивается в красный цвет (Э.Пирс. Гистохимия. - М. - Изд-во Иностр. литер. - 1962. - c.873).

Недостатком данного метода является неизбирательность, т.к. ионы железа (III), всегда присутствующие в органах и тканях, также окрашиваются в красный цвет, что дает недостоверную информацию о наличии алюминия.

Целью изобретения является повышение селективности метода. Поставленная цель достигается тем, что образцы тканей и органов фиксируют в 5% нейтральном растворе формальдегида, готовят парафиновые срезы и доводят их до воды. Затем обрабатывают срезы 3% раствором аскорбиновой кислоты. Перед окраской в 2% растворе алюминона срезы выдерживают в буфере с рН 5,2. Окрашивают при температуре 75°С в течение 5-15 мин на водяной бане, затем быстро споласкивают в холодной дистиллированной воде, дифференцируют в растворе, состоящем из 3,6 части буфера и 10 частей 1,6 М (NH₄)₂СО₃ (рН 7,2), снова споласкивают в дистиллированной воде и докрашивают 0,1% раствором метиленового синего. Обезвоживают в спиртах, просветляют в ксилоле и заключают в бальзам. При обработке гистологических срезов 3% раствором аскорбиновой кислоты ионы Fe (III) восстанавливаются до Fe (II), последнее не способно окрашиваться ауринтрикарбоновой кислотой, что и делает данный метод более избирательным и достоверным. Окраска на водяной бане способствует лучшей сохранности срезов на предметных стеклах. Выделение буфера в самостоятельный раствор и предварительная обработка им тканей перед окрашиванием раствором ауринтрикарбоновой кислоты способствует созданию оптимальной рН среды, при которой происходит окрашивание срезов.

Предлагаемый способ дает возможность осуществить контроль над качеством продуктов животного происхождения при использовании в рационе животных подкормок и ветеринарных препаратов на основе соединений алюминия, а также при случайных отравлениях осуществлять посмертную диагностику токсикоза.

Способ обладает достаточно высокой чувствительностью, относительно прост в исполнении, значительно увеличивает достоверность гистологической картины.

Общие с прототипом признаки:

1. Обработка буферным раствором.

2. Выявление алюминия раствором алюминона.

3. Докраска метиленовым синим.

Отличительные признаки предлагаемого способа:

1. Гистологические срезы обрабатывают 3% раствором аскорбиновой кислоты.

2. Буфер выделяют в самостоятельный раствор.

3. Окраску алюминоном проводят на водяной бане.

Способ осуществляют следующим образом:

Образцы тканей и органов фиксируют в 5% нейтральном растворе формальдегида, готовят парафиновые срезы и доводят их до воды. Затем обрабатывают срезы 3% раствором аскорбиновой кислоты. Перед окраской в 2% растворе алюминона срезы выдерживают в буфере с рН 5,2. Состав буфера: 3,8 части 5 М (267,5 г/л) NH₄Cl, 3,8 части 5 М (385,3 г/л) NH₄ОСОСН₃ и 1 часть 6 н. (500 мл/л) HCI. Окрашивают при температуре 75°С в течение 5-15 мин на водяной бане, затем быстро споласкивают в холодной дистиллированной воде, дифференцируют в растворе, состоящем из 3,6 части буфера и 10 частей 1,6 М (15,36%) (NH₄)₂СО₃ (рН 7,2), снова споласкивают в дистиллированной воде и докрашивают 0,1% раствором метиленового синего. Обезвоживают в спиртах, просветляют в ксилоле и заключают в бальзам.

Изобретение относится к области судебно-ветеринарной экспертизы и может быть использовано для посмертной диагностики случайных отравлений соединениями алюминия. Сущность способа определения алюминия в органах и тканях животных: гистохимическое выявление алюминия осуществляют раствором алюминона при температуре 75°С в течение 5-10 мин с использованием буферной смеси с рН 5,2, содержащей хлорид аммония, ацетат аммония и HCl, с последующей дифференциацией в растворе карбоната аммония в течение 3-5 сек, и дополнительным окрашиванием 1% водным раствором метиленового синего, при этом гистохимические срезы перед окраской предварительно обрабатывают 3% раствором аскорбиновой кислоты, затем выдерживают в буферной смеси, после чего проводят окраску алюминоном на водяной бане. Использование способа позволяет повысить селективность метода определения алюминия при совместном присутствии его с ионами железа (III) в органах и тканях животных.

Способ определения алюминия в органах и тканях животных, включающий гистохимическое выявление раствором алюминона при температуре 75°С в течение 5-10 мин с использованием буферной смеси с рН 5,2, содержащей хлорид аммония, ацетат аммония и HCl, с последующей дифференциацией в растворе карбоната аммония в течение 3-5 с, и дополнительное окрашивание 1%-ным водным раствором метиленового синего, отличающийся тем, что гистохимические срезы перед окраской предварительно обрабатывают 3%-ным раствором аскорбиновой кислоты, затем выдерживают в буферной смеси, после чего проводят окраску алюминоном на водяной бане.